用于筛查儿童非酒精性脂肪肝病的微生物组合标志物及其应用和产品制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，公开了一种用于筛查儿童非酒精性脂肪肝病的微生物组合标志物及其应用和产品，所述微生物组合标志物包括以下种类的菌株：肺炎克雷伯菌

【技术实现步骤摘要】
用于筛查儿童非酒精性脂肪肝病的微生物组合标志物及其应用和产品


[0001]本专利技术属于生物医药
，尤其涉及一种用于筛查非酒精性脂肪肝病的微生物组合标志物及其应用和产品，实现非侵入性手段检测人群
(
尤其是肥胖儿童个体
)
是否患有非酒精性脂肪性肝病
。

技术介绍

[0002]非酒精性脂肪肝病
(Non
‑
alcoholic fatty liver disease
，
NAFLD)
是最为常见的慢性疾病之一，全球患病率高达
20
‑
30
％，已成为严重的公共卫生问题
。
近年来，肥胖与
NAFLD
呈现低龄化的趋势，肥胖儿童
NAFLD
人群患病率
40
‑
70
％
。NAFLD
是指“无过量饮酒史和其他损伤因素所导致的慢性肝病，以肝实质细胞脂肪浸润和脂肪贮积为特征的临床病理综合征，包括单纯性脂肪肝
(NAFL)、
非酒精性脂肪肝炎
(NASH)
，以及相关的肝纤维化，肝硬化和肝细胞癌”。
儿童期
NAFLD
的发生影响肝脏代谢，可能促进疾病不可逆性的进展
。
此外，
NAFLD
还会增加高脂血症
、
早期动脉粥样硬化
、
糖尿病
、
肾病等风险，后果十分严重
。
然而其发病机制尚未阐明，目前尚无可批准使用的治疗
NAFLD
的特定药物，因此有效的筛查肥胖儿童
NAFLD
的发生，对公共健康及其重要
。
[0003]现阶段，
NAFLD
诊断的金标准仍然是肝脏穿刺活检结果，但由于其侵入性
、
有创性
、
操作难度大
、
以及患者及家长的接受程度较低等原因，并不能广泛应用
。
肝脏影像技术需要专业技术人员对结果进行解读，极大减少了信息的可利用度，如超声等通常由于腹部脂肪等原因，掩盖了肥胖儿童中
NAFLD
的诊断，而
CT
和
MRI
价格昂贵，不宜作为常规的
NAFLD
筛查方法
。
生化检测指标如转氨酶
、
血脂
、
血糖等水平只能作为辅助诊断，其对
NAFLD
的特异性不高，且不能区分疾病的进展程度如
NAFL
和
NASH
等亚型
。NASH
为
NAFL
的进一步发展，及肝脏出现炎症积累，影响肝功能，进一步导致不可逆的进展，有效的区分
NAFL
和
NASH
对临床医生的治疗方案具有重要意义
。
此外，上述方法都存在其固有缺陷，且主要用于成人年和一般人群，目前尚无针对儿童
NAFLD
的特定筛查手段，特别是肥胖儿童
。
[0004]近年研究发现粪便中的肠道菌群与
NAFLD
密切相关，大多数研究仍处在利用高通量
16SrDNA
扩增子测序技术，探索肠道菌群菌属水平的特征
。
然而，在儿童中的报道较少，且由于地区
、
年龄
、BMI
水平等原因，不同研究得到的差异菌属存在差异
。
目前尚无基于肠道菌群诊断肥胖儿童相关
NAFLD
的方法
。
另外，现有技术中试剂盒主要采用肠杆菌科
(Enterobacteriaceae)
中的枸橼酸杆菌属
(Citrobacter)、
克雷伯氏杆菌属
(Klebsiella)、
韦荣球菌属
(Veillonella)
等微生物组合标志物来预测和诊断成人非酒精性脂肪肝病的风险程度，特别是在非肥胖型受试者中区分肝脏的纤维化程度方面具有非常优异的性能
。
然而，该试剂盒在肥胖人群中的诊断效能不高，不利于肝脏纤维化进展前期脂肪性肝病的早期起诊断
。
另外，
Yuan
等人发现从自动酿酒综合征的患者中分离获得的高产酒精肺炎克雷伯菌株
W14
和
TH1
与成人脂肪性肝病显著关联，然而这些菌株作为物标志物来诊断或预测非酒精性脂肪肝病潜能尚不清楚
。
此外，细菌按照界门纲目科属种进行分类，每一种细菌中具
有不同的细菌菌株组成，且细菌具有菌株特异性，目前研究停留在菌属水平研究结果，并不能明确菌株水平差异，也不能获得特定菌株进行靶向功能研究，科
、
属及以上分类水平不利于特定肠道菌株的靶向检测，极大的阻碍了肥胖儿童
NAFLD
的早期筛查和诊断
。
[0005]因此，需要寻找一种基于肠道细菌菌株水平的非侵入性
、
特异性好
、
灵敏度高的针对肥胖儿童
NAFLD
筛查方法，并且有效的判别肥胖儿童
NAFLD
的早期进展程度，如
NAFL
和
NASH
，为肥胖
NAFLD
儿童的早期健康管理和精准治疗提供依据
。

