【技术实现步骤摘要】
本专利技术具体涉及一种果糖二磷酸钠内毒素检验方法。
技术介绍
1、果糖二磷酸钠，别名1,6二磷酸果糖，英文名：fructose diphosphate sodium，是存在于人体内的细胞代谢物，能调节葡萄糖代谢中多种酶系的活性，改善细胞缺氧、缺血的状态，有利于受损肝细胞的恢复。外源性的果糖二磷酸钠，能通过激活磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶的活性，使细胞内三磷酸腺苷和磷酸肌酸的浓度增加，促进钾离子内流，有益于缺血、缺氧状态下细胞的能量代谢和葡萄糖的利用，从而使缺血心肌减轻损伤。果糖二磷酸钠是冠心病心绞痛、急性心肌梗死、心力衰竭和心律失常等疾病的辅助治疗药物，近年也用于高钾血症引致的心肌损伤、急性成人呼吸窘迫综合征、扩张型心肌病、肠道外营养、心脏外科体外循环等的辅助治疗，也有较好疗效。此外，它还可用于肝炎的对症治疗中，减少肝细胞的损伤。
2、口服级果糖二磷酸钠在出口时需要按照出口国标准检验内毒素，但是果糖二磷酸钠国家药品标准ws1-(x-062)-2001z-2011中并未规定果糖二磷酸钠非无菌产品需要检验内毒素，因此通常根据药典规定的内毒素检验方法(中国药典2020版四部1143细菌内毒素检查法)进行内毒素检测，但是实践中发现，采用内毒素检验方法时出现供试品阳性不凝固的假阴性现象，即便将果糖二磷酸钠稀释至较低的浓度，供试品阳性依然不凝固，可见果糖二磷酸钠对鲎试剂有干扰。因此，需要开发一种针对果糖二磷酸钠的高可靠性的内毒素检验方法。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题
2、为达到上述目的，本专利技术采用的技术方案是：
3、一种果糖二磷酸钠内毒素检验方法，其包括待检测的果糖二磷酸钠样品的前处理步骤和内毒素检验步骤，所述的前处理步骤为将待检测的果糖二磷酸钠样品与细菌内毒素检查用水在无热原的超滤离心管的内管中混合，经离心去除果糖二磷酸钠，内毒素截留在所述的超滤离心管的内管中，使用细菌内毒素检查用水洗涤所述的超滤离心管的内管，得到的洗涤液用于所述的内毒素检验步骤。
4、优选地，所述的无热原的超滤离心管的截留分子量为9～10.5kd。
5、优选地，所述的离心的条件为3500～4500转离心10～20分钟。
6、优选地，所述的洗涤液经细菌内毒素检查用水稀释后用于所述的内毒素检验步骤。
7、优选地，所述的内毒素检验步骤按照中国药典2020年版四部通则1143细菌内毒素检查法中的凝胶法进行。
8、根据一些具体地实施方式，所述的果糖二磷酸钠内毒素检验方法包括如下步骤：
9、1)取待测样品加入无热源超滤离心管的内管中，向无热源超滤离心管的内管中加入细菌内毒素检查用水，3500～4500转离心10～20分钟，去除内管和外管之间的细菌内毒素检查用水，再向无热源超滤离心管的内管中加入细菌内毒素检查用水，3500～4500转离心10～20分钟，去除内管和外管之间的细菌内毒素检查用水，用细菌内毒素检查用水冲洗无热源超滤离心管的内管的管壁得到待检测液；
10、2)使用细菌内毒素检查用水将待检测液稀释50倍配制1：50待检测液作为供试品溶液；
11、3)按照中国药典2020年版四部通则1143细菌内毒素检查法(凝胶法)检验供试品溶液是否含有内毒素。
12、优选地，所述的步骤1)中，每次细菌内毒素检查用水的加入量与待测样品的质量比为8～12ml/g。
13、优选地，所述的步骤3)包括：
14、(1)配制供阳对照溶液：取细菌内毒素工作标准品，用1：50待检测液稀释细菌内毒素工作标准品的浓度至0.03eu/ml。
15、配制阳性对照溶液(内毒素标准品+细菌内毒素检查用水)：取细菌内毒素工作标准品，用细菌内毒素检查用水稀释至0.03eu/ml作为阳性对照品。
