一种发酵性乳制品中甘露寡糖含量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种发酵性乳制品中甘露寡糖含量的检测方法

【技术实现步骤摘要】
一种发酵性乳制品中甘露寡糖含量的检测方法


[0001]本专利技术属于食品及生物检测领域，具体涉及一种发酵性乳制品中甘露寡糖含量的检测方法
。

技术介绍

[0002]甘露寡糖
(mannan oligosaccharide)
，又名甘露低聚糖，是甘露糖和葡萄糖以
1.4
糖苷键按一定比例连接而成的功能低聚糖
。
据研究表明，甘露寡糖具有较好的的水溶性，低热
、
稳定
、
容易被人体吸收，具有益生活性，可调节肠道，缓解腹泻
、
便秘症状，效果明显优于低聚果糖和低聚异麦芽糖，同时还有抗病毒
、
调节免疫力
、
调节血糖血脂
、
抗肿瘤
、
抗辐射
、
等作用
。
因此甘露寡糖被广泛应用在医学医疗
、
保健食品领域
。
[0003]随着消费时代的升级及国民健康意识的提高，人们对发酵性乳制品的功能性成分越来越重视
。
目前，甘露低聚糖
(
甘露寡糖
)、
果糖低聚糖
、
木糖低聚糖等益生活性成分已在发酵乳制品中大量应用
。
建立发酵性乳制品中功能性有效成分可行
、
高效
、
准确和灵敏的分析方法是发酵性乳制品市场质量监督管理的需要和技术保障
。
目前，采用超高效液相色谱r/>‑
串联三重四极杆质谱
(UPLC
‑
MS/MS)
测定不同聚合度甘露寡糖含量的方法少之又少；经检索未发现利用超高效液相色谱
‑
串联三重四极杆质谱
(UPLC
‑
MS/MS)
中不同聚合度甘露寡糖含量的检测方法
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种甘露寡糖的超高效液相色谱
‑
串联三重四极杆质谱
(UPLC
‑
MS/MS)
检测方法
。
[0005]本专利技术的目的可通过如下技术方案来实现：
[0006]本专利技术提供一种发酵性乳制品中甘露寡糖含量的检测方法，包括以下步骤：
[0007](1)
制备甘露寡糖的系列标准溶液并进行超高效液相色谱
‑
串联三重四极杆质谱检测；
[0008](2)
将步骤
(1)
所得的系列标准溶液谱图按甘露寡糖品种拟合浓度与色谱峰面积曲线图；
[0009](3)
发酵性乳制品样品的预处理及超高效液相色谱
‑
串联三重四极杆质谱检测；
[0010](4)
根据步骤
(3)
获得的样品谱图保留时间确定甘露寡糖的聚合度，并采用步骤
(2)
中对应的曲线确定样品中各聚合度的甘露寡糖的含量；
[0011]所述甘露寡糖为甘露二糖
、
甘露三糖
、
甘露四糖
、
甘露五糖
、
甘露六糖和
/
或甘露七糖
。
[0012]优选，所述超高效液相色谱
‑
串联三重四极杆质谱检测的条件参数为：所述色谱条件为：流动相
A
为乙酸铵水溶液，流动相
B
为含氨水和乙酸铵的乙腈，洗脱采用梯度洗脱；所述质谱条件为：采用
ESI
‑
电离模式，多反应监测
SRM
扫描模式
。
[0013]优选，所述色谱条件为：
Hypersil GOLDTM Amino
色谱柱
、1.7
μ
m、100mm
×
2.1mm
；色
谱柱温为
40℃
；流速为
0.4mL/min
；进样量：5μ
L
；流动相和洗脱时间为：
[0014]流动相
A
为
10mmol/L
乙酸铵水溶液，流动相
B
为含体积比
0.04
％氨水和
10mmol/L
乙酸铵的乙腈溶液；
[0015]洗脱时间0‑
2.0min
，流动相
A
从
20
％到
60
％，流动相
B
从
80
％到
40
％；
[0016]洗脱时间
2.0
‑
6.0min
，流动相
A
从
60
％到
40
％，流动相
B
从
40
％到
60
％；
[0017]洗脱时间
6.0
‑
8.0min
，流动相
A
保持
40
％，流动相
B
保持
60
％；
[0018]洗脱时间
8.0
‑
8.1min
，流动相
A
从
40
％到
20
％，流动相
B
从
60
％到
80
％；
[0019]洗脱时间
8.1
‑
10.0min
，流动相
A
保持
20
％，流动相
B
保持
80
％
。
[0020]优选，所述质谱条件为：
[0021]电离模式：
ESI
‑
；
[0022]仪器参数：喷雾电压：
3500V
；鞘气流速：
40Arb
；辅助气流速：
10Arb
；碰撞气流速：
20Arb
；吹扫气流速：
1Arb
；离子传输管温度：
325℃
；蒸发器温度：
350℃
；
Q1
分辨率：
0.7FWHM
；
Q3
分辨率：
1.2FWHM
；碰撞室气压：
1.5mTorr
；
[0023]扫描模式：多反应监测
SRM。
