【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种动物药的检测鉴别方法，具体涉及一种全蝎特征肽段及应用该特征肽段鉴别检测全蝎成分的方法。
技术介绍
1、全蝎，为钳蝎科动物东亚钳蝎(buthusmartensii karsch)的干燥体，为单基原品种。市场调研发现，全蝎主要以东亚钳蝎为主，但也存在钳蝎科动物细尖狼蝎(lychasmucronatus)混伪作全蝎(东亚钳蝎)，两者在药材性状上有相对明显的区分。但中药配方颗粒为饮片经水煎煮、浓缩、制粒而成，失去了药材的原有性状，已无法从外观上进行有效区分。
2、文献1(庞中化,王志刚,等.全蝎dna条形码分子鉴定研究[j].中国现代中药,2019,21(9):6.)通过coi序列对全蝎及其混伪品进行dna条形码鉴别，为全蝎药材分子鉴定提供了科学依据。但是中药高温提取过程会影响dna的完整性，进而影响dna条形码鉴定的准确性。经研究发现，相较于dna分子，蛋白质、肽类成分的一级序列信息在高温提取条件下保存较好，故基于蛋白质、肽类成分的鉴别方法能够有效克服高温对目标成分的影响。文献2(梁瑞强,孙姗姗,曹进,等.基于蛋白质组学技术测定全蝎中β-肌动蛋白的含量[j].世界中医药,2020,15(13):8.)筛选并确定了全蝎药材中的β-肌动蛋白，发现与东亚钳蝎(全蝎)β-肌动蛋白的氨基酸序列相似的物种在外形上与全蝎有明显差异，而与全蝎形态相似的物种的蛋白质序列与β-肌动蛋白氨基酸序列不一致，该研究筛选出的全蝎的β-肌动蛋白作为标志性蛋白对全蝎药材有一定的特异性，但专属性不强，鉴别作用弱，尤其对于已经失去药材、饮片
技术实现思路
1、专利技术目的：本专利技术的目的是提供一种全蝎特征肽段，解决现有多肽类参照品专属性不强，无法用于鉴别全蝎药材、全蝎配方颗粒或含有全蝎的中药制品的问题。本专利技术的另一目的在于提出一种应用全蝎特征肽段鉴别检测全蝎成分的方法，解决如何通过检测全蝎特征肽来鉴别动物药材或制剂成品中的全蝎成分。
2、技术方案：本专利技术所述的一种全蝎特征肽段，其氨基酸序列包括：
3、特征肽段1：thr-ala-ala-glu-phe-leu-thr-pro-asn-met-gly-leu-thr-asp-ile-lys；和/或特征肽段2：asp-phe-asn-asp-phe-ile-his-leu-cys-glu-gln-ala-arg。
4、本专利技术所述的全蝎特征肽段在鉴别检测全蝎成分中的应用，其特征在于，包括如下步骤：
5、(1)将全蝎特征肽配成对照品参照溶液；
6、(2)将待检样品酶切后制备待检样品酶解液；
7、(3)采用液相色谱-质谱联用方法分别检测待检样品酶解液和对照品参照溶液，比较待检样品酶解液和对照品参照溶液的离子对和离子保留时间，根据比较结果鉴别待检样品中的全蝎成分。
8、优选地，所述特征肽段1的离子对包括m/z861.7双电荷→988.6和m/z861.7双电荷→520.4；所述特征肽段2的离子对包括m/z833.0双电荷→776.2。特征肽段1对应两个离子对，母离子为m/z861.7，带双电荷，子离子为m/z988.6和m/z520.4。特征肽段2对应一个离子对，母离子为m/z833.0双电荷，子离子为m/z776.2。
9、优选地，所述步骤(3)中根据比较结果鉴别待检样品中的全蝎成分的具体方法为：如果待检样品酶解液中检测出所述特征肽段1和/或特征肽段2的离子对，且离子的保留时间与对照品参照溶液一致，待检样品酶解液的子离子与对照品参照溶液的子离子一致，则所述待检样品中含有全蝎成分。
10、优选地，所述待检样品为待检测动物药提取的蛋白质。
11、优选地，所述待检测动物药包括全蝎、细尖狼蝎、蜈蚣、桑螵蛸、壁虎、鳖甲、鹿角、水牛角中的至少一种。
12、优选地，所述步骤(2)的具体方法为：将待检测动物药加入缓冲液中溶解后取滤液，在滤液中加入蛋白酶，恒温酶解后加入二硫键屏蔽剂，经脱盐、挥干、复溶后即得待检样品酶解液。
13、优选地，所述蛋白酶包括胰蛋白酶、胃蛋白酶、菠萝蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶中的至少一种；所述缓冲液为tris-hcl缓冲液；所述恒温酶解后采用三氟乙酸终止酶切反应；所述二硫键屏蔽剂为二硫苏糖醇和碘乙酰胺，二硫苏糖醇和碘乙酰胺均可以打开二硫键，同时也可以防止样品氧化。
14、优选地，所述液相色谱-质谱联用方法的液相色谱条件为：流速0.3ml/min，流动相a为乙腈，流动相b为0.1％甲酸溶液，0-4min，10-40％a线性梯度洗脱，4-6min，40-50％a线性梯度洗脱，6-6.5min，50-10％a线性梯度洗脱，6.5-8min，10％a等度洗脱。
