【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】工程化抗原呈递细胞
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求于
2021
年1月
20
日提交的，专利技术名称为“工程化抗原呈递细胞”的第
63/139680
号美国临时申请的优先权，其全部内容通过援引加入本文
。
序列表引用
[0002]本申请与电子格式的序列表一起提交
。
序列表以
2022
年1月7日创建的名为
SeqList_NTBV015WO
的文件提供，其大小为
20665
字节
。
序列表的电子格式的信息以其整体援引加入本文
。
[0003]本专利技术总体上涉及工程化细胞群和将细胞工程化以向
T
细胞呈递抗原的方法
。
技术介绍
[0004]抗原呈递细胞
(APC)
，也称为辅助细胞，是可以沿其表面展示与主要组织相容性复合体
(MHC)
蛋白结合的抗原的细胞
。
在某些情况下，
APC
处理蛋白抗原，将其分解成肽，并在
APC
表面上将该肽与
MHC
蛋白一起呈递
。
在其他情况下，
APC
能够呈递已经装载到
APC
细胞表面上的抗原，抗原
(
例如肽
)
与
MHC
蛋白在
APC
细胞表面上结合
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种将细胞工程化以向
T
细胞呈递抗原的方法，所述方法包括：
a)
在体外诱导
、
增强和
/
或维持细胞的延长存活；
b)
将所述细胞与至少一种抗原化合物连续孵育；和
c)
在所述细胞内导入至少一种遗传修饰，以诱导
、
增强
、
维持和
/
或改变所述细胞的抗原呈递
。2.
根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞包含原代人
B
细胞，任选地，其中所述原代人
B
细胞相对于所述
T
细胞或相对于由所述
T
细胞呈递的
TCR
是自体的
。3.
根据权利要求2所述的方法，其中所述原代人
B
细胞来源于外周血
。4.
根据权利要求2所述的方法，其中所述原代人
B
细胞来源于含有
B
细胞的人体组织
。5.
根据权利要求4所述的方法，其中所述人体组织包括肿瘤组织
、
淋巴结
、
脾
、
脐带血
、
体液和骨髓
。6.
根据权利要求2所述的方法，其中所述原代人
B
细胞通过前体细胞的分化而获得
。7.
根据权利要求6所述的方法，其中所述前体细胞包括造血干细胞
。8.
根据权利要求2所述的方法，其中所述原代人
B
细胞通过诱导多能干细胞
(iPSC)
的分化而获得
。9.
根据权利要求1所述的方法，其中所述诱导
、
增强和
/
或维持所述细胞的延长存活包括将所述细胞与表达
CD40L
的饲养细胞共培养
。10.
根据权利要求9所述的方法，其还包括将所述细胞与
IL
‑
2、IL
‑4和
IL
‑
21
共培养
。11.
根据权利要求1或
10
所述的方法，其中所述诱导
、
增强和
/
或维持所述细胞的延长存活包括在所述细胞中表达
BCL
‑6基因和
BCL2
样1基因
。12.
根据权利要求1所述的方法，其中所述诱导
、
增强和
/
或维持所述细胞的延长存活包括用
EBV
感染所述细胞
。13.
根据权利要求
10、11
或
12
所述的方法，其还包括在所述细胞中表达
CD40L
基因
。14.
根据权利要求1所述的方法，其中所述诱导
、
增强和
/
或维持所述细胞的延长存活包括在所述细胞中表达
BCL
‑6基因
、BCL2
样1基因和
CD40L
基因
。15.
根据权利要求
14
所述的方法，其中所述
BCL
‑6基因
、BCL2
样1基因和
CD40L
基因可以在相同的表达构建体上，或者在不同的表达构建体上
。16.
根据权利要求
11、13
或
14
所述的方法，其中将所述基因通过病毒转导
、
电穿孔
、
挤压
、
转染
、
位点特异性整合
、
转座子
、CRISPR/Cas9
或
TALEN
导入所述细胞
。17.
根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞在体外细胞培养中的延长存活时间为至少三个月
。18.
根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种抗原化合物由一种编码一至四十种多肽的转基因编码
。19.
根据权利要求
18
所述的方法，其中每种多肽包含至少八个或九个氨基酸
。20.
根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种抗原化合物在所述细胞中表达
。21.
根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种抗原化合物在所述细胞中瞬时表达
。22.
一种工程化细胞，其中所述细胞：
a)
已被调整以在体外诱导
、
增强和
/
或维持其存活；
b)
已经与至少一种抗原化合物一起孵育过；以及
c)
具有至少一种遗传修饰以诱导
、
增强
、
维持或改变所述细胞的抗原呈递
。23.
根据权利要求
22
所述的工程化细胞，其中调整以在体外诱导
、
增强和
/
或维持其存活包括在所述细胞中表达
BCL
‑6基因和
BCL2
样1基因
。24.
根据权利要求
22
所述的工程化细胞，其中调整以在体外诱导
、
增强和
/
或维持其存活包括用
EBV
感染所述细胞
。25.