[0024]优选，样品的预处理步骤如下：准确称取样品
2.0g
于
50mL
的离心管中，加纯水
10mL
至刻度，摇匀；超声清洗
20min
至样品充分溶解；离心，取上清液过
0.22
μ
m...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种发酵性乳制品中甘露寡糖含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)
制备甘露寡糖的系列标准溶液并进行超高效液相色谱
‑
串联三重四极杆质谱检测；
(2)
将步骤
(1)
所得的系列标准溶液谱图按甘露寡糖品种拟合浓度与色谱峰面积曲线图；
(3)
发酵性乳制品样品的预处理及超高效液相色谱
‑
串联三重四极杆质谱检测；
(4)
根据步骤
(3)
获得的样品谱图保留时间确定甘露寡糖的聚合度，并采用步骤
(2)
中对应的曲线确定样品中各聚合度的甘露寡糖的含量；所述甘露寡糖为甘露二糖
、
甘露三糖
、
甘露四糖
、
甘露五糖
、
甘露六糖和
/
或甘露七糖
。2.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高效液相色谱
‑
串联三重四极杆质谱检测的条件参数为：所述色谱条件为：流动相
A
为乙酸铵水溶液，流动相
B
为含氨水和乙酸铵的乙腈，洗脱采用梯度洗脱；所述质谱条件为：采用
ESI
‑
电离模式，多反应监测
SRM
扫描模式
。3.
根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述色谱条件为：
Hypersil GOLDTMAmino
色谱柱
、1.7
μ
m、100mm
×
2.1mm
；色谱柱温为
40℃
；流速为
0.4mL/min
；进样量：5μ
L
；流动相和洗脱时间为：流动相
A
为
10mmol/L
乙酸铵水溶液，流动相
B
为含体积比
0.04
％氨水和
10mmol/L
乙酸铵的乙腈溶液；洗脱时间0‑
2.0min
，流动相
A
从
20
％到
60
％，流动相
B
从
80
％到
40
％；洗脱时间
2.0
‑
6.0min
，流动相
A
从
60
％到
40
％，流动相
B
从
40
％到
60
％；洗脱时间
6.0
‑
8.0min
，流动相
A
保持
40
％，流动相
B
保持
60
％；洗脱时间
8.0
‑
8.1min
，流动相
A
从
40
％到
20
％，流动相
B
从
60
％到
80
％；洗脱时间
8.1
‑
10.0min
，流动相
A
保持
20
％，流动相
B
保持
80
％
。4.
根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述质谱条件为：电离模式：
ESI
‑
；仪器参数：喷雾电压：
3500V
；鞘气流速：
40Arb
；辅助气流速：
10Arb
；碰撞气流速：
20Arb
；吹扫气流速：
1Arb
；离子传输管温度：
325℃
；蒸发器温度：
350℃
；
Q1
分辨率：
0.7FWHM
；
Q3
分辨率：
1.2FWHM
；碰撞室气压：
1.5mTorr
；扫描模式：多反应监测
SRM。5.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于，样品的预处理步骤如下：准确称取样品
2.0g
于
50mL
的离心管中，加纯水
10mL
至刻度，摇匀；超声清洗
20min
至样品充分溶解；离心，取上清液过
0.22
μ
m
的水相滤膜，滤液至进样瓶，供超高效液相色谱
‑
串联三重四极杆质谱上机检测，所述样品为酸奶
。6.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述甘露二糖
、
甘露三糖
、
甘露四糖
、
甘露五糖
、
甘露六糖和
/
或甘露七糖的系列标准溶液浓度为
0.2
‑
20.0mg/L。7.
根据权利要求1或6所述的方法，其特征在于，所述甘露二糖
、
甘露三糖
、
甘露四糖
、
甘露五糖
、
甘露六糖和
/
或甘露七糖的系列标准溶液浓度为
0.2mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L。8.
根据权利要求
1、6
或7所述的方法，其特征在于，所述甘露二糖的定量离子对：
341.159/178.917、...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄敏兴，庞扬海，陆剑华，甄振鹏，高裕锋，王桂华，
申请(专利权)人：广东省科学院生物与医学工程研究所，
类型：发明
国别省市：