一种制造技术

本发明专利技术提供了一种

【技术实现步骤摘要】
一种STR多重荧光复合扩增检测试剂的冻干微球及其制备方法


[0001]本专利技术涉及一种
STR
多重荧光复合扩增检测试剂的冻干微球及其制备方法，属于分子生物学

。

技术介绍

[0002]短串联重复序列
(
简称
STR)
也称为微卫星或简单序列重复
(SSR)
，是一类广泛存在于真核生物基因组中的
DNA
串联重复序列，核心序列为2‑6个碱基重复单位
。STR
基因座数量大，分布广泛，约占整个基因组的3％且多态性高，其多态性主要源自核心序列重复次数在个体间的差异，并且这种差异在遗传过程中遵循孟德尔遗传规律
。
[0003]STR
多重荧光复合扩增是指在同一
PCR
反应体系里加上两对或两对以上的荧光引物，同时对两个或两个以上的
STR
基因座位点进行的
PCR
检测，后续对
STR
基因座的
PCR
产物分别进行长度和基因型分析，获取所需数据，达到个体识别的目的
。
因此，
STR
多重荧光复合扩增检测技术被广泛用于个体识别
、
亲缘鉴定和群体遗传学研究
。
[0004]但是由于生物试剂是活性物质，关键试剂
taq
酶为蛋白类产品，其特点是对温度特别敏感，酶失活导致无法扩增；同时混合液中存在的荧光引物对温度光强十分敏感，高温高压都易引发引物荧光脱落与降解，造成扩增效率降低，由于具有以上这些特点，在产品运输过程中，需要低温储存，全程冷链运输，不良的运输储藏条件极易导致产品失效，所以运输成本很高，风险无法把控
。
[0005]目前主要的冻干形式主要有西林瓶
、
八连管
、
异形管
、
冻干微球这几种形式的冻干试剂，各种冻干技术各有优缺点
。
相比较其他冻干形式，冻干微球具有很大优势，精准定量，单人单份，产品使用方便；可实现特殊工艺处理，防止吸潮，对包材没有要求，可以分装到八连管
、
微流控芯片
、
各种生物芯片
、
卡
、
流式管
、96
孔板等包材里，而且可以实现常温储存；因为没有包材限制，它的产能可以发挥到冻干机极限
。
[0006]冻干球技术能将室温下不稳定的化学试剂转化为高品质
、
稳定的冻干球可以长期保存，可以室温保存和运输
。
然而，不同物质的冻干所需的冻干保护剂不同，若冻干保护剂选择不当，会导致冻干微球制备失败，或者即便能得到冻干微球但会对酶和荧光引物等产生不利影响，进而影响测试性能和测试的准确性
。
本专利技术通过冻干技术将引物与酶混合液进行冻干，在运输过程仅需要常温运输，避免了试剂反复冻融影响试剂的性能和保质期，如需使用只需要在其中加水稀释；不仅方便用户使用，也降低了对操作人员的要求；在销往偏远地区，可进行常规运输，节约大量的运输成本，帮助地方进行
DNA
库建设与案件排查
。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供一种
STR
多重荧光复合扩增检测试剂的冻干微球及其制备方法，该冻干微球稳定性强
、
保护效果好，在
PCR
扩增混合液冻干为微球后其扩增效率
、
扩增均衡性
、
扩增灵敏度没有差异，且在常温保存时间更长
。
[0008]为了达到上述目的，本专利技术所采用的技术方案为：
[0009]一种
STR
多重荧光复合扩增检测试剂的冻干微球的原料组分包括：
STR
多重荧光复合扩增
PCR
反应体系和冻干保护剂；冻干保护剂的原料组分包括：葡聚糖
、
海藻糖
、
牛血清白蛋白
、
明胶
、
甘油
、
二甲基亚砜
、
表面活性剂
、
消泡剂和防腐剂
。
[0010]若冻干保护剂选择不当，会导致冻干微球制备失败，或者即便能得到冻干微球但会对酶和荧光引物等产生不利影响，进而影响测试性能和测试的准确性；专利技术人通过对冻干保护剂的特别选择，不仅将“STR
