【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种利用液液萃取-苯硼酸衍生化法快速测定酱油中氯丙二醇含量的方法。
技术介绍
1、氯丙二醇(mcpd)类化合物主要是植物性蛋白在盐酸催化及高温条件下水解产生的污染物，包括3-氯-1，2-丙二醇(3-mcpd)和2-氯-1，3-丙二醇(2-mcpd)。3-mcpd对生物体具有肾脏、生殖、神经、免疫、致特变性等多种毒性，被国际癌症组织(iarc)归为2b级级致癌物。许多国家和地区对3-mcpd作了明确的限量规定，2-mcpd虽未有限量要求，但因与3-mcpd结构相似，其引起的健康风险也不容忽视。酱油作为一种传统的液态调味品，对其中mcpd含量的监控与检测具有十分重要的意义。
2、目前，酱油中氯丙醇类化合物的检测方法主要采用硅藻土固相支撑液液萃取富集净化，七氟丁酰基咪唑衍生化，再进行气相色谱-质谱法、气相色谱-串联质谱法分析。采用固相支撑液液萃取技术需要“上样-淋洗-洗脱”等繁琐的操作步骤，不利于日常批量快速检测，且目前已有的检测方法存在提取效率低，所用试剂、耗材价格昂贵，对反应条件要求严格及操作繁琐等问题。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种利用液液萃取-苯硼酸衍生化法快速测定酱油中氯丙二醇含量的方法。本专利技术利用液液萃取-苯硼酸衍生化法实现酱油中氯丙二醇的快速测定；所述方法具有快速高效，灵敏度高，准确度好的优点，为酱油中mcpd的快速批量检测和暴露风险研究提供技术支撑。
2、为实现上述目的，
3、一种利用液液萃取-苯硼酸衍生化法快速测定酱油中氯丙二醇含量的方法，所述方法包括以下步骤：
4、在酱油中加入混合内标标准工作液ⅰ，加入乙腈，得到混合溶液，进行沉淀反应，得到上清液，加入苯硼酸饱和溶液，进行衍生化反应，注入气相色谱-串联质谱联用仪，进行多反应监测反应，用内标法以标准曲线计算酱油中mcpd的含量；
5、所述酱油含有3-氯-1,2-丙二醇及2-氯-1,3-丙二醇；
6、所述混合内标标准工作液ⅰ含有d5-3-氯-1,2-丙二醇及d5-2-氯-1,3-丙二醇。
7、进一步地，所述沉淀反应包括以下步骤：将所述混合溶液进行涡旋提取2min，加入氯化钠，8000r/min离心3min，得到上清液；
8、所述衍生化反应包括以下步骤：在所述上清液中，加入苯硼酸饱和溶液，混匀，40℃氮吹，加入异辛烷，溶解，过膜，得到待测液。
9、进一步地，所述酱油，混合内标标准工作液ⅰ，乙腈及苯硼酸饱和溶液的质量体积比为5g：50μl：10ml：200μl。
10、进一步地，所述苯硼酸饱和溶液由苯硼酸溶解于无水乙醚得到；所述苯硼酸与无水乙醚的质量体积比为0.125g：10ml。
11、进一步地，所述混合内标标准工作液ⅰ的制备包括以下步骤：
12、取d5-3-氯-1,2-丙二醇标准品，加入乙酸乙酯，得到浓度为1000mg/l的d5-3-氯-1,2-丙二醇内标储备液；
13、取d5-2-氯-1,3-丙二醇标准品，加入乙酸乙酯，得到浓度为1000mg/l的d5-2-氯-1,3-丙二醇内标储备液；
14、将所述d5-3-氯-1,2-丙二醇内标储备液与所述d5-2-氯-1,3-丙二醇内标储备液混合，得到浓度为10mg/l的混合内标标准工作液ⅰ。
15、进一步地，所述多反应监测反应中，3-氯-1,2-丙二醇的定量离子对为196→147；d5-3-氯-1,2-丙二醇的定量离子对为201→150；2-氯-1,3-丙二醇的定量离子对为196→104；d5-2-氯-1,3-丙二醇的定量离子对为201→107。
16、进一步地，所述气相色谱-串联质谱联用仪中气相条件为：两根agilent19091s-431ui hp-5ms毛细管柱(15m×250μm×0.25μm)串联，色谱柱1接进样口与反吹口(psd)，柱流量为0.7ml/min；色谱柱2接反吹口(psd)与质谱检测器，柱流量为1.0ml/min；载气为高纯氦气(纯度99.999％)；进样口温度250℃，进样方式为不分流进样，进样量1μl；升温程序为50℃保持1min，以10℃/min的速率升温至150℃，再以5℃/min的速率升温至175℃，采用柱后反吹，后运行温度310℃，反吹时间15min。
17、进一步地，所述气相色谱-串联质谱联用仪中质谱条件为：电离方式为电子轰击离子源(ei)，采集模式为动态多反应离子监测(dmrm)模式，电离能量70ev；离子源温度230℃，四极杆温度150℃，传输线温度280℃，碰撞气为高纯氮气(纯度99.999％)。
18、有益效果：
19、1、本专利技术提供了一种利用液液萃取-苯硼酸衍生化法快速测定酱油中氯丙二醇含量的方法；所述方法采用气相色谱-串联质谱联用检测，建立乙腈提取环境下的苯硼酸(pba)衍生化反应体系，并对提取及衍生化条件进行优化，提供了一种前处理简单快捷的酱油中mcpd的分析方法。
