一种镍离子金属螯合亲和层析介质及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种镍离子金属螯合亲和层析介质及其制备方法，所述镍离子金属螯合亲和层析介质，以多孔的葡聚糖凝胶微球为基质，在所述葡聚糖凝胶微球的表面键合有烯丙基缩水甘油醚，所述烯丙基缩水甘油醚连接有乙二胺四乙酸，所述乙二胺四乙酸络合有镍离子

【技术实现步骤摘要】
一种镍离子金属螯合亲和层析介质及其制备方法


[0001]本专利技术涉及一种层析介质，特别是指一种镍离子金属螯合亲和层析介质及其制备方法
。

技术介绍

[0002]固定化金属螯合亲和层析技术作为蛋白质的分离纯化的方式之一，在制药等领域具有重要作用
。
固定化金属螯合亲和层析技术采用的层析介质中含有过渡金属离子，过渡金属离子能够与蛋白质表面的色氨酸
、
半胱氨酸
、
组氨酸配位结合，而不同蛋白质上的上述氨基酸种类
、
数量
、
空间构象
、
位置不同，配位结合时的亲和力大小不同，从而在层析时被分离，实现纯化
。
[0003]镍离子是常用的过渡金属离子之一，目前的镍离子金属螯合亲和层析介质主要采用琼脂糖凝胶作为基质材料，其机械强度低，作为层析介质稳定性差，重复多次使用时分离目标蛋白质的性能下降较快，使用寿命较短
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种镍离子金属螯合亲和层析介质及其制备方法，以解决现有技术中的镍离子金属螯合亲和层析介质的机械强度低
、
稳定性差的问题
。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案如下：
[0006]一种镍离子金属螯合亲和层析介质，以多孔的葡聚糖凝胶微球为基质，在所述葡聚糖凝胶微球的表面键合有烯丙基缩水甘油醚，所述烯丙基缩水甘油醚连接有乙二胺四乙酸，所述乙二胺四乙酸络合有镍离子/>。
[0007]优选地，所述多孔的葡聚糖凝胶微球的制备原料包括葡聚糖的水溶液
、
乙烯基三乙氧基硅烷
、
硅油
、
氯苯
。
[0008]优选地，所述多孔的葡聚糖凝胶微球通过如下方法得到：取葡聚糖的水溶液，在
50
‑
80℃
下，将乙烯基三乙氧基硅烷
、
硅油
、
氯苯的混合液加入其中，搅拌均匀，然后，向其中加入氢氧化钠溶液，在
85
‑
95℃
下反应1‑
5h
，过滤，得到多孔的葡聚糖凝胶微球
。
[0009]优选地，所述葡聚糖的水溶液与所述乙烯基三乙氧基硅烷
、
硅油
、
氯苯的混合液的体积比为1：
(4
‑
8)。
[0010]优选地，所述葡聚糖的水溶液的浓度为
0.3
‑
0.8g/ml。
[0011]优选地，所述乙烯基三乙氧基硅烷
、
硅油
、
氯苯的质量比为
(1
‑
5)
：
(1
‑
3)
：
50。
[0012]优选地，所述葡聚糖凝胶微球的粒径为
100
ꢀ‑
120
μ
m。
[0013]优选地，所述镍离子通过醋酸镍缓冲溶液与所述乙二胺四乙酸络合
。
[0014]本专利技术提供一种镍离子金属螯合亲和层析介质的制备方法，包括如下步骤：
[0015](1)
取多孔的葡聚糖凝胶微球，向其中加入烯丙基缩水甘油醚，反应后，得到键合有烯丙基缩水甘油醚的微球；
[0016](2)
向步骤
(1)
中得到的所述键合有烯丙基缩水甘油醚的微球中加入乙二胺四乙
酸，反应后，得到键合有金属螯合配基的微球；
[0017](3)
将步骤
(2)
中得到的所述键合有金属螯合配基的微球浸泡于醋酸镍缓冲溶液中，反应后，得到镍离子金属螯合亲和层析介质
。
[0018]优选地，步骤
(1)