根据权利要求
23
或
24
所述的工程化细胞，其还包含在所述细胞中表达
CD40L
基因
。26.
根据权利要求
23
或
25
所述的工程化细胞，其中将所述基因通过病毒转导
、
电穿孔
、
挤压
、
转染
、
位点特异性整合
、
转座子
、CRISPR/Cas9
或
TALEN
导入所述细胞
。27.
根据权利要求
22
所述的工程化细胞，其中所述细胞在体外细胞培养中存活时间为至少三个月
。28.
根据权利要求
22
所述的工程化细胞，其中所述至少一种抗原化合物由至少一种编码一至四十种多肽的转基因编码
。29.
根据权利要求
28
所述的工程化细胞，其中每种多肽包含至少八个氨基酸
。30.
根据权利要求
22
所述的工程化细胞，其中所述至少一种抗原化合物在所述细胞中稳定表达
。31.
根据权利要求
22
所述的工程化细胞，其中所述至少一种抗原化合物在所述细胞中瞬时表达
。32.
一种工程化细胞，其包括：
a)
用于表达存活因子的核苷酸序列；
b)
用于表达至少一种编码抗原的转基因的核苷酸序列；和
c)
用于表达
CD40L
的核苷酸序列
。33.
根据权利要求
32
所述的工程化细胞，其中所述存活因子包含
BCL
‑6和
/
或
BCL
‑
XL。34.
根据权利要求
32
所述的工程化细胞，其中所述至少一种编码抗原的转基因编码一至四十种多肽
。35.
根据权利要求
34
所述的工程化细胞，其中每种多肽包含至少八个氨基酸
。36.
根据权利要求
32
所述的工程化细胞，其中所述用于表达
CD40L
的核苷酸序列包含提供
CD40L
稳定表达的基因
。37.
一种向
T
细胞呈递抗原的原代人
B
细胞，所述细胞包含：
a)
提供
BCL
‑6和
BCL
‑
XL
稳定表达的核苷酸序列；
b)
提供一至四十种多肽的稳定表达的核苷酸序列，每种多肽编码至少八个氨基酸，并且每种多肽都是抗原；和
c)
提供
CD40L
稳定表达的核苷酸序列
。38.
一种抗原呈递方法，所述方法包括：在体外诱导
、
增强和
/
或维持细胞的延长存活；将所述细胞与至少一种抗原化合物连续孵育；和在所述细胞内导入至少一种遗传修饰，以诱导
、
增强
、
维持和
/
或改变所述细胞的抗原呈递
。39.
根据权利要求
38
所述的方法，其中所述诱导
、
增强和
/
或维持所述细胞的延长存活
包括将所述细胞与表达
CD40L
的饲养细胞共培养
。40.
根据权利要求
39
所述的方法，其还包括将所述细胞与
IL
‑
2、IL
‑4和
IL
‑
21
共培养
。41.
根据权利要求
38
所述的方法，其中所述诱导
、
增强和
/
或维持所述细胞的延长存活包括在所述细胞中表达
BCL
‑6基因和
BCL2
样1基因
。42.
根据权利要求
38
所述的方法，其中所述诱导
、
增强和
/
或维持所述细胞的延长存活包括用
EBV
感染所述细胞
。43.
根据权利要求
41
或
42
所述的方法，其还包括在所述细胞中表达
CD40L
基因
。44.
根据权利要求
43
所述的方法，其中将所述
BCL
‑6基因
、BCL2
样1基因或
CD40L
基因通过病毒转导
、
电穿孔
、
挤压
、
转染
、
位点特异性整合
、
转座子
、CRISPR/Cas9
或
TALEN
导入所述细胞
。45.
根据权利要求
38
所述的方法，其中所述细胞在体外细胞培养中的延长存活时间为至少三个月
。46.
根据权利要求
38
所述的方法，其中所述至少一种抗原化合物由一种编码一至四十种多肽的转基因编码
。47.
根据权利要求
46
所述的方法，其中每种多肽包含至少八个氨基酸
。48.
根据权利要求
38
所述的方法，其中所述至少一种抗原化合物在所述细胞中稳定表达
。49.
根据权利要求
38
所述的方法，其中所述至少一种抗原化合物在所述细胞中瞬时表达
。50.
一种培养混合物，其包含如权利要求
22
至
37
中任一项所述的工程化细胞和培养基
。51.
根据权利要求
20
所述的方法，其中所述抗原化合物由整合到所述细胞的基因组中的多核苷酸表达，以实现连续表达
。52.
根据权利要求
20
所述的方法，其中所述表达处于有效水平
。53.
根据权利要求
20
所述的方法，其中所述抗原被导入一次，并且所述细胞可以在之后被扩增，并且被多次用于评估
T
细胞，而无需第二次递送所述抗原
。54.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其涉及
BCL2
样1，其中
BCL2
样1为
BCL
‑
xL。5...
【专利技术属性】
技术研发人员：安东尼俄斯，
申请(专利权)人：荷兰商新基因治疗公司，
类型：发明
国别省市：
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