【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及基于减毒呼肠孤病毒的疫苗组合物及其用途。本申请要求基于2021年3月23日提交的韩国专利申请第10-2021-0037160号和2022年3月22日提交的韩国专利申请第10-2022-0035224号的优先权。这些申请的说明书和附图中公开的全部内容通过引用并入本文。
技术介绍
1、病毒是由遗传物质和蛋白质构成的小的非细胞生物体，并且存在不同类型的病毒。例如，病毒可以是在宿主细胞核内复制的dna病毒或在细胞的细胞质内复制的rna病毒。病毒可以是双链或单链的。此外，单链rna病毒可以是正链(+，有义)或负(-)链。这些不同类型的病毒引起各种病毒感染。
2、当致病病毒进入生物体时，就会发生病毒感染。一旦病毒进入生物体，病毒就会将自身附着在细胞上，对细胞进行重新编程以复制新病毒，直到细胞破裂或死亡，从而使病毒在人类和动物中引起各种感染性疾病并迅速传播。由病毒引起的感染性疾病通常包括感冒、流感和疣。然而，病毒也可引起严重疾病，如获得性免疫缺陷综合症(aids)、冠状病毒病19(covid-19)、丙型肝炎、结核病、严重急性呼吸综合征(sars)、中东呼吸综合征(mers)、天花、疱疹、出血热、脊髓灰质炎、麻疹、流行性腮腺炎、风疹、轮状病毒引起的婴儿肠炎和诺如病毒引起的非细菌性急性胃肠炎。
3、如今，针对病毒感染和限制其传播的最重要的保护措施是疫苗接种。现代疫苗主要诱导针对表面病毒抗原的抗体的形成。疫苗的功效直接取决于疫苗中所含病毒的抗原结构与人群中传播的毒株之间的匹配性。大多数病毒的表面蛋白都会经历一
4、呼肠孤病毒(呼吸道肠道孤儿病毒)是一种无包膜病毒，包含在普通环境中普遍存在的10个双链rna片段的完整基因组，并且是一种无症状病毒，在具有正常免疫功能的宿主中不会表现出症状。已知人类中的感染是轻微的，据信仅限于上呼吸道和胃肠道。
5、同时，反向遗传学技术涉及验证病毒的整个基因组序列以产生重组人工病毒。最大的优点是病毒可以被重组表达、操纵和人工合成，从而可以按预期对病毒基因进行各种操纵。通过将诸如嵌合病毒、密码子对去优化和诱变等各种机制加载到病毒基因上，可以产生修饰的新病毒。经典的遗传学方法主要涉及在给定生物体的基因组中随机诱导突变，然后从突变中发现表现出感兴趣性状的基因，这种方法费时费力，并且缺点是不容易分离出不具有强性状修饰作用的基因突变。随着功能基因组学的最新发展，基因组水平突变已在包括酵母在内的几种模式生物中可用。相比之下，反向遗传学技术可以通过直接引入和探索每个基因突变可能引起的潜在性状变异，来提高基因探索的识别能力。反向遗传学技术的优点是能够根据需要人为地操纵病毒并最大限度地发挥其特性，使其成为疫苗开发中非常有用的技术。
6、对此，本专利技术的专利技术人旨在开发一种基于呼肠孤病毒的疫苗平台，其使用反向遗传学技术通过“快速交换”方法将表位序列插入减毒呼肠孤病毒σ-1蛋白中，其中特定的氨基酸序列位置被截短，以将癌症或感染性疾病的表位融合并表达到减毒呼肠孤病毒σ-1蛋白中。
技术实现思路
1、[技术问题]
2、本专利技术的专利技术人发现，在第251至455位氨基酸被截短的减毒呼肠孤病毒σ-1蛋白中，通过经由替换或插入在截短的氨基酸位点引入癌症或感染性疾病的各种表位的氨基酸序列，引入的表位在细胞中稳定表达。这种表达导致产生中和抗体或诱导细胞介导的免疫，从而表现出免疫应答。基于此，完成了本专利技术。
3、因此，本专利技术涉及提供一种多肽，其包含减毒呼肠孤病毒σ-1蛋白的氨基酸序列；和诱导癌症或感染性疾病的表位的氨基酸序列，以及编码所述多肽的多核苷酸。
4、本专利技术还涉及提供基于减毒呼肠孤病毒的病毒载体，其包含编码所述多肽的多核苷酸。
5、本专利技术还涉及提供基于减毒呼肠孤病毒的疫苗组合物及其制备方法，所述疫苗组合物包含所述多肽、编码所述多肽的多核苷酸或病毒载体作为活性成分。
6、然而，本专利技术要解决的技术问题并不限于上述问题，本领域普通技术人员从以下描述中将充分理解本文中未描述的其它问题。
7、[技术方案]
8、为实现本专利技术的目的，本专利技术提供了一种多肽，其包含减毒呼肠孤病毒σ-1蛋白的氨基酸序列；和引起癌症或感染性疾病的抗原的表位的氨基酸序列，
9、其中所述多肽包含在从n末端起第251个氨基酸位置截短的所述减毒呼肠孤病毒σ-1蛋白的第1至第250位氨基酸序列；和
10、插入所述减毒呼肠孤病毒σ-1蛋白的氨基酸序列的n末端第251位及以后的氨基酸位置的引起癌症或感染性疾病的抗原的表位的氨基酸序列。
11、此外，本专利技术提供了基于减毒呼肠孤病毒的病毒载体，其包含编码所述多肽的多核苷酸。
12、另外，本专利技术提供了基于减毒呼肠孤病毒的疫苗组合物，其包含所述多肽、编码所述多肽的多核苷酸或病毒载体作为活性成分。
13、进一步地，本专利技术提供了一种制备基于减毒呼肠孤病毒的疫苗组合物的方法，其包括以下步骤：
14、a)制备包含编码由seq id no:1所示的减毒呼肠孤病毒σ-1蛋白的碱基序列的反向遗传学病毒载体；和
