本发明专利技术公开了一种诱导大蒜胚性悬浮培养系体胚用的培养基属大蒜组织培养技术。将６－苄基嘌呤６－ＢＡ、激动素ＫＴ、萘乙酸ＮＡＡ、蔗糖和琼脂溶解于基本培养基Ｂ５中，调整ＰＨ值至５．８－６．０制成；其各组份的用量为：以１Ｌ基本培养基Ｂ５加入量计：Ｂ５?１Ｌ，６－ＢＡ?５ｍｇ，ＫＴ?１ｍｇ，ＩＡＡ?０．０１ｍｇ，蔗糖３０ｇ和琼脂６ｇ。本发明专利技术的积极效果是：克服了大蒜悬浮培养难以成系、体细胞胚（简称体胚）难诱导的难题，利用本培养基可以使大蒜胚性悬浮培养系高频率诱导出体胚。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及大蒜组织培养技术，具体是一种诱导大蒜胚性悬浮培养系体胚用的培 养基。特别适用于利用从大蒜胚性悬浮培养系转固体培养后体细胞胚(简称体胚)的诱导。
技术介绍
大蒜(Allium sativumL.)是无性繁殖植物，具有较高的食用及药用价值，利用生 物工程技术改良其品质.抗病虫性等性状现已引起广泛的重视，这些生物技术应用的关键 环节是建立一个大蒜细胞组织培养、增殖的有效植株再生体系。悬浮培养技术可以在短时 间内培养出大量同质的试验材料，大幅度提高试验效率，为大蒜生物工程提供理想的试验 材料。张毅等利用大蒜悬浮培养提取大蒜次生代谢物质有过报道(1993)；但利用大蒜悬浮 培养技术，建立悬浮培养系及有效植株高频率再生体系尚未报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是解决大蒜悬浮培养系转管固体培养上增殖培养时体胚难诱导的 技术难题，提供一种大蒜胚性悬浮培养系体胚诱导用的培养基。本专利技术的技术方案如下一种诱导大蒜胚性悬浮培养系体胚用的培养基，是将 6-苄基嘌呤6-BA、激动素KT、萘乙酸NAA、蔗糖和琼脂溶解于基本培养基B5中，调整PH值 至5. 8-6. 0制成；其各组份的用量为以1L基本培养基B5加入量计B51L6-BA 5mgKTlmgNAA 0. Olmg蔗糖30g琼脂6g。上述原料中，B5为基本培养基，提供培养组织生长发育所需的无机营养元素和部分 有机营养元素；6-BA、KT、NM是植物生长调节剂，具有促进培养物愈伤组织形成和发育的作 用；蔗糖提供培养组织生长发育所的碳素营养；琼脂的主要作用是固化培养基，起支撑作用。上述各组份的用量是专利技术人在理论分析的基础上进行大量试验摸索总结得出的， 按上述比例配制培养基，具有促使大蒜胚性悬浮培养系形成体细胞胚的效果。上述培养基的制作方法是将6-BA、KT、NAA、蔗糖溶解于B5，搅拌均勻，PH值调整为 5. 8-6. 0之间即可。本专利技术的积极效果是克服了大蒜悬浮培养难以成系、体细胞胚(简称体胚)难诱 导的难题，利用本培养基可以使大蒜胚性悬浮培养系高频率诱导出体胚。具体实施例方式以下通过实施例和对照例进一步阐述本专利技术的有益效果3对照例1B52,4-D6-BANAA蔗糖琼脂对照例2B52,4-DKTNAA蔗糖琼脂实施例1B5 1L6-BA 5mgKT lmgNAA 0. Olmg蔗糖30g琼脂6g试验方法及结果将上述实施例的培养基用于大蒜胚性悬浮培养系转固体培养后体胚的诱导试 验材料大蒜徐州白蒜茎尖分生组织悬浮培养诱导出的胚性愈伤组织。方法将大蒜徐州白蒜茎尖分生组织诱导出胚性愈伤组织经悬浮培养后，将诱导 出的胚性悬浮系转移到装有上述固体培养20ml (PH5. 5)的三角瓶中，培养条件为27士 1°C， 每日12h. lOOOlx光照。结果将大蒜悬浮培养系中3mm以上细胞团转管接种在上述三种培养基上，进行 愈伤组织的增殖和体胚的进一步发育诱导。经过4周的继代培养，接种在对照例1培养基 上的胚性愈伤组织颜色逐渐由淡黄色变为灰白色，组织增殖速度变快，结构变利疏松，丧失 胚性发育能力。接种在对照例2培养基上的胚性细胞团只有10%的细胞团保持亮黄色，维 持其胚性；90%的细胞团丧失了胚性。接种在本实施例1培养基上的细胞团89%仍表现为 亮黄色.结构致密.有光泽.生长缓慢，并且逐渐有瘤状突起，经细胞学观察，这时期体胚 的发育逐渐成熟。由此可见高比例的细胞分裂素/生长素有利于体胚的成熟，2，4-D的存在 不利于体胚的成熟分化，大蒜胚胎发生对生长素浓度的要求极低。综合以上分析，得出大蒜胚性悬浮系体胚诱导的最佳培养基为B5 1L6-BA 5mg1L 0. 5mg 0. 5mg 0. 2mg 30g 6g1L 0. 5mg 0. lmg 0. 2mg 30g 6gKT lmgNAA 0. Olmg蔗糖30g琼脂6g。权利要求一种诱导大蒜胚性悬浮培养系体胚用的培养基，其特征是将6-苄基嘌呤6-BA、激动素KT、萘乙酸NAA、蔗糖和琼脂溶解于基本培养基B5中，调整PH值至5.8-6.0制成；其各组份的用量为以1L基本培养基B5加入量计B5 1L6-BA5mgKT 1mgNAA 0.01mg蔗糖30g琼脂6g。全文摘要本专利技术公开了一种诱导大蒜胚性悬浮培养系体胚用的培养基属大蒜组织培养技术。将6-苄基嘌呤6-BA、激动素KT、萘乙酸NAA、蔗糖和琼脂溶解于基本培养基B5中，调整PH值至5.8-6.0制成；其各组份的用量为以1L基本培养基B5加入量计B5 1L，6-BA 5mg，KT 1mg，IAA 0.01mg，蔗糖30g和琼脂6g。本专利技术的积极效果是克服了大蒜悬浮培养难以成系、体细胞胚(简称体胚)难诱导的难题，利用本培养基可以使大蒜胚性悬浮培养系高频率诱导出体胚。文档编号C12N5/04GK101851601SQ20101016960公开日2010年10月6日 申请日期2010年5月6日 优先权日2010年5月6日专利技术者张允刚 申请人:江苏徐淮地区徐州农业科学研究所本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种诱导大蒜胚性悬浮培养系体胚用的培养基，其特征是：将６－苄基嘌呤６－ＢＡ、激动素ＫＴ、萘乙酸ＮＡＡ、蔗糖和琼脂溶解于基本培养基Ｂ５中，调整ＰＨ值至５．８－６．０制成；其各组份的用量为：以１Ｌ基本培养基Ｂ５加入量计： Ｂ５ １Ｌ ６－ＢＡ ５ｍｇ ＫＴ １ｍｇ ＮＡＡ ０．０１ｍｇ 蔗糖 ３０ｇ 琼脂 ６ｇ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张允刚，
申请(专利权)人：江苏徐淮地区徐州农业科学研究所，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
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