【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本披露涉及具有改善的半衰期的经修饰fcrn结合片段、特别是包含所述经修饰fcrn结合片段的融合蛋白和多肽，以及所述融合蛋白的制造方法及其在治疗方法中的用途。
技术介绍
1、免疫球蛋白fc区是由两组ch2和ch3结构域组成的同源二聚体，并且已被用于产生具有高表达产率、简化纯化过程和延长血清半衰期的双臂蛋白融合物。然而，尝试使用具有一组ch2和ch3结构域的单体fc生成单臂融合蛋白，通常受到一些挑战如与fcrn结合减弱或部分单体形成的困扰。
2、已进入临床的单价形式的fc融合蛋白(alprolix-凝血因子ix融合物，eloctate-因子viii融合物)或单价抗体(奥那妥组单抗(onartuzumab)-抗cmet单臂mab)利用fc区，该fc区采用栓系或“杵臼结构(knobs-into-hole)”技术被工程化以形成异源二聚体。这些技术与其他异源二聚体fc技术都依靠强大的纯化过程来去除不需要的链配对并实现均质融合蛋白。为了寻找旨在简化产品开发的替代方法，已经在工程化具有仅由一组ch2和ch3结构域组成的单体fc模式的融合蛋白平台方面进行了大量努力，这通过减弱相互作用或通过在fc中的ch3-ch3二聚体界面处添加聚糖产生空间位阻来实现。到目前为止，这些方法中的大多数都在几个方面遇到了挑战，包括溶解度和稳定性、fcrn结合的丧失或缺乏均质性。此外，通过动态光散射观察到许多先前工程化的单体fc分子具有聚集的趋势，这突出了在弱化同源二聚体界面后稳定单体构象的挑战。在工程化的单体fc模式中，仅报道了两种分子具有均质性和稳定性可
3、由于批准的生物治疗剂的日益增加的优先性以及它们的施用模式和使用机制的扩展，仍然需要开发单价形式的fc融合蛋白的稳健平台。例如，基因疗法应用和可吸入产品都是生物治疗模式的丰富发展领域。然而，关于在包装编码治疗剂的dna的能力或者在肺中有效生物分布的最佳大小方面，两者都具有大小方面限制。此外，产生与单克隆抗体具有相似药代动力学或药效学特性的较小分子通常对改善商业制造产量和降低商品成本具有吸引力。
4、因此，仍然需要提供单价形式的fc融合蛋白。
技术实现思路
1、本披露涉及令人惊讶的发现，即fcrn-ch3二聚化界面的修饰改善了fcrn结合片段的单体化。因此，这些fcrn结合片段当用于需要或期望衍生自fc区的单价fcrn结合片段的融合蛋白、多肽或fcrn结合片段-非蛋白质药剂缀合物(本文中称为“分子”)时，具有改善的可开发性特征。
2、因此，本披露提供了融合蛋白，其包含igg分子的fc区的fcrn结合片段，其中该fcrn结合片段包含：位置351处的苯丙氨酸(f)；位置354处的精氨酸(r)、赖氨酸(k)、天冬氨酸(d)、谷氨酸(e)、苯丙氨酸(f)、酪氨酸(y)、脯氨酸(p)、甘氨酸(g)、亮氨酸(l)或蛋氨酸(m)；位置366处的精氨酸(r)；位置395处的赖氨酸(k)；位置405处的精氨酸(r)；以及位置407处的谷氨酸(e)，其中氨基酸编号根据eu索引。已经发现，用这些氨基酸取代这些位置中每一个的野生型残基改善fcrn结合片段的单体稳定性。
3、在另一方面，本披露提供了多肽，其至少包含igg分子的fc区的fcrn结合片段，其中该fcrn结合片段包含：位置351处的苯丙氨酸(f)；位置354处的精氨酸(r)、赖氨酸(k)、天冬氨酸(d)、谷氨酸(e)、苯丙氨酸(f)、酪氨酸(y)、脯氨酸(p)、甘氨酸(g)、亮氨酸(l)或蛋氨酸(m)；位置366处的精氨酸(r)；位置395处的赖氨酸(k)；位置405处的精氨酸(r)；以及位置407处的谷氨酸(e)，其中氨基酸编号根据eu索引。
4、在另一方面，本披露提供了分子，其包含与igg分子的fc区的fcrn结合片段缀合的非蛋白质药剂，其中该fcrn结合片段包含：位置351处的苯丙氨酸(f)；位置354处的精氨酸(r)、赖氨酸(k)、天冬氨酸(d)、谷氨酸(e)、苯丙氨酸(f)、酪氨酸(y)、脯氨酸(p)、甘氨酸(g)、亮氨酸(l)或蛋氨酸(m)；位置366处的精氨酸(r)；位置395处的赖氨酸(k)；位置405处的精氨酸(r)；以及位置407处的谷氨酸(e)，其中氨基酸编号根据eu索引。
5、在另一方面，本披露提供了编码与所述分子缀合的所述融合蛋白或多肽或fcrn结合片段的核酸。
6、在另一方面，本披露提供了包含所述核酸的载体。
7、在另一方面，本披露提供了包含所述载体或核酸的宿主细胞。
8、在另一方面，本披露提供了通过从所述宿主细胞表达所述fcrn结合片段的融合蛋白、多肽并从中纯化来产生所述用于在所述分子中使用的fcrn结合片段的融合蛋白、多肽的方法。
9、在另一方面，本披露提供了用于在疗法中使用的融合蛋白、多肽或分子。
10、在另一方面，本披露提供了融合蛋白、多肽或分子在制造用于治疗疾病的药物中的用途。
