【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及抗体含羟基药物缀合物，特别是利用有效载荷的羟基将药物与抗体连接的多特异性抗体含羟基药物缀合物。具体地，本专利技术涉及通过聚乙二醇化药物缀合物至单特异性或双特异性抗体的位点特异性缀合而制备的长效聚乙二醇化单特异性或双特异性单链抗体药物缀合物，其中有效载荷的羟基与聚乙二醇(peg)部分偶联。
技术介绍
1、化疗是癌症治疗的主要治疗选择之一，广泛应用于临床，但仍存在耐药性、全身毒性和治疗窗口窄等严重障碍。
2、抗体药物缀合物(adc)是一类新型靶向药物。截至2021年，十二种adc(不包括一种融合adc)得到了fda的批准，并且超过100种候选adc活跃在近300项临床试验中(beacontargeted therapies,hanson wade,uk的研究报告)。如今adc开发面临的最大挑战是需要以非常接近最大耐受剂量(mtd)给药以显示治疗的益处，这导致了非常窄的治疗窗口(beck,a.et al.,nat.rev.drug discov.,2017,16,315–337；vankemmelbeke,m.et al.,ther.deliv.,2016,7,141–144；tolcher,a.w.et al.,ann.oncol.,2016,27,2168–2172)。发现adc的毒性特征通常与标准护理化疗药物的毒性特征相当，具有与细胞毒性弹头相关的剂量限制毒性(coats,s.et al.clin.cancer res.,2019,25,5441–5448)。因此，fda批准的12种adc中有9种因严重
3、此外，还有一些与adc的设计和结构直接相关的遗传毒性。例如，adc毒性可能是由于与正常细胞上的fc受体(fcγr)或凝集素受体(如甘露糖受体)的脱靶/脱肿瘤结合所致(donaghy,h.et al.mabs,2016,8,659-671)，由于细胞内细胞毒性有效载荷的释放，导致表达fcγr或甘露糖的细胞的杀伤(gorovits,b.et al.cancer immunol immunother,2013,62,217-223)。另一种fc依赖性毒性来自adc聚集体，其可以激活免疫细胞上的fcγ受体，经由fcγr内化，最终杀伤此类靶标阴性细胞(aoyama,m.et al.pharmaceutical research,2022,39,89-103)。
4、许多天然或合成的细胞毒性化合物可用作adc的有效载荷。大多数正在开发或已批准的adc利用含氨基有效载荷与自消解间隔物形成稳定的氨基甲酸酯键连接，而自消解间隔物又连接到触发分子。形成的氨基甲酸酯键可以确保有效载荷在血液循环过程中保持与抗体的连接。然而，还有另一大类细胞毒性化合物，其中唯一可用于连接抗体的官能团是羟基。在adc的开发中，对于这类含羟基化合物的研究和开发并不像对细胞毒性含氨基化合物那样多。对于具有羟基作为唯一可用的偶联官能团的化合物，无法利用经由自消解部分(如4-氨基苯甲醇(pab))将含氨基化合物附接到抗体以形成稳定的氨基甲酸酯键的相同策略，并且会形成不稳定的碳酸酯键而不是氨基甲酸酯键，这可能导致有效载荷过早释放。
5、包括adc在内的抗体药物面临着影响瘤内分布的若干障碍。肿瘤内抗体转运的主要方式是基于扩散，其受到抗体大小、结合亲和力、肿瘤微环境、血管化和被靶向抗原的可及性的影响(xenaki,k.t.et al.front immunol,2017,8,1287)。分子量在150kd左右的抗体或adc的大尺寸使得它们难以渗出血管深入穿透肿瘤组织，而小尺寸抗体片段则显示出显著增加的肿瘤生物分布(li,z.et al.mabs,2016,8,113-119)。结合位点屏障(bsb)是抗体穿透肿瘤的另一个障碍(miao,l.et al.acs nano,2016,10,9243-9258)。由于抗体与细胞靶标的高亲和力是结合位点屏障的主要原因，因此在研究中采用了将非缀合的竞争性抗体与adc共同施用的策略。通过这种策略，发现结合位点屏障对adc的影响降低，并且adc在实体瘤中分布更加均匀(evans,r.et al.sci rep.,2022,12,7677)。然而，这种方法需要两种抗体相关产品，这将大大增加治疗成本。
