使用耳畸蛋白双载体系统治疗感觉神经性听力损失的方法技术方案

本公开提供借助于

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用耳畸蛋白双载体系统治疗感觉神经性听力损失的方法
[0001]序列表
[0002]本申请含有序列表，所述序列表已以
ASCII
格式以电子方式提交并且特此通过引用整体并入本文
。ASCII
副本创建于
2022
年2月
18
日，命名为
51471
‑
008WO2_Sequence_Listing_2_17_22_ST25
并且大小为
366,491
个字节
。


[0003]本文描述了借助于
OTOF
基因疗法治疗
25
岁或
25
岁以上的人类受试者的感觉神经性听力损失和听神经病变
、
特别是与耳畸蛋白
(OTOF)
突变相关的疾病形式的组合物和方法
。
本公开提供了双载体系统，所述双载体系统包括含有编码
OTOF
蛋白的
N
末端部分的多核苷酸的第一核酸载体和含有编码
OTOF
蛋白的
C
末端部分的多核苷酸的第二核酸载体
。
这些载体可用于增加野生型
OTOF
的表达或向受试者
(
诸如患有感觉神经性听力损失的人类受试者
)
提供野生型
OTOF。

技术介绍

[0004]感觉神经性听力损失是一种由内耳细胞或从内耳投射至脑的神经通路的缺陷引起的听力损失
。
尽管感觉神经性听力损失通常是获得性的并且可由噪声
、
感染
、
头部创伤
、
耳毒性药物或衰老引起，但也存在与常染色体隐性突变相关的先天性形式的感觉神经性听力损失
。
常染色体隐性感觉神经性听力损失的一种此类形式与耳畸蛋白
(OTOF)
基因的突变相关，所述耳畸蛋白基因与语前非综合征性听力损失有关
。
近年来，治疗听力损失的努力越来越多地集中在基因疗法作为一种可能的解决方案；然而，
OTOF
因太大而不允许使用标准基因治疗方法来治疗
。
需要新的治疗剂来治疗
OTOF
相关的感觉神经性听力损失
。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供了用于治疗具有双等位基因耳畸蛋白
(OTOF)
突变的
25
岁或
25
岁以上的人类受试者的组合物和方法，已知所述突变引起听力损失和听神经病变
。
本文所述的组合物可用于通过基因疗法将野生型
(WT)OTOF
递送至受试者，并且因此可用于治疗受试者的听力损失和听神经病变
。
用于治疗双等位基因
OTOF
突变的基因疗法被认为在生命的第一年期间需要以恢复听力；然而，本专利技术人类已经确定基因疗法可恢复由于双等位基因
OTOF
突变而丧失的听力，即使治疗是在很多年之后开始
。
本文所述的组合物还可用于治疗具有双等位基因
OTOF
突变的受试者，所述受试者被鉴定为具有可检测的耳声发射
、
可检测的耳蜗微音效应和
/
或可检测的总和电位
。
[0006]在第一方面，本专利技术提供了一种通过向具有双等位基因耳畸蛋白
(OTOF)
突变的
25
岁或
25
岁以上的人类受试者施用治疗有效量的双载体系统来治疗所述受试者的方法，所述双载体系统包括：第一核酸载体，所述第一核酸载体含有可操作地连接至编码
OTOF
蛋白的
N
末端部分的第一编码多核苷酸的启动子；以及第二核酸载体，所述第二核酸载体含有编码
OTOF
蛋白的
C
末端部分的第二编码多核苷酸和定位于所述第二编码多核苷酸3’
的聚腺苷酸
化
(poly(A))
序列；其中所述第一核酸载体和所述第二核酸载体都不编码全长
OTOF
蛋白
。
[0007]在另一方面，本专利技术提供了一种通过向具有双等位基因耳畸蛋白
(OTOF)
突变并且被鉴定为具有可检测的耳声发射
、
可检测的耳蜗微音效应和
/
