【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及一种猪脱细胞淋巴结制备方法及其用途。
技术介绍
1、淋巴水肿(lymphedema)是一种慢性进展性疾病，临床表现为皮肤增厚、患肢增粗、继发感染及多种皮肤病损，从而影响肢体的外观及功能，进而导致患者生活质量下降。淋巴水肿的治疗极为困难。目前有2种重建淋巴引流的方法，包括血管化淋巴结移植(vascularized lymph node transfer，vlnt)和淋巴管-静脉吻合术(lymphovenousanastomosis，lva)，但多项研究已表明淋巴结可能才是恢复生理性淋巴引流的关键(nguyen dh,zhou a,posternak v,et al.nanofibrillar collagen scaffold enhancesedema reduction and formation of new lymphatic collectors after lymphedemasurgery[j].plast reconstr surg,2021,148(6):1382-1393.hadamitzky c,zaitsevats,bazalova-carter m,et al.aligned nanofibrillar collagen scaffolds-guidinglymphangiogenesis for treatment of acquired lymphedema[j].biomaterials,2016,102:259-267.engel h,lin cy,huang jj
2、为了更好地提供与淋巴结相似的三维空间结构，cuzzone等通过0.075％十二烷基硫酸钠或甲酸制备了脱细胞淋巴结(decellularized lymph nodes，dlns)，并证实其在体内诱导产生免疫应答(cuzzone da,albano nj,aschen sz,et al.decellularized lymphnodes as scaffolds for tissue engineered lymph nodes[j].lymphat res biol,2015,13(3):186-194.lin hj,wang w,huang yy,et al.decellularized lymph nodescaffolding as a carrier for dendritic cells to induce anti-tumor immunity，pharmaceutics,2019,11(11):553.choi ys,jeong e,lee js,et al.immunomodulatoryscaffolds derived from lymph node extracellular matrices，acs appl materinterfaces,2021,13(12):14037-14049.)，cuzzone等以小鼠淋巴结为原料，比较了十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate，sds)、3-胆胺丙基二甲基氨-1-丙磺酸盐和triton-x制备脱细胞淋巴结的效果，认为0.075％sds是最有效的脱细胞方法(cuzzone da,albanonj,aschen sz,et al.decellularized lymph nodes as scaffolds for tissueengineered lymph nodes，lymphat res biol,2015,13(3):186-194.)。choi等采用0.1％sds处理了12h制备了猪脱细胞淋巴结。然而，研究发现0.075％的sds并不能用于制备猪脱细胞淋巴结，0.1％sds也不能实现完全脱细胞，为此，有必要开发新的猪脱细胞淋巴结制备方法。
3、尽管脱细胞淋巴已被成功制备，但均未将dlns用于治疗淋巴水肿。直至2023年，韩国学者kang将鼠dlns和脂肪干细联合应用于小鼠后肢淋巴水肿，发现其能促进淋巴结再生和改善淋巴水肿，但他们认为该治疗作用归结于脂肪干细胞，(hj,moon sy,kim bk,etal.recellularized lymph node scaffolds with human adipose-derived stem cellsenhance lymph node regeneration to improve lymphedema，sci rep,2023,13(1):5397.)。此外，目前脱细胞淋巴的制备方法耗时较长，且淋巴结多来源于啮齿类动物。作为生物材料，除了考虑安全性之外，还需要考虑原材获取难以程度、成本等问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种猪脱细胞淋巴结的制备方法，以及制得的猪脱细胞淋巴结材料用于治疗淋巴水肿的用途。
2、为实现本专利技术的目的，提供如下技术方案。
3、一方面，本专利技术提供了一种猪脱细胞淋巴结的制备方法，包括以下步骤：
4、1)取猪腋窝或颈部淋巴结组织，切成小片或小块；
5、2)放入超纯水中浸泡振荡处理3-4次，温度为3～5℃，每次3-4h；
6、3)将浸泡后的淋巴结组织放入1％十二烷基硫酸钠(sds)溶液中振荡脱细胞，重复2次，每次振荡时间为6h；
7、4)再放入1％trition-100溶液中振荡脱细胞1-2h；
8、5)将脱细胞的淋巴结组织放入超纯水中浸泡振荡20-25h，每3～4h更换一次水；
9、6)将上步浸泡后的淋巴结组织放在1％(v/v)青霉素-链霉素溶液中浸泡振荡处理2h；
10、7)最后放在磷酸缓冲盐溶液(pbs)中浸泡振荡处理2h；
11、8)将振荡处理后的淋巴结组织在-40～-60℃下冷冻干燥24～28h。
12、优选的，上述本专利技术的制备方法，步骤1)中，所述切成小片或小块，其边长约为0.3cm3，“约”表示加工的小块大小并不一本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种猪脱细胞淋巴结的制备方法，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的制备方法，步骤1)中，所述切成小片或小块，其边长约为0.3cm3。
3.如权利要求1所述的制备方法，步骤2)中，浸泡振荡处理次数为4次，每次4h，振荡转速为180转/min。
4.如权利要求1所述的制备方法，步骤4)中，振荡脱细胞1h。
5.如权利要求1所述的制备方法，步骤5)中，浸泡振荡24h，每4h更换一次水。
6.如权利要求1所述的制备方法，步骤6)中，青霉素-链霉素溶液与淋巴组织的体积质量比为10mL：1g。
7.如权利要求1所述的制备方法，步骤7)中，磷酸缓冲盐溶液与淋巴组织的体积质量比为10mL：1g。
8.如权利要求1所述的制备方法，步骤3)-6)中，所述振荡，其振荡条件为：温度控制在20～25℃，转速为180转/min。
9.一种猪脱细胞淋巴结，由权利要求1-8任一所述的制备方法制备而得。
10.权利要求1-8任一所述的制备方法制备的猪脱细胞淋巴结在制备预防和/或治疗淋巴水肿药物或生物医
...【技术特征摘要】
1.一种猪脱细胞淋巴结的制备方法，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的制备方法，步骤1)中，所述切成小片或小块，其边长约为0.3cm3。
3.如权利要求1所述的制备方法，步骤2)中，浸泡振荡处理次数为4次，每次4h，振荡转速为180转/min。
4.如权利要求1所述的制备方法，步骤4)中，振荡脱细胞1h。
5.如权利要求1所述的制备方法，步骤5)中，浸泡振荡24h，每4h更换一次水。
6.如权利要求1所述的制备方法，步骤6)中，青霉素-链霉...
【专利技术属性】
技术研发人员：魏在荣，邓呈亮，简扬，肖顺娥，
申请(专利权)人：遵义医科大学附属医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。