6、因此，需要新颖的adc技术来解决上述问题。
技术实现思路
0、专利技术概述
1、本专利技术通过提供非免疫原性聚合物修饰的抗体含羟基药物缀合物解决了未满足的需求，所述药物缀合物通过将聚合物修饰的(例如聚乙二醇化的)含羟基药物缀合物与单特异性或多特异性抗体片段进行位点特异性缀合而制备。抗体片段对于抗原可以是单价的或多价的。
2、在一个方面，本专利技术提供了式ia的聚合物抗体药物缀合物分子p可以是非免疫原性聚合物。t可以是多官能(例如三官能)小分子接头部分，并且具有至少一个能够与单特异性或多特异性抗体或蛋白质位点特异性缀合的官能团。a可以是任何单特异性或多特异性抗体或蛋白质。d可以是任何含羟基的细胞毒性分子(n≥1)，并且每个d可以相同或不同。
3、特别地，本专利技术的方面提供了式ib的缀合物：
4、
5、其中：
6、p可以是非免疫原性聚合物；
7、m可以是h或选自c1-50烷基和芳基的封端基团，其中所述烷基的一个或多个碳任选地被杂原子取代；
8、y可以是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的整数；
9、t可以是具有两个或更多官能团的多官能接头，包括但不限于三官能或四官能或任何其他环状或非环状多官能部分(例如赖氨酸)，其中t和(l1)a之间的连接和t和(l2)b之间的连接可以相同或不同；
10、l1和l2各自可以独立地是双官能接头；
11、a和b各自可以是选自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的整数；
12、b可以是带支链接头，其中每个支链可以包含延伸间隔物(任选的)、触发单元、一个或多个自消解间隔物(self-immolating spacer)或其任意组合，其中触发单元可以是氨基酸序列、可被酶裂解的二硫键或ph敏感接头、或可通过某些裂解机制释放含羟基药物d的任何可裂解键；
13、a可以是任何单特异性或多特异性抗体或抗原结合蛋白，包括抗体片段、单链抗体、纳米抗体(单结构域抗体)或任何抗原结合片段，其对于抗原可以是一价或多价；
14、d可以是任何细胞毒性含羟基小分子或其衍生物；
15、n可以是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19和20的整数。
16、本专利技术的另一个方面提供了式ic的缀合物：
17、
18、式ic，
19、其中每个变量如式ib所定义。
20、在一些本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.式(Ib)的化合物
2.权利要求1的化合物，其中T是衍生自具有三个官能团的分子的三官能接头，所述三个官能团独立地选自羟基、氨基、肼基、叠氮化物、烯、炔、羰基(醛、酮、酯、羧酸、酸酐、酰基卤化物)、硫醇、二硫化物、腈、环氧化物、亚胺、硝基和卤化物，并且其中T和(L1)a之间的连接以及T和(L2)b之间的连接相同或不同。
3.权利要求2的化合物，其中T是1,3-二氨基-2-丙醇、三乙醇胺、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸或酪氨酸。
4.权利要求1-3中任一项的化合物，其中(L1)a的接头末端的官能团之一能够与A位点特异性缀合，并且选自硫醇、马来酰亚胺、2-吡啶基二硫代变体、芳族砜或乙烯基砜、丙烯酸酯、溴代或碘代乙酰胺、叠氮化物、炔烃、二苯并环辛基(DBCO)、羰基、2-氨基-苯甲醛或2-氨基-苯乙酮基团、酰肼、肟、酰基三氟硼酸钾、O-氨基甲酰基羟基胺、反式环辛烯、四嗪、三芳基膦、硼酸和碘。
5.权利要求1-4中任一项的化合物，其中所述抗体是单特异性或多特异性全长抗体、单特异性或多特异性单链抗体、单特异性或多特异性纳米抗体(单结构域抗
6.权利要求1-5中任一项的化合物，其中所述抗体是单特异性单链抗体。