或可检测的总和电位的人类受试者施用治疗有效量的双载体系统来治疗所述受试者的方法，所述双载体系统包括：第一核酸载体，所述第一核酸载体含有可操作地连接至编码
OTOF
蛋白的
N
末端部分的第一编码多核苷酸的启动子；以及第二核酸载体，所述第二核酸载体含有编码
OTOF
蛋白的
C
末端部分的第二编码多核苷酸和定位于所述第二编码多核苷酸3’
的聚腺苷酸化
(poly(A))
序列；其中所述第一核酸载体和所述第二核酸载体都不编码全长
OTOF
蛋白
。
[0008]在前述方面中任一者的一些实施方案中，第一编码多核苷酸和第二编码多核苷酸并不重叠
。
[0009]在前述方面中任一者的一些实施方案中，第一核酸载体包括定位于第一编码多核苷酸3’
的剪接供体信号序列，并且第二核酸载体包括定位于第二编码多核苷酸5’
的剪接受体信号序列
。
在一些实施方案中，第一核酸载体包括定位于剪接供体信号序列3’
的第一重组基因区，并且第二核酸载体包括定位于剪接受体信号序列5’
的第二重组基因区
。
在一些实施方案中，第一重组基因区和第二重组基因区是相同的
。
在一些实施方案中，第一重组基因区和
/
或第二重组基因区是
AP
基因片段或
F1
噬菌体
AK
基因
。
在一些实施方案中，
F1
噬菌体
AK
基因包括或具有
SEQ ID NO:19
的序列
。
在一些实施方案中，
AP
基因片段包括或具有
SEQ ID NO:62
‑
67
中任一者的序列
。
在一些实施方案中，
AP
基因片段包括或具有
SEQ ID NO:65
的序列
。
在一些实施方案中，剪接供体序列包括或具有
SEQ ID NO:20
或
SEQ ID NO:68
的序列
。
在一些实施方案中，剪接受体序列包括或具有
SEQ ID NO:21
或
SEQ ID NO:69
的序列
。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种治疗具有双等位基因耳畸蛋白
(OTOF)
突变的
25
岁或
25
岁以上的人类受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的双载体系统，所述双载体系统包含：第一核酸载体，所述第一核酸载体包含可操作地连接至编码
OTOF
蛋白的
N
末端部分的第一编码多核苷酸的启动子；以及第二核酸载体，所述第二核酸载体包含编码
OTOF
蛋白的
C
末端部分的第二编码多核苷酸和定位于所述第二编码多核苷酸3’
的
poly(A)
序列；其中所述第一核酸载体和所述第二核酸载体都不编码全长
OTOF
蛋白
。2.
如权利要求1所述的方法，其中所述第一编码多核苷酸和所述第二编码多核苷酸并不重叠
。3.
如权利要求1或2所述的方法，其中所述第一核酸载体包含定位于所述第一编码多核苷酸3’
的剪接供体信号序列，并且所述第二核酸载体包含定位于所述第二编码多核苷酸5’
的剪接受体信号序列
。4.
如权利要求3所述的方法，其中所述第一核酸载体包含定位于所述剪接供体信号序列3’
的第一重组基因区，并且所述第二核酸载体包含定位于所述剪接受体信号序列5’
的第二重组基因区
。5.
如权利要求4所述的方法，其中所述第一重组基因区和所述第二重组基因区是相同的
。6.
如权利要求4或5所述的方法，其中所述第一重组基因区或所述第二重组基因区是
AP
基因片段或
F1
噬菌体
AK
基因
。7.
如权利要求4‑6中任一项所述的方法，其中所述第一核酸载体还包含定位于所述重组基因区3’
的降解信号序列；并且其中所述第二核酸载体还包含定位于所述重组基因区与所述剪接受体信号序列之间的降解信号序列
。8.
如权利要求1‑7中任一项所述的方法，其中所述第一编码多核苷酸和所述第二编码多核苷酸在
OTOF
外显子边界处分开