技术实现思路

[0006]本专利技术所要解决的技术问题是，克服以上
技术介绍
中提到的不足和缺陷，提供一种用于筛查儿童非酒精性脂肪肝病的微生物组合标志物及其应用和产品
。
基于肠道细菌菌株水平，可实现非侵入性
、
特异度好
、
灵敏度高
、
操作方便
、
价格低廉的肥胖儿童
NAFLD
的筛查
。
该微生物组合标志物包含四株从肥胖儿童
NAFLD
的粪便中自主分离获得的肠道细菌菌株，使用该菌株组合实现无创性筛查肥胖儿童
NAFLD
患病情况，有效的区分
NAFL
和
NASH
并合理判断其疾病进展程度
。
[0007]为解决上述技术问题，本专利技术提出的技术方案为：
[0008]第一方面，本专利技术提供一种用于筛查儿童
NAFLD
的微生物组合标志物，所述微生物组合标志物包括以下种类的菌株：肺炎克雷伯菌
Y129(Klebsiella pneumoniae Y129
，
NCBI
登录号
OP874955)
，大肠杆菌
Y64(Escherichia coli Y64
，
NCBI
登录号
OP8750本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于筛查儿童非酒精性脂肪肝病的微生物组合标志物，其特征在于，所述微生物组合标志物包括以下种类的菌株：肺炎克雷伯菌
Y129(Klebsiella pneumoniae Y129)、
大肠杆菌
Y64(Escherichia coli Y64)、
屎肠球菌
B6(Enterococcus faecium.B6)、
口腔链球菌
R61(Streptococcus oralis R61)
，以上四株菌株所对应的
16s rRNA
序列分别如
SEQ ID NO:1
～4所示
。2.
一种检测样本中微生物组合标志物的试剂在制备筛查儿童非酒精性脂肪肝病的产品中的应用，其特征在于，所述微生物组合标志物如权利要求1所述
。3.
根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测样本中微生物组合标志物的试剂为通过测序技术
、
核酸杂交技术或核酸扩增技术检测样本中微生物组合标志物含量或丰度的试剂；所述样本包括粪便
、
肠道内容物
、
消化液
、
肠粘膜组织中的任意一种或多种
。4.
一种微生物组合标志物在构建筛查儿童非酒精性脂肪肝病模型中的应用，其特征在于，所述微生物组合标志物如权利要求1所述
。5.
根据权利要求5所述的应用，其特征在于，通过测定所有肥胖类型儿童样本中微生物组合标志物的含量或丰度，构建
ROC
曲线模型，以此建立区分单纯性肥胖儿童与肥胖
NAFL
儿童
、
单纯性肥胖
NASH
儿童
、
肥胖
NAFL
儿童和肥胖
NASH
儿童的模型；所述儿童为6‑
18
岁的人群
。6.
一种儿童非酒精性脂肪肝病的筛查诊断试剂盒，其特征在于，包含检测样本中所含微生物组合标志物的含量或丰度的试剂，所述微生物组合标志物如权利要求1所述
。7.
根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂中含有所述微生物组合标志物的特异性引物，所述特异性引物包括：肺炎克雷伯菌
Y129
的水溶引物：
F:5
’‑
CCTGGACAAAGACTGACGC
‑3’
，
R:5
’‑
GGGCACAACCTCCAAATC

【专利技术属性】
技术研发人员：韦佳，罗米扬，罗家有，杨飞，戴文，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：