大菱鲆呼肠孤病毒全基因组及其应用制造技术

技术编号：3984644 阅读：247 留言：0更新日期：2012-04-11 18:40

本发明专利技术公开了一种大菱鲆呼肠孤病毒全基因组及及制备方法和应用，其步骤是：Ａ、大菱鲆呼肠孤病毒核酸的提取，使用Ｔｒｉｚｏｌ?Ｒｅａｇｅｎｔ试剂提取大菱鲆呼肠孤病毒ｄｓＲＮＡ核酸。Ｂ、连接人工接头，提纯的病毒核酸于琼脂糖凝胶电泳，使用凝胶回收试剂盒，回收各节段ｄｓＲＮＡ。Ｃ、逆转录，连上人工接头的ｄｓＲＮＡ使用引物逆转录；Ｄ、ＰＣＲ扩增及序列测定，取２μｌ?ｃＤＮＡ?ＰＣＲ扩增，将扩增条带切下，回收后连接到载体，挑选阳性克隆测序；Ｅ、ＮＳ２２基因在鱼类培养细胞内的表达及起始密码子的确定，将Ｓ７节段１－６１３碱基的核苷酸序列于载体设计构建成真核表达质粒。一种大菱鲆呼肠孤病毒基因序列及其编码蛋白在制备大菱鲆呼肠孤病毒诊断试剂或作为细胞融合诱导剂中的用途。