【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及与cd20结合的抗体(例如，uniabstm)和car-t结构。本专利技术进一步涉及制备此类抗体和car-t结构的方法，包含此类抗体和car-t结构的组合物，包括药物组合物，以及其治疗以cd20的表达为特征的疾患的用途。
技术介绍
1、cd20
2、cd20，又称为b淋巴细胞抗原cd20(uniprot：p11836)，是33kda的细胞表面非糖基化磷蛋白，并且属于跨膜家族4a基因家族的成员(ms4a1)。cd20由2个胞外环组成，并且该蛋白的c-末端和n-末端均位于胞内。cd20从祖b(pro-b)阶段开始在b细胞表面上表达，并持续到非常早期的浆母细胞分化。cd20在b细胞向浆细胞的发育和分化中发挥作用。与cd19和cd22一样，cd20的表达限于b细胞谱系使其成为b细胞恶性肿瘤治疗性治疗的有吸引力的靶标。已经描述了许多对cd20特异性的单克隆抗体和抗体-药物缀合物(du等人2017,pmc29143151)。
3、重链抗体
4、在常规igg抗体中，重链和轻链的缔合部分是由于轻链恒定区与重链的ch1恒定结构域之间的疏水性相互作用。重链框架2(fr2)和框架4(fr4)区中存在另外的残基，这也有助于重链与轻链之间的这种疏水性相互作用。
5、然而，已知骆驼科(包括骆驼、单峰骆驼和美洲驼的胼足亚目)的血清含有一种主要类型的抗体，其仅由成对的h链构成(仅重链抗体或uniabstm)。骆驼科(单峰驼(camelusdromedarius)、双峰驼(camelus bactri
6、没有轻链的仅重链抗体结合抗原的能力是在20世纪60年代建立的(jaton等人(1968)biochemistry[生物化学],7,4185-4195)。与轻链物理分离的重链免疫球蛋白相对于四聚体抗体保留了80％的抗原结合活性。sitia等人(1990)cell[细胞],60,781-790证明了从重排的小鼠μ基因中去除ch1结构域导致在哺乳动物细胞培养中产生没有轻链的仅重链抗体。所产生的抗体保留了vh结合特异性和效应子功能。
7、通过免疫可以产生针对多种抗原具有高特异性和亲和力的重链抗体(van derlinden,r.h.等人biochim.biophys.acta.[生物化学与生物物理学报]1431,37-46(1999))，并且可以在酵母中容易地克隆并表达vhh部分(frenken,l.g.j.等人j.biotechnol.[生物技术期刊]78,11-21(2000))。它们的表达水平、溶解性和稳定性显著高于经典f(ab)或fv片段(ghahroudi,m.a.等人febs lett.[欧洲生物化学学会联合会快报]414,521-526(1997))。
8、其中λ(lambda)轻(l)链基因座和/或λ和κ(kappa)l链基因座已被功能沉默的小鼠以及由此类小鼠产生的抗体描述于美国专利号7,541,513和8,367,888中。例如，例如在以下中已经报告了在小鼠和大鼠中重组产生仅重链抗体：wo 2006008548；美国专利公布号20100122358；nguyen等人,2003,immunology[免疫学]；109(1),93-101；brüggemann等人,crit.rev.immunol.[免疫学评论综述]；2006,26(5):377-90；以及zou等人,2007,j expmed[实验医学杂志]；204(13):3271–3283。经由锌指核酸酶的胚胎显微注射产生敲除大鼠描述于geurts等人,2009,science[科学],325(5939):433中。可溶性仅重链抗体和包含产生此类抗体的异源重链基因座的转基因啮齿类动物描述于美国专利号8,883,150和9,365,655中。包含单结构域抗体作为结合(靶向)结构域的car-t结构描述于例如iri-sofla等人,2011,experimental cell research[实验细胞研究]317:2630-2641和jamnani等人,2014,biochim biophys acta[生物化学与生物物理学报],1840:378-386中。
技术实现思路
