【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学，特别是涉及斯氏并殖吸虫线粒体coi基因标准全序列及其扩增引物、试剂盒和检测方法。
技术介绍
1、并殖吸虫是我国常见的食源性寄生虫之一，作为其属内主要虫种之一，斯氏并殖吸虫广泛流行于我国四川、云南、广西等地区，因其在人体内一般不能发育为成虫，故主要依靠幼虫移行引起多种脏器损害，尤其侵犯脑、眼、心包等，对人体健康造成严重危害，另外，由于斯氏并殖吸虫感染导致的临床表现复杂多变，常被当作结核、肿瘤等其它疾病而导致误诊、误治。
2、并殖吸虫种类繁多，全球现已报道的并殖吸虫超过50种，其分类主要依据为虫体不同时期形态差异，缺乏准确性，尤其是种内变异度较高的虫种，常因流行地区、寄生宿主的不同而呈现出不同的形态特征，某些偶然发生的自然因素或样本保存、检测时的人为影响也能引起成虫体的形态变化，导致同一虫种被当作不同的种类而被报道，造成并殖吸虫属内较为普遍的同种异名现象。
3、得益于分子生物学的快速发展，分子检测技术已被广泛应用于寄生虫的分类鉴别，较好地弥补了传统形态学鉴定的不足的同时，也使得寄生虫遗传多样性与系统进化的研究成为可能。现有的分子证据显示，并殖吸虫属内实际具有独立的虫种分类学地位的实际可能仅有30余种，但由于仍然缺乏其中大部分虫种的遗传信息，目前该属内的虫种准确分类尚未能完全明晰。以斯氏并殖吸虫为例，有学者提出该虫种为主要流行于我国的斯氏并殖吸虫(p.skrjabini skrjabini)与主要流行于日本的宫崎并殖吸虫(p.skrjabinimiyazakii)的混合种，但由于缺乏足
4、线粒体dna因其具有的多拷贝、变异快、缺乏重组、分子量小等特点，是用于物种鉴定分类和系统发生关系分析的首选分子标记，其中又以细胞色素c氧化酶亚基i(coi)基因最为常用。目前国内外尚未有斯氏并殖吸虫coi基因全序列的报道，genbank中已收录的斯氏并殖吸虫coi基因序列最长仅约400bp，不足coi全序列的三分之一，如此短的片段所能提供的信息极为有限，可能导致亲缘关系较近或近期分化物种的错误识别，也难以发现种内不同群体间的遗传差异。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供斯氏并殖吸虫线粒体coi基因标准全序列及其扩增引物、试剂盒和检测方法，以解决上述现有技术存在的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
3、本专利技术提供斯氏并殖吸虫线粒体coi基因标准全序列，其核苷酸序列如seq idno.1所示。
4、本专利技术还提供特异性识别所述斯氏并殖吸虫线粒体coi基因标准全序列的引物，由如seq id no.2所示的上游引物和如seq id no.3所示的下游引物组成。
5、本专利技术还提供一种检测斯氏并殖吸虫的产品，包括所述的引物。
6、优选的是，所述产品包括试剂或试剂盒。
7、本专利技术还提供一种非疾病诊断目的地检测斯氏并殖吸虫的方法，提取待测样本dna，利用所述引物进行pcr扩增与测序，测序结果与所述斯氏并殖吸虫线粒体coi基因标准全序列进行比对，判断所述检测样本是否为斯氏并殖吸虫。
8、优选的是，所述pcr扩增的反应体系包括：2×taq pcr扩增试剂12.5μl，10μmol/l上下游引物各1μl，无核酸酶水9.5μl，样本模板dna 1μl。
9、优选的是，所述pcr扩增的反应程序为：94℃变性30s，55℃退火45s，72℃延伸2min30s，40个循环。
10、本专利技术还提供一种并殖吸虫囊蚴的分类鉴别方法，提取待测样本dna，利用所述引物进行pcr扩增与测序，测序结果与所述斯氏并殖吸虫线粒体coi基因标准全序列进行比对，对待测样本进行分类鉴别。
11、本专利技术还提供所述斯氏并殖吸虫线粒体coi基因标准全序列在并殖吸虫囊蚴的分类鉴别、斯氏并殖吸虫遗传多态性分析中的应用。
12、基于上述技术方案，本专利技术具有以下技术效果：
13、1.本专利技术首次公布了斯氏并殖吸虫coi基因标准全序列，填补了genbank中斯氏并殖吸虫coi基因全序列的空白，为并殖吸虫的分子分类学研究提供了有力的分子证据。
14、2.本专利技术提供的引物、试剂盒可通过一次扩增，高效、特异地获取斯氏并殖吸虫coi基因全序列，从而提供更多有效的遗传信息，更好地实现斯氏并殖吸虫分类鉴别与遗传进化研究。
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1.斯氏并殖吸虫线粒体COI基因标准全序列，其特征在于，其核苷酸序列如SEQID NO.1所示。
2.特异性识别权利要求1所述斯氏并殖吸虫线粒体COI基因标准全序列的引物，其特征在于，由如SEQ ID NO.2所示的上游引物和如SEQ ID NO.3所示的下游引物组成。
3.一种检测斯氏并殖吸虫的产品，其特征在于，包括权利要求2所述的引物。
4.根据权利要求3所述的产品，其特征在于，所述产品包括试剂或试剂盒。
5.一种非疾病诊断目的地检测斯氏并殖吸虫的方法，其特征在于，提取待测样本DNA，利用权利要求2所述引物进行PCR扩增与测序，测序结果与权利要求1所述斯氏并殖吸虫线粒体COI基因标准全序列进行比对，判断所述检测样本是否为斯氏并殖吸虫。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系包括：2×Taq PCR扩增试剂12.5μL，10μmol/L上下游引物各1μL，无核酸酶水9.5μL，样本模板DNA 1μL。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应程序为：94
8.一种并殖吸虫囊蚴的分类鉴别方法，其特征在于，提取待测样本DNA，利用权利要求2所述引物进行PCR扩增与测序，测序结果与权利要求1所述斯氏并殖吸虫线粒体COI基因标准全序列进行比对，对待测样本进行分类鉴别。
9.权利要求1所述斯氏并殖吸虫线粒体COI基因标准全序列在并殖吸虫囊蚴的分类鉴别、斯氏并殖吸虫遗传多态性分析中的应用。
...【技术特征摘要】
1.斯氏并殖吸虫线粒体coi基因标准全序列，其特征在于，其核苷酸序列如seqid no.1所示。
2.特异性识别权利要求1所述斯氏并殖吸虫线粒体coi基因标准全序列的引物，其特征在于，由如seq id no.2所示的上游引物和如seq id no.3所示的下游引物组成。
3.一种检测斯氏并殖吸虫的产品，其特征在于，包括权利要求2所述的引物。
4.根据权利要求3所述的产品，其特征在于，所述产品包括试剂或试剂盒。
5.一种非疾病诊断目的地检测斯氏并殖吸虫的方法，其特征在于，提取待测样本dna，利用权利要求2所述引物进行pcr扩增与测序，测序结果与权利要求1所述斯氏并殖吸虫线粒体coi基因标准全序列进行比对，判断所述检测样本是否为斯氏并殖吸虫。
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【专利技术属性】
技术研发人员：陆定，尚婧晔，李荣智，陈琳，徐亮，刘阳，钟波，
申请(专利权)人：四川省疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：
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