生产重组蛋白的方法技术

本发明专利技术涉及在细菌宿主细胞中重组生产蛋白质的领域

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】生产重组蛋白的方法


[0001]本专利技术涉及在细菌宿主细胞中重组生产蛋白质的领域
。
具体而言，本专利技术涉及用于培养细菌宿主细胞以生产重组蛋白的方法，其中磷酸铵镁
(struvite)
的形成减少
。
技术背景
[0002]在医学领域，诸如抗体或抗体衍生的分子的生物实体的使用已经不断获得存在和重要性
。
随之而来的是对受控制造过程的需求
。
医用蛋白质的商业化需要大量生产它们，并且已经进行了大量努力来改进表达所需蛋白质的重组宿主细胞的培养和它们的加工
。
这导致了增加的产品滴度，但结果是，在细胞培养水平上也观察到了更大量的生物质
/
碎片和污染物
。
由于去除此类污染物可能是费力的，因此优选优化工艺，使得不期望的污染物的形成最小化
。
[0003]磷酸铵镁
(struvite)
是一种磷酸盐材料，分子式为
NH4MgPO4·
6H2O。
磷酸铵镁可以在高浓度的镁盐
、
铵盐和磷酸盐存在下形成
。
磷酸铵镁的形成通常在废水处理厂中发生
(
参见
Kim
等人，
2007)。
磷酸铵镁的形成也可以在细菌发酵过程中发生
(Beavon 1962)。
磷酸铵镁的形成会导致不希望的沉淀和
/
或膜污染的形成，这对从宿主细胞中纯化重组蛋白r/>(
特别是在重组蛋白的工业规模生产中
)
是个问题
。
[0004]虽然已经广泛研究了使用磷酸铵镁沉淀法从例如废水中去除废物或回收营养物，但是关于在培养用于重组蛋白生产的宿主细胞期间磷酸铵镁的形成，关于如何防止或最小化磷酸铵镁形成同时仍保持良好的细胞生长和蛋白生产，报道非常少
。
[0005]本专利技术解决这一问题
。