11、在另一方面，本披露提供了治疗方法，其包括向有需要的患者施用治疗有效量的融合蛋白、多肽或分子。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种融合蛋白，其包含IgG分子的Fc区的FcRn结合片段，其中该FcRn结合片段包含：
2.一种多肽，其包含IgG分子的Fc区的FcRn结合片段，其中该FcRn结合片段包含：
3.一种分子，其包含与IgG分子的Fc区的FcRn结合片段缀合的非蛋白质药剂，其中该FcRn结合片段包含：
4.根据权利要求1所述的融合蛋白，根据权利要求2所述的多肽或根据权利要求3所述的分子，其中该FcRn结合片段包含位置354处的R、K、D或E，任选地D或E，其中该氨基酸编号根据EU索引。
5.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该FcRn结合片段包含位置354处的E，其中该编号根据EU索引。
6.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该FcRn结合片段包含IgG分子的约氨基酸残基216至约氨基酸残基446，其中该编号根据EU索引。
7.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该FcRn结合片段包含IgG分子的约氨基酸残基236至约氨基酸残基446，其中该编号根据EU索引。
9.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该FcRn结合片段进一步包含半衰期延长突变。
10.根据权利要求9所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该FcRn结合片段包含位置252处的Y、位置254处的T和位置256处的E，其中编号根据EU索引。
11.根据权利要求9所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该Fc区包含以下氨基酸：
12.根据权利要求11所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该FcRn结合片段包含：
13.根据权利要求12所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该FcRn结合片段包含以下氨基酸：
14.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该FcRn结合片段包含位置438处的氨基酸的缺失，其中编号根据EU索引。
15.根据权利要求1至13中任一项所述的融合蛋白、多肽或分子，其中缺失该FcRn结合片段的Q438(根据EU索引编号)。
16.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该FcRn结合片段包含紧接在残基437之后插入的E，其中编号根据EU索引。
17.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白或多肽，其包含至少一个，例如一个或两个抗原结合结构域。
18.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白或多肽，其包含两个抗原结合结构域。
19.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白或多肽，其中第一抗原结合结构域位于该FcRn结合片段的N末端。
20.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白或多肽，其中第二抗原结合结构域位于该FcRn结合片段的C末端。
21.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白或多肽，其中每个抗原结合结构域独立地选自Fv、Fab、Fab′、F(ab')2、Fab'-SH、双体抗体、三体抗体、四体抗体、线性抗体和scFv。
22.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白或多肽，其包含非IgG蛋白结构域。
23.根据权利要求22所述的融合蛋白或多肽，其中该非IgG结构域是免疫调节剂、受体、激素、酶或药物。
24.根据权利要求1-16中任一项所述的分子，其中该非蛋白质药剂是核酸(例如，DNA或RNA)、脂质、糖脂、多糖、药物、放射性同位素、螯合金属、纳米颗粒或报告基团，例如荧光化合物或可通过NMR或ESR光谱检测的化合物。
25.根据权利要求24所述的分子，其中该核酸是DNA、RNA、siRNA、RNAi或微小RNA。
26.根据权利要求24所述的分子，其中该药物是细胞毒性剂、化疗剂、抗肿瘤剂、抗血管生成剂或促凋亡剂。