15、优选地，所述液相色谱-质谱联用方法的质谱参数为：电喷雾正离子模式(esi+)；多反应监测模式的离子对为：特征肽段1：m/z861.7双电荷→988.6，dp＝138,ce＝35.3、m/z861.7双电荷→520.4，dp＝135，ce＝35.7；特征肽段2：m/z833.0双电荷→776.2，dp＝78,ce＝47。
16、有益效果：与现有技术相比，本专利技术具有如下显著优点：本专利技术筛选出的2条全蝎特征肽具有很高的专属性，可用于区分全蝎、细尖狼蝎(全蝎伪品)及其他动物药。本专利技术提供的基于全蝎特征肽段的鉴别检测方法，操作简单，判断准确，能准确鉴别动物药材和中药制剂成品中的全蝎成分。该鉴别检测方法为全蝎质量研究提供了参考与依据，有利于全蝎药材、全蝎配方颗粒或含有全蝎的中药制品的质量标准进一步完善。
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1.一种全蝎特征肽段，其特征在于，所述特征肽段的氨基酸序列包括：
2.一种如权利要求1所述全蝎特征肽段在鉴别检测全蝎成分中的应用。
3.根据权利要求2所述全蝎特征肽段在鉴别检测全蝎成分中的应用，其特征在于，包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述全蝎特征肽段在鉴别检测全蝎成分中的应用，其特征在于，所述特征肽段1的离子对包括m/z861.7双电荷→988.6和m/z861.7双电荷→520.4；所述特征肽段2的离子对包括m/z833.0双电荷→776.2。
5.根据权利要求4所述全蝎特征肽段在鉴别检测全蝎成分中的应用，其特征在于，所述步骤(3)中根据比较结果鉴别待检样品中的全蝎成分的方法为：如果待检样品酶解液中检测出所述特征肽段1和/或特征肽段2的离子对，且离子的保留时间与对照品参照溶液一致，待检样品酶解液的子离子与对照品参照溶液的子离子一致，则所述待检样品中含有全蝎成分。
6.根据权利要求3所述全蝎特征肽段在鉴别检测全蝎成分中的应用，其特征在于，所述待检样品为待检测动物药提取的蛋白质。
7.根据权利要求6所述全
8.根据权利要求3所述全蝎特征肽段在鉴别检测全蝎成分中的应用，其特征在于，步骤(2)中所述待检样品酶解液的制备方法为：将待检测动物药加入缓冲液中溶解后取滤液，在滤液中加入蛋白酶，恒温酶解后加入二硫键屏蔽剂，经脱盐、挥干、复溶后即得待检样品酶解液。
9.根据权利要求8所述全蝎特征肽段在鉴别检测全蝎成分中的应用，其特征在于，所述蛋白酶包括胰蛋白酶、胃蛋白酶、菠萝蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶中的至少一种；所述缓冲液为Tris-HCl缓冲液；所述恒温酶解后采用三氟乙酸终止酶切反应；所述二硫键屏蔽剂为二硫苏糖醇和碘乙酰胺。
10.根据权利要求3所述全蝎特征肽段在鉴别检测全蝎成分中的应用，其特征在于，所述液相色谱-质谱联用方法的液相色谱条件为：流速0.3mL/min，流动相A为乙腈，流动相B为0.1％甲酸溶液，0-4min，10-40％A线性梯度洗脱，4-6min，40-50％A线性梯度洗脱，6-6.5min，50-10％A线性梯度洗脱，6.5-8min，10％A等度洗脱；
...【技术特征摘要】
1.一种全蝎特征肽段，其特征在于，所述特征肽段的氨基酸序列包括：
2.一种如权利要求1所述全蝎特征肽段在鉴别检测全蝎成分中的应用。
3.根据权利要求2所述全蝎特征肽段在鉴别检测全蝎成分中的应用，其特征在于，包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述全蝎特征肽段在鉴别检测全蝎成分中的应用，其特征在于，所述特征肽段1的离子对包括m/z861.7双电荷→988.6和m/z861.7双电荷→520.4；所述特征肽段2的离子对包括m/z833.0双电荷→776.2。
5.根据权利要求4所述全蝎特征肽段在鉴别检测全蝎成分中的应用，其特征在于，所述步骤(3)中根据比较结果鉴别待检样品中的全蝎成分的方法为：如果待检样品酶解液中检测出所述特征肽段1和/或特征肽段2的离子对，且离子的保留时间与对照品参照溶液一致，待检样品酶解液的子离子与对照品参照溶液的子离子一致，则所述待检样品中含有全蝎成分。
6.根据权利要求3所述全蝎特征肽段在鉴别检测全蝎成分中的应用，其特征在于，所述待检样品为待检测动物药提取的蛋白质。
7.根据权利要求6所述全蝎特征肽段在鉴别检测全蝎成分中的应用，...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈盛君，刘睿，李松，石海培，王协和，祝倩倩，翟燕娟，周海琴，
申请(专利权)人：江阴天江药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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