1、本专利技术的各方面包括与cd20结合的抗体，这些抗体包含重链可变区，该重链可变区包含：(a)在seq id no:1或4的氨基酸序列中的任一个中包含两个或更少取代的cdr1序列；和/或在seq id no:2或5的氨基酸序列中的任一个中包含两个或更少取代的cdr2序列；和/或(c)在seq id no:3或6的氨基酸序列中的任一个中包含两个或更少取代的cdr3序列。
2、在一些实施例中，cdr1、cdr2和cdr3序列存在于人框架中。在一些实施例中，抗体进一步包含ch1序列不存在的重链恒定区序列。
3、在一些实施例中，抗体包含：(a)选自由seq id no:1和4组成的组的cdr1序列；和/或(b)选自由seq id no:2和5组成的组的cdr2序列；和/或(c)选自由seq id no:3和6组成的组的cdr3序列。
4、在一些实施例中，抗体包含：(a)选自由seq id no:1和4组成的组的cdr1序列；和(b)选自由seq id no:2和5组成的组的cdr2序列；和(c)选自由seq id no:3和6组成的组的cdr3序列。
5、在一些实施例中，抗体包含：(a)seq本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种与CD20结合的抗体，该抗体包含重链可变区，该重链可变区包含：
2.如权利要求1所述的抗体，其中所述CDR1、CDR2和CDR3序列存在于人框架中。
3.如权利要求1所述的抗体，其进一步包含CH1序列不存在的重链恒定区序列。
4.如权利要求1-3中任一项所述的抗体，其包含：
5.如权利要求4所述的抗体，其包含：
6.如权利要求5所述的抗体，其包含：
7.如权利要求1-3中任一项所述的抗体，其包含与SEQ ID NO:7-8中任一序列具有至少95％序列同一性的重链可变区。
8.如权利要求7所述的抗体，其包含选自由SEQ ID NO:7-8组成的组的重链可变区序列。
9.如权利要求8所述的抗体，其包含SEQ ID NO:7的重链可变区序列。
10.如权利要求8所述的抗体，其包含SEQ ID NO:8的重链可变区序列。
11.一种与CD20结合的抗体，该抗体包含重链可变区，该重链可变区包含在人VH框架中的CDR1、CDR2和CDR3序列，其中这些CDR序列是在
12.如权利要求11所述的抗体，其包含重链可变区，该重链可变区包含在人VH框架中的CDR1、CDR2和CDR3序列，其中这些CDR序列选自由SEQ ID NO:1-6组成的组。
13.一种与CD20结合的抗体，该抗体包含重链可变区，该重链可变区包含：
14.如权利要求1至13中任一项所述的抗体，其呈CAR-T形式。
15.如权利要求1-13中任一项所述的抗体，其是多特异性的。
16.如权利要求15所述的抗体，其是双特异性的。
17.如权利要求16所述的抗体，其与两个不同CD20蛋白结合。
18.如权利要求16所述的抗体，其与在同一CD20蛋白上的两个不同表位结合。
19.如权利要求15所述的抗体，其与效应细胞结合。
20.如权利要求15所述的抗体，其与T细胞抗原结合。
21.如权利要求20所述的抗体，其与CD3结合。
22.如权利要求21所述的抗体，其包含：
23.如权利要求22所述的抗体，其包含：
24.如权利要求23所述的抗体，其包含：
25.一种与CD20和CD3结合的双特异性三链抗体样分子(TCA)，该双特异性三链抗体样分子包含：
26.一种包含CAR的CAR-T细胞，该CAR包含与CD20结合的胞外抗原结合结构域，该胞外抗原结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
27.如权利要求26所述的CAR-T细胞，其中该与CD20结合的胞外抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:7-8中任一序列具有至少95％序列同一性的重链可变区。
28.如权利要求27所述的CAR-T细胞，其中该与CD20结合的胞外抗原结合结构域包含选自由SEQ ID NO:7-8组成的组的重链可变区序列。
29.如权利要求28所述的CAR-T细胞，其中该与CD20结合的胞外抗原结合结构域包含SEQ ID NO:7的重链可变区序列。
30.如权利要求28所述的CAR-T细胞，其中该与CD20结合的胞外抗原结合结构域包含SEQ ID NO:8的重链可变区序列。
31.一种药物组合物，其包含如权利要求1-25中任一项所述的抗体或如权利要求26-30中任一项所述的CAR-T细胞。