7.权利要求6的化合物，其中所述单特异性单链抗体结合肿瘤相关抗原(TAA)例如Her2、cMet、PDL1或CD47。
8.权利要求7的化合物，其中所述单特异性单链抗体具有与Her2结合的两个结合结构域。
9.权利要求8的化合物，其中所述单特异性单链抗体具有如SEQ ID No.3所示的氨基酸序列。
10.权利要求1-5中任一项的化合物，其中所述抗体是双特异性抗体，例如双特异性单链抗体。
11.权利要求10的化合物，其中所述双特异性抗体的两个结合结构域与相同的肿瘤相关抗原(TAA)结合、与两个不同的TAA结合、或与TAA和T细胞上表达的抗原(例如T细胞受体的组分)或NK细胞上表达的抗原结合。
12.权利要求11的化合物，其中所述抗体是抗PDL1x抗CD47单链双特异性抗体。
13.权利要求12的化合物，其中所述抗体具有如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。
14.权利要求11的化合物，其中所述抗体是抗HER2(1)×抗HER2(2)单链双特异性抗体。
15.权利要求14的化合物，其中所述抗体具有如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。
16.权利要求11的化合物，其中所述抗体是抗cMet(1)x抗cMet(2)单链双特异性抗体。
17.权利要求16的化合物，其中所述抗体具有如SEQ ID No.6所示的氨基酸序列。
18.权利要求6-9中任一项的化合物，其中所述单特异性单链抗体的两个结合结构域经由肽接头连接，并且其中所述接头包含半胱氨酸或非天然氨基酸残基用于所述抗体与(L1)a的位点特异性缀合。
19.权利要求10-17中任一项的化合物，其中所述双特异性单链抗体的两个结合结构域经由肽接头连接，并且其中所述接头包含半胱氨酸或非天然氨基酸残基用于所述抗体与(L1)a的位点特异性缀合。
20.权利要求18或19的化合物，其中所述非天然氨基酸残基选自基因编码的烯烃赖氨酸(如N6-(己-5-烯酰基)-L-赖氨酸)、2-氨基-8-氧代壬酸、间或对-乙酰苯丙氨酸、含β-二酮侧链的氨基酸(如2-氨基-3-(4-(3-氧代丁酰基)苯基)丙酸)、(S)-2-氨基-6-(((1R,2R)-2-叠氮环戊氧基)羰基氨基)己酸、叠氮高丙氨酸、吡咯赖氨酸类似物N6-((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)-L-赖氨酸、(S)-2-氨基-6-戊-4-炔氨基己酸、(S)-2-氨基-6-((丙-2-炔基氧基)羰基氨基)己酸、(S)-2-氨基-6-((2-叠氮乙氧基)羰基氨基)己酸、p-叠氮苯丙氨酸、对叠氮苯丙氨酸、Nε-丙烯酰基-l-赖氨酸、Nε-5-降冰片烯-2-基氧基羰基-l-赖氨酸、N-ε-(环辛-2-炔-1基-氧基)羰基)-L-赖氨酸、N-ε-(2-(环辛-2-炔-1-基氧基)乙基)羰基-L-赖氨酸、和基因编码的四嗪氨基酸(如4-(6-甲基-s-四嗪-3-基)氨基苯丙氨酸)。
21.权利要求1-20中任一项的化合物，其中所述含羟基药物D选自DNA交联剂、微管抑制剂、DNA烷化剂、拓扑异构酶抑制剂、蛋白质降解剂、STING激动剂或其组合。
22.权利要求21的化合物，其中所述含羟基药物D选自长春花生物碱、莱利霉素(laulimalide)、秋水仙碱、微管溶素(t...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.式(ib)的化合物
2.权利要求1的化合物，其中t是衍生自具有三个官能团的分子的三官能接头，所述三个官能团独立地选自羟基、氨基、肼基、叠氮化物、烯、炔、羰基(醛、酮、酯、羧酸、酸酐、酰基卤化物)、硫醇、二硫化物、腈、环氧化物、亚胺、硝基和卤化物，并且其中t和(l1)a之间的连接以及t和(l2)b之间的连接相同或不同。
3.权利要求2的化合物，其中t是1,3-二氨基-2-丙醇、三乙醇胺、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸或酪氨酸。
