System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind() 一种适于包装慢病毒的培养基及其应用制造技术_技高网

一种适于包装慢病毒的培养基及其应用制造技术

技术编号:39944942 阅读:18 留言:0更新日期:2024-01-08 22:51
本申请公开了一种适于包装慢病毒的培养基,所述培养基包括基础培养基和补料培养基,所述基础培养基为Dynamis,所述补料培养基选自Feed1、Feed2或Feed3培养基中至少一种。本申请还公开一种包装慢病毒的方法,包括:将转染复合物加入到HEK293T悬浮细胞悬液中,培养,收毒;所述HEK293T悬浮细胞悬液中包括上述的基础培养基。本申请还公开上述的培养基或上述的方法在慢病毒制备中的应用。

【技术实现步骤摘要】

本说明书涉及生物,特别涉及一种适于包装慢病毒的培养基及其应用


技术介绍

1、自然杀伤细胞是一组独特的抗肿瘤效应细胞,具有不受mhc限制的细胞毒性、产生细胞因子和免疫记忆等功能,使其成为先天性和适应性免疫反应系统中的关键角色。car-nk就是利用基因工程给nk细胞加入一个能识别肿瘤细胞,并且同时激活nk细胞杀死肿瘤细胞的嵌合抗体。2020年,car-nk免疫细胞治疗曾被权威学术期刊《自然-医学》纳入度生物医学领域的十代瞩目进展之一。car-nk细胞疗法是一个很有前途的临床研究领域,对某些癌症患者具有良好的安全性和初步疗效。

2、目前用于car-nk慢病毒的包装系统为四质粒系统,分别为编码包膜蛋白baev基因的质粒、编码gag、pol等蛋白基因的质粒、以及编码rev等蛋白基因的质粒及含目的基因的穿梭质粒共同转染293t悬浮细胞,得到重组慢病毒。但是基于目前的包装工艺,存在感染滴度较低、杂质水平较高等问题。


技术实现思路

1、本申请提供一种适于包装慢病毒的培养基,所述培养基包括基础培养基和补料培养基,所述基础培养基为dynamis,所述补料培养基选自feed1、feed2或feed3培养基中至少一种。

2、本申请还提供一种包装慢病毒的方法,包括:将转染复合物加入到hek293t悬浮细胞悬液中,培养,收毒;所述hek293t悬浮细胞悬液中包括上述的基础培养基。

3、本申请还提供上述的培养基或上述的方法在慢病毒制备中的应用。

4、本说明书提出的一种适于包装慢病毒的培养基,带来的有益效果包括但不限于:本申请筛选出dynamis为慢病毒包装基础培养基,并在转染12h后补加包装体积20%的feed2补料培养基,48h收获后病毒粗毒感染滴度高(≥6.41e+08tu/ml),hcp含量维持在30000ng/ml以下。极大可能的减小了下游纯化的压力,保证最终重组慢病毒成品的滴度和杂质水平符合质量标准,有利于后续的规模化生产。

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【技术保护点】

1.一种适于包装慢病毒的培养基,其特征在于,所述培养基包括基础培养基和补料培养基,所述基础培养基为Dynamis,所述补料培养基选自Feed1、Feed2或Feed3培养基中至少一种。

2.如权利要求1所述的培养基,其特征在于,所述补料培养基体积为基础培养基体积的10%~20%,所述补料培养基为Feed2培养基。

3.如权利要求1所述的培养基,其特征在于,所述补料培养基体积为基础培养基体积的15%~20%。

4.如权利要求1所述的培养基,其特征在于,所述补料培养基体积为基础培养基体积的20%。

5.一种包装慢病毒的方法,其特征在于,包括:

6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,所述培养6-12h后,加入补料培养基和200mM谷氨酰胺溶液,所述补料培养基选自Feed1、Feed2或Feed3培养基中至少一种,优选的,所述补料培养基为Feed2培养基。

7.如权利要求6所述的方法,其特征在于,所述补料培养基体积为HEK293T悬浮细胞悬液体积的10%~20%,所述200mM谷氨酰胺溶液体积为HEK293T悬浮细胞悬液体积的2%。

8.如权利要求6所述的方法,其特征在于,所述补料培养基体积为HEK293T悬浮细胞悬液体积的15%~20%。

9.如权利要求6所述的方法,其特征在于,所述补料培养基体积为HEK293T悬浮细胞悬液体积的20%。

10.如权利要求1~4任一项所述的培养基或权利要求5~9任一项所述的方法在慢病毒制备中的应用。

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【技术特征摘要】

1.一种适于包装慢病毒的培养基,其特征在于,所述培养基包括基础培养基和补料培养基,所述基础培养基为dynamis,所述补料培养基选自feed1、feed2或feed3培养基中至少一种。

2.如权利要求1所述的培养基,其特征在于,所述补料培养基体积为基础培养基体积的10%~20%,所述补料培养基为feed2培养基。

3.如权利要求1所述的培养基,其特征在于,所述补料培养基体积为基础培养基体积的15%~20%。

4.如权利要求1所述的培养基,其特征在于,所述补料培养基体积为基础培养基体积的20%。

5.一种包装慢病毒的方法,其特征在于,包括:

6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,所述培养6-12h后,加入补料培...

【专利技术属性】
技术研发人员:赵燊栗红建张丹周静雨
申请(专利权)人:江苏谱新生物医药有限公司
类型:发明
国别省市:

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