20、2、采用本专利技术提供的检测方法测定酱油中氯丙二醇含量，结果表明，氯丙二醇质量浓度在2～400ng/ml范围内线性关系良好，线性相关系数均大于0.999，检出限为0.0005mg/kg，定量限为0.002mg/kg；在酱油中进行0.002，0.020，0.100和0.400mg/kg 4水平6平行加标回收实验，回收率在90.5～100.7％之间，相对标准偏差(rsd)为1.8～4.6％；所述方法能够满足酱油中氯丙二醇的检测要求。
21、3、本专利技术提供的方法具有快速高效、灵敏度高、准确度好的优点，为酱油中mcpd的快速批量检测和暴露风险研究提供技术支撑。
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1.一种利用液液萃取-苯硼酸衍生化法快速测定酱油中氯丙二醇含量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：在酱油中加入混合内标标准工作液Ⅰ，加入乙腈，得到混合溶液，进行沉淀反应，得到上清液，加入苯硼酸饱和溶液，进行衍生化反应，注入气相色谱-串联质谱联用仪，进行多反应监测反应，用内标法以标准曲线计算酱油中氯丙二醇的含量；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述沉淀反应包括以下步骤：将所述混合溶液进行涡旋提取2 min，加入氯化钠，8000 r/min离心3 min，得到上清液；
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述苯硼酸饱和溶液由苯硼酸溶解于无水乙醚得到；所述苯硼酸与无水乙醚的质量体积比为0.125 g：10 mL。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述混合内标标准工作液Ⅰ的制备包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多反应监测反应中，3-氯-1,2-丙二醇的定量离子对为196→147；D5-3-氯-1,2-丙二醇的定量离子对为201→150；2-氯-1,3-丙二醇的定量离子对为196→
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述气相色谱-串联质谱联用仪中气相条件为：两根Agilent 19091S-431UI HP-5MS毛细管柱（15 m×250 μm×0.25 μm）串联，色谱柱1接进样口与PSD反吹口，柱流量为0.7 mL/min；色谱柱2接PSD反吹口与质谱检测器，柱流量为1.0 mL/min；载气为高纯氦气，氦气纯度99.999%；进样口温度250℃，进样方式为不分流进样，进样量1 μL；升温程序为50℃保持1 min，以10℃/min的速率升温至150℃，再以5℃/min的速率升温至175℃；采用柱后反吹，后运行温度310℃，反吹时间15 min。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述气相色谱-串联质谱联用仪中质谱条件为：电离方式为电子轰击离子源，采集模式为动态多反应离子监测模式，电离能量70 eV，离子源温度230℃，四极杆温度150℃，传输线温度280℃，碰撞气为高纯氮气，氦气纯度99.999%。
...【技术特征摘要】
1.一种利用液液萃取-苯硼酸衍生化法快速测定酱油中氯丙二醇含量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：在酱油中加入混合内标标准工作液ⅰ，加入乙腈，得到混合溶液，进行沉淀反应，得到上清液，加入苯硼酸饱和溶液，进行衍生化反应，注入气相色谱-串联质谱联用仪，进行多反应监测反应，用内标法以标准曲线计算酱油中氯丙二醇的含量；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述沉淀反应包括以下步骤：将所述混合溶液进行涡旋提取2 min，加入氯化钠，8000 r/min离心3 min，得到上清液；
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述苯硼酸饱和溶液由苯硼酸溶解于无水乙醚得到；所述苯硼酸与无水乙醚的质量体积比为0.125 g：10 ml。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述混合内标标准工作液ⅰ的制备包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多反应监测反应中，3-氯-1,2-丙二醇的定量离子对为196→147；d5-3-氯-1,2-丙二醇的定量离子对为201→150；2-氯-1,3-丙二醇...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁秀清，刘艳明，王艳丽，陈倩倩，张卉，陈克云，李芳芳，田其燕，鞠香，李洁，
申请(专利权)人：山东省食品药品检验研究院，
类型：发明
国别省市：
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