技术实现思路

[0006]在第一方面，本专利技术涉及生产重组蛋白的方法，其包括以下步骤：
[0007]a)
提供能够在诱导后产生重组蛋白的细菌宿主细胞，
[0008]b)
提供一个量的液体培养基，
[0009]c)
在所述液体培养基中培养所述细菌宿主细胞，
[0010]d)
诱导重组蛋白的产生，以及
[0011]e)
在液体培养基中进一步培养所述细菌宿主细胞以产生重组蛋白，
[0012]其中对于整个过程，提供总量
0.17g
至
0.28g
镁
/kg
步骤
(b)
的液体培养基，并且其中从步骤
(b)
开始到步骤
(e)
结束，在培养期间逐步提供所述镁的总量
。
[0013]在另外的方面，本专利技术涉及在细菌宿主细胞中生产重组蛋白期间减少磷酸铵镁形成或减少磷酸铵镁形成风险的方法，所述方法包括以下步骤：
[0014]a)
提供能够在诱导后产生重组蛋白的细菌宿主细胞，
[0015]b)
提供一个量的液体培养基，
[0016]c)
在所述液体培养基中培养所述细菌宿主细胞，
[0017]d)
诱导重组蛋白的产生，以及
[0018]e)
在液体培养基中进一步培养所述细菌宿主细胞以产生重组蛋白，
[0019]其中对于整个过程，提供总量
0.17g
至
0.28g
镁
/kg
步骤
(b)
的液体培养基，并且其中从步骤
(b)
开始到步骤
(e)
结束，在培养期间逐步提供所述镁的总量
。
具体实施方式
[0020]本专利技术涉及培养细胞以生产重组蛋白的方法
。
本专利技术人惊奇地发现，当在发酵过程中向细胞培养基中逐步加入镁，使得发酵过程中镁的浓度保持在临界水平以下时，形成磷酸铵镁沉淀的风险显著降低，同时保持良好的细胞生长和重组蛋白生产
。
根据初始培养基中的镁浓度，在培养过程的生产阶段加入的镁总量应保持在一定范围内，以降低形成磷酸铵镁沉淀的风险，同时保持良好的培养性能
。
图1提供了根据本专利技术的一个实施方案的非限制性示意图
。
[0021]因此，在第一实施方案中，本专利技术涉及生产重组蛋白的方法，其包括以下步骤：
[0022]a)
提供能够在诱导后产生重组蛋白的细菌宿主细胞，
[0023]b)
提供一定量的液体培养基，
[0024]c)
在所述液体培养基中培养所述细菌宿主细胞，
[0025]d)
诱导重组蛋白的产生，以及
[0026]e)
在液体培养基中进一步培养所述细菌宿主细胞以产生重组蛋白，
[0027]其中对于整个过程，提供总量
0.17g
至
0.28g
镁
/kg
步骤
(b)
的液体培养基，并且其中从步骤
(b)
开始到步骤
(e)
结束，在培养期间逐步提供所述镁的总量
。
[0028]在第二实施方案中，本专利技术涉及在细菌宿主细胞中生产重组蛋白期间减少磷酸铵镁形成或减少磷酸铵镁形成风险的方法，所述方法包括以下步骤：
[0029]a)
提供能够在诱导后产生重组蛋白的细菌宿主细胞，
[0030]b)
提供一定量的液体培养基，
[0031]c)
在所述液体培养基中培养所述细菌宿主细胞，
[0032]d)
诱导重组蛋白的产生，以及
[0033]e)
在液体培养基中进一步培养所述细菌宿主细胞以产生所述重组蛋白，
[0034]其中对于整个过程，提供每千克步骤
(b)
的液体培养基总量
0.17g
至
0.28g
的镁，并且其中从步骤
(b)
开始到步骤
(e)
结束，在培养期间逐步提供所述镁的总量
。
[0035]在第三实施方案中，本专利技术涉及用于生产根据第一和第二实施方案的重组蛋白的方法，其中在从步骤
(b)
开始到步骤
(e)
结束的培养期间，在三个
、
四个或更多个步骤中添加
0.17g
至
0.28g
所述总量的镁
。
[0036]在第四实施方案中，本专利技术涉及生产重组蛋白的方法，其包括以下步骤：
[0037]a)
提供能够在诱导后产生重组蛋白的细菌宿主细胞，
[0038]b)
提供一定量的液体培养基，
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种生产重组蛋白的方法，其包括以下步骤：
a)
提供能够在诱导后产生重组蛋白的细菌宿主细胞，
b)
提供一个量的液体培养基，
c)
在所述液体培养基中培养所述细菌宿主细胞，
d)
诱导所述重组蛋白的产生，以及
e)
在所述液体培养基中进一步培养所述细菌宿主细胞以产生所述重组蛋白，其中对于整个过程，提供总量为
0.17g
至
0.28g
镁
/kg
步骤
(b)
的液体培养基，并且其中从步骤
(b)
开始到步骤
(e)
结束，在培养期间逐步提供所述镁的总量
。2.
一种在细菌宿主细胞中生产重组蛋白期间减少磷酸铵镁形成或减少磷酸铵镁形成风险的方法，所述方法包括以下步骤：
a)
提供能够在诱导后产生重组蛋白的细菌宿主细胞，
b)
提供一个量的液体培养基，
c)
在所述液体培养基中培养所述细菌宿主细胞，
d)
诱导所述重组蛋白的产生，以及
e)
在所述液体培养基中进一步培养所述细菌宿主细胞以产生所述重组蛋白，其中对于整个过程，提供总量为
0.17g
至
0.28g
镁
/kg
步骤
(b)
的液体培养基，并且其中从步骤
(b)
开始到步骤
(e)
结束，在培养期间逐步提供所述镁的总量
。3.
根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中在所提供的镁总量中，第一量的镁在步骤
(b)
的液体培养基中，第二量的镁在步骤
(c)
期间作为补充剂添加，并且第三量的镁在步骤
(e)
期间作为补充剂添加
。4.
根据权利要求
1、2
或3中任一项所述的方法，其中步骤
(c)
包括使所述培养物生长至
OD600
为至少
35。5.
根据权利要求
1、2、3
或4中任一项所述的方法，其中当所述培养物中的溶解氧增加至
≥50
％的空气饱和度时，开始步骤
(d)。6.
根据权利要求
1、2、3、4
或5中任一项所述的方法，其中在步骤
(c)
期间添加的镁补充剂包括添加总量为
0.04
至
0.22g
镁
/kg
步骤
(b)
的液体培养基
。7.
根据权利要求

【专利技术属性】
技术研发人员：G，
申请(专利权)人：UCB，
类型：发明
国别省市：