多重荧光复合扩增
PCR
反应体系”制备为冻干微球，提高了冻干微球在常温下的储存稳定性，同时在预冻和冻干过程中能够保持酶蛋白的活性基本不变，且双荧光标记的引物不产生荧光脱落
。
冻干微球的抗吸湿性好
、
刚性强，在冻干后的分装过程中也不易破碎及掉粉
。
[0011]上述冻干保护剂在既能弄成冻干微球的形式下，对酶和荧光引物的扩增效率还不产生影响
。
[0012]为了更好地减少保护剂对扩增检测的影响，冻干保护剂质量配比为：葡聚糖
0.5
‑6％
、
海藻糖2‑
20
％
、
牛血清蛋白
0.5
‑
3.0mg/ml、
明胶
0.1
‑
0.5
％
、
甘油
0.5
‑
2.0
％
、
二甲基亚砜
0.06
‑
1.5
％
、
表面活性剂
0.2
‑
3.5
％
、
消泡剂
0.04
‑
0.4
％
、
防腐剂
0.02
‑
0.15
％
。
前述％均为质量百分比
。
前述各原料的含量为：下述制备时，步骤
①
中冻干保护剂添加在
PCR
扩增反应试剂中后各原料的含量
。
[0013]为了提高物料的均一性，同时不影响测试性能，上述表面活性剂包括：吐温
20、
吐温
80、
聚乙二醇辛基苯基醚
(Triton X
‑
100)
或乙基苯基聚乙二醇
(NP
‑
40)
中的至少一种
。
消泡剂包括：异丙醇
、
乙醇和
Foam ban
中的一种或多种的组合
。
[0014]为了物料的存储性能，同时不影响测试性能，防腐剂包括：山梨酸钾
、
叠氮钠和
Proclin
‑
300
中的一种或多种的组合
。
[0015]上述
STR
多重荧光本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种
STR
多重荧光复合扩增检测试剂的冻干微球，其特征在于，其原料组分包括
STR
多重荧光复合扩增
PCR
反应体系和冻干保护剂；冻干保护剂的原料组分包括：葡聚糖
、
海藻糖
、
牛血清白蛋白
、
明胶
、
甘油
、
二甲基亚砜
、
表面活性剂
、
消泡剂和防腐剂
。2.
根据权利要求1所述的
STR
多重荧光复合扩增检测试剂的冻干微球，其特征在于，原料组分中，冻干保护剂的原料组分包括：葡聚糖
0.5
‑6％
、
海藻糖2‑
20
％
、
牛血清蛋白
0.5
‑
3.0mg/ml、
明胶
0.1
‑
0.5
％
、
甘油
0.5
‑
2.0
％
、
二甲基亚砜
0.06
‑
1.5
％
、
表面活性剂
0.2
‑
3.5
％
、
消泡剂
0.04
‑
0.4
％和防腐剂
0.02
‑
0.15
％，前述％均为质量百分比
。3.
根据权利要求1或2所述的
STR
多重荧光复合扩增检测试剂的冻干微球，其特征在于，表面活性剂为吐温
20、
吐温
80、
聚乙二醇辛基苯基醚或乙基苯基聚乙二醇中的至少一种
。4.
根据权利要求1或2所述的
STR
多重荧光复合扩增检测试剂的冻干微球，其特征在于，消泡剂为异丙醇
、
乙醇或
Foam ban
中的至少一种；防腐剂为山梨酸钾
、
叠氮钠或
Proclin
‑
300
中的至少一种
。5.
根据权利要求1或2所述的
STR
多重荧光复合扩增检测试剂的冻干微球，其特征在于，
STR
多重荧光复合扩增
PCR
反应体系包括
PCR Buffer、STR
多重荧光复合引物和
Taq
聚合酶
。6.
根据权利要求5所述的
...

【专利技术属性】
技术研发人员：李秀丽，吴敏，陈文骏，程诚，杨晨，
申请(专利权)人：江苏苏博生物医学科技南京有限公司，
类型：发明
国别省市：