4.权利要求1-3中任一项的化合物，其中(l1)a的接头末端的官能团之一能够与a位点特异性缀合，并且选自硫醇、马来酰亚胺、2-吡啶基二硫代变体、芳族砜或乙烯基砜、丙烯酸酯、溴代或碘代乙酰胺、叠氮化物、炔烃、二苯并环辛基(dbco)、羰基、2-氨基-苯甲醛或2-氨基-苯乙酮基团、酰肼、肟、酰基三氟硼酸钾、o-氨基甲酰基羟基胺、反式环辛烯、四嗪、三芳基膦、硼酸和碘。
5.权利要求1-4中任一项的化合物，其中所述抗体是单特异性或多特异性全长抗体、单特异性或多特异性单链抗体、单特异性或多特异性纳米抗体(单结构域抗体)、或其单特异性或多特异性抗原结合结构域。
6.权利要求1-5中任一项的化合物，其中所述抗体是单特异性单链抗体。
7.权利要求6的化合物，其中所述单特异性单链抗体结合肿瘤相关抗原(taa)例如her2、cmet、pdl1或cd47。
8.权利要求7的化合物，其中所述单特异性单链抗体具有与her2结合的两个结合结构域。
9.权利要求8的化合物，其中所述单特异性单链抗体具有如seq id no.3所示的氨基酸序列。
10.权利要求1-5中任一项的化合物，其中所述抗体是双特异性抗体，例如双特异性单链抗体。
11.权利要求10的化合物，其中所述双特异性抗体的两个结合结构域与相同的肿瘤相关抗原(taa)结合、与两个不同的taa结合、或与taa和t细胞上表达的抗原(例如t细胞受体的组分)或nk细胞上表达的抗原结合。
12.权利要求11的化合物，其中所述抗体是抗pdl1x抗cd47单链双特异性抗体。
13.权利要求12的化合物，其中所述抗体具有如seq id no.1所示的氨基酸序列。
14.权利要求11的化合物，其中所述抗体是抗her2(1)×抗her2(2)单链双特异性抗体。
15.权利要求14的化合物，其中所述抗体具有如seq id no.2所示的氨基酸序列。
16.权利要求11的化合物，其中所述抗体是抗cmet(1)x抗cmet(2)单链双特异性抗体。
17.权利要求16的化合物，其中所述抗体具有如seq id no.6所示的氨基酸序列。
18.权利要求6-9中任一项的化合物，其中所述单特异性单链抗体的两个结合结构域经由肽接头连接，并且其中所述接头包含半胱氨酸或非天然氨基酸残基用于所述抗体与(l1)a的位点特异性缀合。
19.权利要求10-17中任一项的化合物，其中所述双特异性单链抗体的两个结合结构域经由肽接头连接，并且其中所述接头包含半胱氨酸或非天然氨基酸残基用于所述抗体与(l1)a的位点特异性缀合。
20.权利要求18或19的化合物，其中所述非天然氨基酸残基选自基因编码的烯烃赖氨酸(如n6-(己-5-烯酰基)-l-赖氨酸)、2-氨基-8-氧代壬酸、间或对-乙酰苯丙氨酸、含β-二酮侧链的氨基酸(如2-氨基-3-(4-(3-氧代丁酰基)苯基)丙酸)、(s)-2-氨基-6-(((1r,2r)-2-叠氮环戊氧基)羰基氨基)己酸、叠氮高丙氨酸、吡咯赖氨酸类似物n6-((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)-l-赖氨酸、(s)-2-氨基-6-戊-4-炔氨基己酸、(s)-2-氨基-6-((丙-2-炔基氧基)羰基氨基)己酸、(s)-2-氨基-6-((2-叠氮乙氧基)羰基氨基)己酸、p-叠氮苯丙氨酸、对叠氮苯丙氨酸、nε-丙烯酰基-l-赖氨酸、nε-5-降冰片烯-2-基氧基羰基-l-赖氨酸、n-ε-(环辛-2-炔-1基-氧基)羰基)-l-赖氨酸、n-ε-(2-(环辛-2-炔-1-基氧基)乙基)羰基-l-赖氨酸、和基因编码的四嗪氨基酸(如4-(6-甲基-s-四嗪-3-基)氨基苯丙氨酸)。
21.权利要求1-20中任一项的化合物，其中所述含羟基药物d选自dna交联剂、微管抑制剂、dna烷化剂、拓扑异构酶抑制剂、蛋白质降解剂、sting激动剂或其组合。