具体包括：将多孔的葡聚糖凝胶微球加入水中，向其中加入硫酸钠
、
氢氧化钠，在温度
40
‑
50℃、
搅拌速度
110
‑
150rpm
下，反应1‑
2h
，再向其中加入烯丙基缩水甘油醚，在温度
40
‑
50℃、
搅拌速度
110
‑
150rpm
下，反应
16
‑
20h
，得到键合有烯丙基缩水甘油醚的微球
。
[0019]所述多孔的葡聚糖凝胶微球与水的用量关系为每
100ml
的水中加入
20
‑
50g
的所述多孔的葡聚糖凝胶微球；所述多孔的葡聚糖凝胶微球
、
硫酸钠
、
氢氧化钠
、
烯丙基缩水甘油醚的重量比为
1000:165:50:(100
‑
300)。
[0020]优选地，步骤
(2)
具体包括：向步骤
(1)
中得到的所述键合有烯丙基缩水甘油醚的微球中加入乙二胺四乙酸
、
乙醇，在
50
‑
65℃
下搅拌反应
10
‑
20h
，得到键合有金属螯合配基的微球
。
[0021]所述键合有烯丙基缩水甘油醚的微球
、
乙二胺四乙酸
、
乙醇的重量比为
100
：
(6
‑
10)
：
(100
‑
120)。
[0022]优选地，步骤
(3)
具体包括：将步骤
(2)
中得到的所述键合有金属螯合配基的微球浸泡于浓度为
1.0
‑
1.3mol/L、pH
值为4‑
4.5
的醋酸镍缓冲溶液中，在
40
‑
50℃
下搅拌反应
10
‑
20h
，得到镍离子金属螯合亲和层析介质
。
[0023]本专利技术的上述方案至少包括以下有益效果：
[0024](1)
本专利技术的镍离子金属螯合亲和层析介质，以多孔的葡聚糖凝胶微球为基质，在所述葡聚糖凝胶微球的表面键合有烯丙基缩水甘油醚，所述烯丙基缩水甘油醚连接有乙二胺四乙酸，所述乙二胺四乙酸络合有镍离子
。
所述的镍离子金属螯合亲和层析介质，采用所述乙二胺四乙酸与烯丙基缩水甘油醚键合，乙二胺四乙酸能够对
Ni
2+
进行络合，并有效提高层析介质的稳定性
。
[0025](2)
本专利技术的镍离子金属螯合亲和层析介质，所述多孔的葡聚糖凝胶微球的制备原料包括葡聚糖的水溶液
、
乙烯基三乙氧基硅烷
、
硅油
、
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种镍离子金属螯合亲和层析介质，其特征在于，以多孔的葡聚糖凝胶微球为基质，在所述葡聚糖凝胶微球的表面键合有烯丙基缩水甘油醚，所述烯丙基缩水甘油醚连接有乙二胺四乙酸，所述乙二胺四乙酸络合有镍离子
。2.
根据权利要求1所述的镍离子金属螯合亲和层析介质，其特征在于，所述多孔的葡聚糖凝胶微球的制备原料包括葡聚糖的水溶液
、
乙烯基三乙氧基硅烷
、
硅油
、
氯苯
。3.
根据权利要求2所述的镍离子金属螯合亲和层析介质，其特征在于，所述多孔的葡聚糖凝胶微球通过如下方法得到：取葡聚糖的水溶液，在
50
‑
80℃
下，将乙烯基三乙氧基硅烷
、
硅油
、
氯苯的混合液加入其中，搅拌均匀，然后，向其中加入氢氧化钠溶液，在
85
‑
95℃
下反应1‑
5h
，过滤，得到多孔的葡聚糖凝胶微球
。4.
根据权利要求3所述的镍离子金属螯合亲和层析介质，其特征在于，所述葡聚糖的水溶液与所述乙烯基三乙氧基硅烷
、
硅油
、
氯苯的混合液的体积比为1：
(4
‑
8)。5.
根据权利要求4所述的镍离子金属螯合亲和层析介质，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：高飞，秦佳，朱至放，
申请(专利权)人：苏州博进生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：