32.一种用于治疗以CD20的表达为特征的疾患的方法，该方法包括向患有所述疾患的受试者施用如权利要求1-25中任一项所述的抗体、如权利要求26-30中任一项所述的CAR-T细胞或如权利要求31所述的药物组合物。
33.如权利要求32所述的方法，其中该疾患是血液恶性肿瘤。
34.如权利要求33所述的方法，其中该血液恶性肿瘤是非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
35.如权利要求33所述的方法，其中该血液恶性肿瘤是慢性淋巴细胞白血病(CLL)。
36.如权利要求33所述的方法，其中该血液恶性肿瘤是滤泡性淋巴瘤(FL)。
37.如权利要求33所述的方法，其中该血液恶性肿瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
38.如权利要求33所述的方法，其中该血液恶性肿瘤是套细胞淋巴瘤(MCL)。
39.如权利要求33所述的方法，其中该血液恶性肿瘤是急性淋巴细胞白血病(ALL)。
40.如权利要求33所述的...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种与cd20结合的抗体，该抗体包含重链可变区，该重链可变区包含：
2.如权利要求1所述的抗体，其中所述cdr1、cdr2和cdr3序列存在于人框架中。
3.如权利要求1所述的抗体，其进一步包含ch1序列不存在的重链恒定区序列。
4.如权利要求1-3中任一项所述的抗体，其包含：
5.如权利要求4所述的抗体，其包含：
6.如权利要求5所述的抗体，其包含：
7.如权利要求1-3中任一项所述的抗体，其包含与seq id no:7-8中任一序列具有至少95％序列同一性的重链可变区。
8.如权利要求7所述的抗体，其包含选自由seq id no:7-8组成的组的重链可变区序列。
9.如权利要求8所述的抗体，其包含seq id no:7的重链可变区序列。
10.如权利要求8所述的抗体，其包含seq id no:8的重链可变区序列。
11.一种与cd20结合的抗体，该抗体包含重链可变区，该重链可变区包含在人vh框架中的cdr1、cdr2和cdr3序列，其中这些cdr序列是在选自由seq id no:1-6组成的组的cdr序列中具有两个或更少取代的序列。
12.如权利要求11所述的抗体，其包含重链可变区，该重链可变区包含在人vh框架中的cdr1、cdr2和cdr3序列，其中这些cdr序列选自由seq id no:1-6组成的组。
13.一种与cd20结合的抗体，该抗体包含重链可变区，该重链可变区包含：
14.如权利要求1至13中任一项所述的抗体，其呈car-t形式。
15.如权利要求1-13中任一项所述的抗体，其是多特异性的。
16.如权利要求15所述的抗体，其是双特异性的。
17.如权利要求16所述的抗体，其与两个不同cd20蛋白结合。
18.如权利要求16所述的抗体，其与在同一cd20蛋白上的两个不同表位结合。
19.如权利要求15所述的抗体，其与效应细胞结合。
20.如权利要求15所述的抗体，其与t细胞抗原结合。
21.如权利要求20所述的抗体，其与cd3结合。
22.如权利要求21所述的抗体，其包含：
23.如权利要求22所述的抗体，其包含：
24.如权利要求23所述的抗体，其包含：
25.一种与cd20和cd3结合的双特异性三链抗体样分子(tca)，该双特异性三链抗体样分子包含：
26.一种包含car的car-t细胞，该car包含与cd20结合的胞外抗原结合结构域，该胞外抗原结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含：
27.如权利要求26所述的car-t细胞，其中该与cd20结合的胞外抗原结合结构域包含与seq id no:7-8中任一序列具有至少95％序列同一性的重链可变区。
28.如权利要求27所述的car-t细胞，其中该与cd20结合的胞外抗原结合结构域包含选自由seq id no:7-8组成的组的重链可变区序列。
29.如权利要求28所述的car-t细胞，其中该与cd20结合的胞外抗原结合结构...
【专利技术属性】
技术研发人员：N·特林克莱因，K·哈里斯，B·阿万奇诺，K·张，N·艾伦，
申请(专利权)人：特尼奥生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。