22.权利要求21的化合物，其中所述含羟基药物d选自长春花生物碱、莱利霉素(laulimalide)、秋水仙碱、微管溶素(tubulysin)、念珠藻素(cryptophycin)、哈米特林(hemiasterlin)、西马多丁(cemadotin)、根霉素(rhizoxin)、圆皮海绵内酯(discodermolide)、根薯酮内酯(taccalonolide)a或b或af或aj、根薯酮内酯ai-环氧化物、ca-4、埃博霉素a和b、紫杉烷、紫杉醇、多西他赛、埃博霉素、isgd-1882、centanamycin、pnu-159682、uncialamycin、吲哚啉苯二氮卓二聚体、β-鹅膏蕈碱、鹅膏毒素(amatoxin)、泰兰斯他汀(thailanstatin)、卡利奇霉素(calicheamicin)、蒽环霉素、道诺霉素、拉洛他赛、替司他赛、奥他赛、cc-1065、dxd、sn38、拓扑替康、cpt-11、喜树碱、鲁比替康、苔藓抑素、callystatin、比折来新、倍癌霉素、五加素(eleutherobin)、水鬼蕉碱(pancratistatin)、sarcodictyin、海绵抑素(spongistatin)、雌莫司汀、泼尼莫司汀、氯脲霉素、雷莫司汀、卡利奇霉素、达内霉素(dynemicin)、埃斯培拉霉素(esperamicin)、新制癌菌素发色团、阿克那霉素(aclacinomysin)、阿奇霉素、博来霉素、洋红霉素(caminomycin)、嗜癌素(carzinophilin)、色霉素、道诺霉素、地托比星、多柔比星、表柔比星、伊索比星、伊达比星、麻西罗霉素、麦考酚酸、诺加霉素、培洛霉素、嘌呤霉素、奎拉霉素、罗多比星、链霉黑素、链脲菌素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、氟达拉滨、安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷(胞嘧啶阿拉伯糖苷、ara-c)、吉西他滨、卡培他滨、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷、卡普睾酮、环硫雄醇、曲洛司坦、依利醋铵、美登素、安丝菌素、米托蒽醌、莫哌达醇、喷司他丁、吡柔比星、依托泊苷、足叶草毒素、利索新、细格孢氮杂酸、t-2霉菌毒素、verracurin a、漆斑菌素a、anguidine、长春地辛、甘露莫司汀、二溴甘露醇、二溴卫矛醇、长春花碱、米托蒽醌、长春新碱、长春瑞滨、替尼泊苷、希罗达、雷洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、雌二醇、曲沃昔芬、雷诺昔芬、ly117018、奥那司酮、比卡鲁胺、亮丙瑞林、戈舍瑞林，或其药学上可接受的盐、酸或衍生物，或其组合。
23.权利要求21的化合物，其中d选自倍癌霉素、dxd、sn38、拓扑替康、cpt-11、喜树碱、鲁比替康、或其衍生物、或其组合。
24.权利要求1-23中任一项的化合物，其中所述非免疫原性聚合物是聚乙二醇(peg)。
25.权利要求24的化合物，其中所述peg是线性peg或带支链的peg。
26.权利要求24或25的化合物，其中所述peg的至少一个末端被甲基或低分子量烷基封端。
27.权利要求24-26中任一项的化合物，其中所述peg的总分子量为3000至100000。
28.权利要求24-27中任一项的化合物，其中所述peg通过永久键或可裂解键连接至所述三官能或四官能或任何其他环状或非环状多官能部分t(例如赖氨酸)。
29.式(ic)的化合物
30.权利要求29的化合物，其中(l1)a的接头末端的官能团能够与a位点特异性缀合，并且选自硫醇、马来酰亚胺、2-吡啶基二硫代变体、芳族砜或乙烯基砜、丙烯酸酯、溴代或碘代乙酰胺、叠氮化物、炔烃、二苯并环辛基(dbco)、羰基、2-氨基-苯甲醛或2-氨基-苯乙酮基团、酰肼、肟、酰基三氟硼酸钾、o-氨基甲酰基羟基胺、反式环辛烯、四嗪、三芳基膦、硼酸和碘。
31...
【专利技术属性】
技术研发人员：乌德春，刘树民，尹树强，文瑜，
申请(专利权)人：深圳康源久远生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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