15、b)将多核苷酸引入所述载体中，其中所述多核苷酸编码减毒呼肠孤病毒σ-1蛋白和引起癌症或感染性疾病的抗原的表位，其通过在编码所述σ-1蛋白的碱基序列的第763至1416位处替换或插入碱基从而包含编码所述引起癌症或感染性疾病的抗原的表位的碱基序列，而表达为融合蛋白。
16、在本专利技术的一个实施方案中，减毒呼肠孤病毒σ-1蛋白可以由seq id no:1的氨基酸序列表示，但不限于此。
17、在本专利技术的另一个实施方案中，减毒呼肠孤病毒σ-1蛋白可以由seq id no:2所示的碱基序列编码，但不限于此。
18、在本专利技术的另一个实施方案中，表位可以在减毒呼肠孤病毒σ-1蛋白的羧基末端形成或构成融合蛋白，但不限于此。
19、在本专利技术的另一个实施方案中，在所述表位的氨基酸序列之前和之后，还可以包含选自由接头(seq id no:11)、myc蛋白(seq id no:12)、flag蛋白(seq id no:13)和2a肽组成的组中的一个或多个氨基酸序列，但不限于此。
20、在本专利技术的另一个实施方案中，癌症可以是选自由以下组成的组中的一种或多种：肝癌、神经胶质瘤、肉瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、黑色素瘤、肺癌、头颈癌、卵巢癌、膀胱癌、胃癌、食道癌、胆管癌、胰腺癌、宫颈癌、皮肤癌、淋巴瘤、甲状腺癌、骨髓癌、子宫本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种多肽，包含减毒呼肠孤病毒σ-1蛋白的氨基酸序列；和引起癌症或感染性疾病的抗原的表位的氨基酸序列，
2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述减毒呼肠孤病毒σ-1蛋白由SEQ ID NO:1的氨基酸序列表示。
3.根据权利要求2所述的多肽，其中所述减毒呼肠孤病毒σ-1蛋白由SEQ ID NO:2所示的碱基序列编码。
4.根据权利要求1所述的多肽，其中所述表位在所述减毒呼肠孤病毒σ-1蛋白的羧基末端形成或构成融合蛋白。
5.根据权利要求1所述的多肽，其在所述表位的氨基酸序列之前和之后还包含选自由接头(SEQ ID NO:11)、Myc蛋白(SEQ ID NO:12)、FLAG蛋白(SEQ ID NO:13)和2A肽组成的组中的一个或多个氨基酸序列。
6.根据权利要求1所述的多肽，其中所述癌症是选自由以下组成的组中的一种或多种：肝癌、神经胶质瘤、肉瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、黑色素瘤、肺癌、头颈癌、卵巢癌、膀胱癌、胃癌、食道癌、胆管癌、胰腺癌、宫颈癌、皮肤癌、淋巴瘤、甲状腺癌、骨髓癌、子宫内膜癌、肾癌、直肠癌和脑肿瘤。<...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种多肽，包含减毒呼肠孤病毒σ-1蛋白的氨基酸序列；和引起癌症或感染性疾病的抗原的表位的氨基酸序列，
2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述减毒呼肠孤病毒σ-1蛋白由seq id no:1的氨基酸序列表示。
3.根据权利要求2所述的多肽，其中所述减毒呼肠孤病毒σ-1蛋白由seq id no:2所示的碱基序列编码。
4.根据权利要求1所述的多肽，其中所述表位在所述减毒呼肠孤病毒σ-1蛋白的羧基末端形成或构成融合蛋白。
5.根据权利要求1所述的多肽，其在所述表位的氨基酸序列之前和之后还包含选自由接头(seq id no:11)、myc蛋白(seq id no:12)、flag蛋白(seq id no:13)和2a肽组成的组中的一个或多个氨基酸序列。
6.根据权利要求1所述的多肽，其中所述癌症是选自由以下组成的组中的一种或多种：肝癌、神经胶质瘤、肉瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、黑色素瘤、肺癌、头颈癌、卵巢癌、膀胱癌、胃癌、食道癌、胆管癌、胰腺癌、宫颈癌、皮肤癌、淋巴瘤、甲状腺癌、骨髓癌、子宫内膜癌、肾癌、直肠癌和脑肿瘤。
7.根据权利要求1所述的多肽，其中所述感染性疾病是选自由以下组成的组中的一种或多种：冠状病毒病19(covid-19)、丙型肝炎、流感、人类免疫缺陷病毒(hiv)诱导的获得性免疫缺陷综合症(aids)、结核病、严重急性呼吸综合征(sars)、中东呼吸综合征(mers)、轮状病毒引起的婴儿肠炎和诺如病毒引起的非细菌性急性胃肠炎。
8.根据权利要求1所述的多肽...
【专利技术属性】
技术研发人员：柳幸俊，汤米·米切尔·阿兰，韩相卿，向霄，金素英，李娟淑，宋基勳，
申请(专利权)人：百洛克株式会社，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。