27.根据权利要求1所述的融合蛋白，根据权利要求2所述的多肽或根据权利要求3所述的分子，其中该FcRn结合片段包含SEQ ID NO：1中所示的氨基酸序列。
28.一种核酸，其包含编码根据任一前述权利要求所述的融合蛋白或多肽的核苷酸序列。
29.一种载体，其包含根据权利要求28所述的核酸。
30.一种宿主细胞，其包含根据权利要求28所述的核酸或根据权利要求29所述的载体。
31.一种核酸，其包含编码根据权利要求1至16中任一项所述的分子的FcRn结合片段的核苷酸序列。
32.一种载体，其包含根据权利要求31所述的核酸。
33.一种宿主细胞，其包含根据权利要...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种融合蛋白，其包含igg分子的fc区的fcrn结合片段，其中该fcrn结合片段包含：
2.一种多肽，其包含igg分子的fc区的fcrn结合片段，其中该fcrn结合片段包含：
3.一种分子，其包含与igg分子的fc区的fcrn结合片段缀合的非蛋白质药剂，其中该fcrn结合片段包含：
4.根据权利要求1所述的融合蛋白，根据权利要求2所述的多肽或根据权利要求3所述的分子，其中该fcrn结合片段包含位置354处的r、k、d或e，任选地d或e，其中该氨基酸编号根据eu索引。
5.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该fcrn结合片段包含位置354处的e，其中该编号根据eu索引。
6.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该fcrn结合片段包含igg分子的约氨基酸残基216至约氨基酸残基446，其中该编号根据eu索引。
7.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该fcrn结合片段包含igg分子的约氨基酸残基236至约氨基酸残基446，其中该编号根据eu索引。
8.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该igg分子是igg4。
9.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该fcrn结合片段进一步包含半衰期延长突变。
10.根据权利要求9所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该fcrn结合片段包含位置252处的y、位置254处的t和位置256处的e，其中编号根据eu索引。
11.根据权利要求9所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该fc区包含以下氨基酸：
12.根据权利要求11所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该fcrn结合片段包含：
13.根据权利要求12所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该fcrn结合片段包含以下氨基酸：
14.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该fcrn结合片段包含位置438处的氨基酸的缺失，其中编号根据eu索引。
15.根据权利要求1至13中任一项所述的融合蛋白、多肽或分子，其中缺失该fcrn结合片段的q438(根据eu索引编号)。
16.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白、多肽或分子，其中该fcrn结合片段包含紧接在残基437之后插入的e，其中编号根据eu索引。
17.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白或多肽，其包含至少一个，例如一个或两个抗原结合结构域。
18.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白或多肽，其包含两个抗原结合结构域。
19.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白或多肽，其中第一抗原结合结构域位于该fcrn结合片段的n末端。
20.根据任一前述权利要求所述的融合蛋白或多肽，其中第二抗原结合结构域位于该fcrn结...
【专利技术属性】
技术研发人员：V·Y·奥加尼扬，山璐，
申请(专利权)人：免疫医疗有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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