。9.
如权利要求1所述的方法，其中所述第一编码多核苷酸与所述第二编码多核苷酸部分地重叠
。10.
如权利要求9所述的方法，其中所述第一编码多核苷酸与所述第二编码多核苷酸重叠至少1千碱基
(kb)。11.
如权利要求9或
10
所述的方法，其中所述第一编码多核苷酸与所述第二编码多核苷酸之间的重叠区以
OTOF
外显子边界为中心
。12.
如权利要求
11
所述的方法，其中所述第一编码多核苷酸编码所述
OTOF
蛋白的
N
末端部分，并且包含
OTOF N
末端至所述重叠区中心处的所述外显子边界3’
的
500bp
；并且所述第二编码多核苷酸编码所述
OTOF
蛋白的
C
末端部分，并且包含所述重叠区中心处的所述外显子边界5’
的
500bp
至所述
OTOF C
末端
。13.
如权利要求
8、11
和
12
中任一项所述的方法，其中选择所述
OTOF
外显子边界，使得所述第一编码多核苷酸编码整个
C2C
结构域，并且所述第二编码多核苷酸编码整个
C2D
结构域
。14.
如权利要求8和
11
‑
13
中任一项所述的方法，其中所述
OTOF
外显子边界是外显子
19/20
边界
、
外显子
20/21
边界或外显子
21/22
边界
。
15.
如权利要求
8、11
和
12
中任一项所述的方法，其中选择所述
OTOF
外显子边界，使得所述第一编码多核苷酸编码整个
C2D
结构域，并且所述第二编码多核苷酸编码整个
C2E
结构域
。16.
如权利要求
8、11、12
和
15
中任一项所述的方法，其中所述
OTOF
外显子边界是外显子
26/27
边界或外显子
28/29
边界
。17.
如权利要求
8、11
和
12
中任一项所述的方法，其中所述
OTOF
外显子边界在编码
C2D
结构域的所述第一编码多核苷酸和所述第二编码多核苷酸的一部分内
。18.
如权利要求
8、11、12
和
17
中任一项所述的方法，其中所述
OTOF
外显子边界是外显子
24/25
边界或外显子
25/26
边界
。19.
如权利要求1‑
18
中任一项所述的方法，其中所述第一编码多核苷酸和所述第二编码多核苷酸中的每一者编码约一半的所述
OTOF
蛋白序列
。20.
如权利要求1‑
19
中任一项所述的方法，其中所述第一核酸载体和所述第二核酸载体不包含
OTOF
非翻译区
(UTR)。21.
如权利要求1‑
19
中任一项所述的方法，其中所述第一核酸载体包含
OTOF 5
’
UTR。22.
如权利要求1‑
19
和
21
中任一项所述的方法，其中所述第二核酸载体包含
OTOF 3
’
UTR。23.
如权利要求1‑
22
中任一项所述的方法，其中编码所述
OTOF
蛋白的所述第一编码多核苷酸和所述第二编码多核苷酸不包含内含子
。24.
如权利要求1‑
23
中任一项所述的方法，其中所述
OTOF
蛋白是哺乳动物
OTOF
蛋白
。25.
如权利要求
24
所述的方法，其中所述
OTOF
蛋白是人类
OTOF
蛋白
。26.
如权利要求1‑
25
中任一项所述的方法，其中所述
OTOF
蛋白与
SEQ ID NO
：
1、SEQ ID NO
：
2、SEQ ID NO
：
3、SEQ ID NO
：4或
SEQ ID NO
：5的序列具有至少
85
％同一性
。27.
如权利要求
26
所述的方法，其中所述
OTOF
蛋白具有
SEQ ID NO
：1的序列
。28.
如权利要求
26
所述的方法，其中所述
OTOF
蛋白具有
SEQ ID NO
：5的序列
。29....

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：分贝治疗公司，
类型：发明
国别省市：