16、(2)分别取供试品溶液、供阳对照溶液、阳性对照溶液、细菌内毒素检查用水与等体积的鲎试剂混合混匀后，垂直放入37±1℃水浴中，保温60±2分钟，将试管从恒温水浴中取出，缓缓倒转180°，若试管内形成凝胶，并且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性；若未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性。保温和拿取试管过程中应避免受到振动造成的假阴性结果。
17、由于上述技术方案运用，本专利技术与现有技术相比具有下列优点：
18、本专利技术通过使用无热原的超滤离心管对果糖二磷酸钠待测样品进行前处理，经离心去除待测样品中的果糖二磷酸钠，而热原(细菌内毒素)遗留在超滤离心管的内管中，然后使用细胞内毒素检查用水洗涤超滤离心管的内管，得到的洗涤液作为待测液，对待测液进行内毒素检验，有效避免了果糖二磷酸钠对内毒素检验试剂鲎试剂的干扰，进而避免了假阴性结果，检测结果更加准确、可靠。
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1.一种果糖二磷酸钠内毒素检验方法，其特征在于，其包括待检测的果糖二磷酸钠样品的前处理步骤和内毒素检验步骤，所述的前处理步骤为将待检测的果糖二磷酸钠样品与细菌内毒素检查用水在无热原的超滤离心管的内管中混合，经离心去除果糖二磷酸钠，内毒素截留在所述的超滤离心管的内管中，使用细菌内毒素检查用水洗涤所述的超滤离心管的内管，得到的洗涤液用于所述的内毒素检验步骤。
2.根据权利要求1所述的果糖二磷酸钠内毒素检验方法，其特征在于，所述的无热原的超滤离心管的截留分子量为9～10.5KD。
3.根据权利要求1所述的果糖二磷酸钠内毒素检验方法，其特征在于，所述的离心的条件为3500～4500转离心10～20分钟。
4.根据权利要求1所述的果糖二磷酸钠内毒素检验方法，其特征在于，所述的洗涤液经细菌内毒素检查用水稀释后用于所述的内毒素检验步骤。
5.根据权利要求1所述的果糖二磷酸钠内毒素检验方法，其特征在于，所述的内毒素检验步骤按照中国药典2020年版四部通则1143细菌内毒素检查法中的凝胶法进行。
6.根据权利要求1所述的果糖二磷酸钠内毒素
7.根据权利要求6所述的果糖二磷酸钠内毒素检验方法，其特征在于，所述的步骤1)中，每次细菌内毒素检查用水的加入量与待测样品的质量比为8～12ml/g。
8.根据权利要求6所述的果糖二磷酸钠内毒素检验方法，其特征在于，所述的步骤3)包括：
...【技术特征摘要】
1.一种果糖二磷酸钠内毒素检验方法，其特征在于，其包括待检测的果糖二磷酸钠样品的前处理步骤和内毒素检验步骤，所述的前处理步骤为将待检测的果糖二磷酸钠样品与细菌内毒素检查用水在无热原的超滤离心管的内管中混合，经离心去除果糖二磷酸钠，内毒素截留在所述的超滤离心管的内管中，使用细菌内毒素检查用水洗涤所述的超滤离心管的内管，得到的洗涤液用于所述的内毒素检验步骤。
2.根据权利要求1所述的果糖二磷酸钠内毒素检验方法，其特征在于，所述的无热原的超滤离心管的截留分子量为9～10.5kd。
3.根据权利要求1所述的果糖二磷酸钠内毒素检验方法，其特征在于，所述的离心的条件为3500～4500转离心10～20分钟。
4.根据...
【专利技术属性】
技术研发人员：张红，
申请(专利权)人：张家港市华天药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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