一种芦荟来源外泌体的制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种芦荟来源外泌体的制备方法及其应用，提供了一种制备芦荟来源的外泌体的方法，通过差速离心与高速离心相结合获得了高纯度的芦荟外泌体。芦荟外泌体具有多重功能，包括促进细胞修复、降低放射性皮肤损伤、促进细胞增殖、促进细胞的上皮

【技术实现步骤摘要】
一种芦荟来源外泌体的制备方法及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种芦荟来源外泌体的制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]芦荟作为天然植物的创面愈合药在民间使用已有1000多年，其疗效也得到了广泛的认同，但现阶段民间在使用芦荟治疗创伤时，常常是将芦荟凝胶直接敷在创面上，这种使用方法仍缺乏科学性，导致芦荟的生物利用率低，较难发挥其最大疗效。
[0003]外泌体(Exosomes，EXOs)是一种几乎可以被所有类型细胞分泌的，具有脂质双分子层的纳米级囊泡，大小在30
‑
100nm之间。EXOs作为天然的胞间信息载体，以其相对较小的分子结构、天然的分子转运特性和良好的生物相容性,在药物载体领域具有巨大的应用潜力。较之现有的药物载体(如人工制造的脂质体)，EXOs有其显著的优越性。首先，EXOs易于与受体细胞融合，从而将药物释放到受体细胞内。其次，EXOs表面表达的膜蛋白可以躲避调理素、共刺激分子及补体成分的攻击，增加了其在血液循环中的稳定性。最后，由于其体积较小，可避免网状系统的捕捉且能利用增强渗透滞留效应，有选择性地渗入肿瘤或炎症部位。芦荟来源的外泌体可能具有芦荟抗炎，促进皮肤修复等功能。
[0004]肿瘤放射治疗(简称放疗)是利用放射线如放射性同位素产生的射线等治疗恶性肿瘤的一种方法。在放疗的过程中会产生多种毒副作用，对患者的身体造成极大的负担甚至影响疾病治疗的进程。放射性皮肤损伤(radiation
‑
induced skin injury,RISI)是恶性肿瘤放射治疗常见的毒副作用之一。放疗过程中，干性脱皮、湿性脱皮和皮肤溃疡，常给患者带来很大的痛苦，并会影响治疗的依从性，当发生Ⅲ级、IV级的RISI时则需暂停甚至终止放疗，因此降低了肿瘤治疗的效果。所以，RISI的防治非常重要。目前，除常规健康教育和护理干预外，临床上多采用射线防护剂、激素软膏和三乙醇胺等药物进行治疗，但较难获得预期效果，寻找防治RISI的有效方法是临床亟待解决的难题。
[0005]芦荟来源的外泌体在药物治疗皮肤疾病的研究中具有极大的潜力，但外泌体的提取存在纯度较低、周期长、试剂成本高等缺点。目前仍然缺乏高效且副作用小的皮肤疾病的治疗方法。并且芦荟来源的外泌体的功效仍处于探索阶段，使其应用具有一定的限制。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种芦荟来源外泌体的制备方法及其应用，以解决相关技术中芦荟相关药物生物利用率低与缺乏高效且副作用小的皮肤疾病药物的问题，并提供了将芦荟来源的外泌体应用于修复放射性皮肤损伤等药物以及护肤方面的应用。
[0007]为实现上述目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]本专利技术的第一方面在于提供一种芦荟来源外泌体的制备方法，包括以下步骤：
[0009]S1、选取新鲜芦荟，除去其外皮，将果肉切碎榨汁，得到第一上清液；
[0010]S2、将第一上清液离心获得沉淀；
[0011]S3、用PBS溶液将沉淀重悬，获得芦荟外泌体；
[0012]在步骤S2中采用差速离心的方法，并且差速离心的步骤中包括使用高速离心进行处理。高速离心的范围为：10 001
‑
504 999
×
g。通过差速离心和高速离心顺利地将芦荟中的外泌体释放出来进行提取，同时高速离心提高了外泌体提取的纯度。
[0013]优选地，在步骤S2中离心的步骤包括多次离心，并且前两次离心为低速离心，第三次离心达到高速离心。
[0014]优选地，在步骤S2中离心的步骤中离心的速度和时间均递增。
[0015]优选地，所述步骤S2中离心的步骤包括：
[0016]S21、取第一上清液经2000
×
g离心15分钟，弃去沉淀，得到第二上清液；
[0017]S22、取第二上清液经10000
×
g离心30分钟，弃去沉淀，得到第三上清液；
[0018]S23、取第三上清液经120 000
×
g离心70分钟，弃去上清液，得到第一沉淀，第一沉淀的主要成分为外泌体。第一沉淀为离心管管底产生的片层沉淀，部分样品有颜色。此时，步骤S23中的离心力为120 000
×
g，达到了高速离心的离心力。
[0019]优选地，在步骤S23之后还具有以下步骤：
[0020]S24、将第一沉淀吹打重悬，经120 000
×
g离心70分钟，弃去上清液，得到第二沉淀，第二沉淀为高纯度外泌体。再一次使用高速离心获得了高纯度的外泌体。
[0021]优选地，步骤S1中的芦荟选自库拉索芦荟、国芦荟、好望角芦荟、木立芦荟或皂质芦荟。
[0022]本专利技术的第二方面在于提供一种芦荟来源的外泌体，此芦荟来源的外泌体通过上述制备方法制得。
[0023]本专利技术的第三方面在于提供一种芦荟来源的外泌体在制备皮肤疾病相关治疗药物中的应用。
[0024]优选地，上述皮肤疾病相关的治疗药物为促进细胞修复的药物、促进细胞增殖的药物、降低放射性皮肤损伤的药物、促进细胞的上皮
‑
间充质转换过程的药物中的任意一种或多种组合。
[0025]优选地，皮肤疾病相关的治疗药物的剂型通常为颗粒剂、胶囊剂、软膏剂、口服液体剂型、乳剂、溶液剂、注射剂、气雾剂的任一种，因此将本专利技术中制备的芦荟来源的外泌体制备成上述任意一种剂型用于制造皮肤疾病相关的治疗药物。
[0026]本专利技术提供的技术方案带来的有益效果包括：
[0027]本专利技术提供了一种芦荟来源外泌体的制备方法及其应用，由于本专利技术的制备方法中使用了高速离心的条件，使得外泌体被释放到上清液中，并经差速离心去除了细胞碎片等杂质，最终获得了纯净的芦荟来源的外泌体。因此，使用本方法能够实现高效地制备高纯度的芦荟来源外泌体。本专利技术解决了现有技术中芦荟生物利用度低的问题，更适合芦荟外泌体高效治疗皮肤疾病，同时也为放射性皮肤损伤的治疗提供了一种有效的材料，本专利技术有益于癌症等疾病治疗的进一步发展。
附图说明
[0028]为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于
本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0029]图1为透射电镜下观察到的芦荟外泌体；
[0030]图2为不同浓度芦荟外泌体对单次0GY的电子射线照射人永生化角质层细胞的修复图；
[0031]图3为不同浓度芦荟外泌体对单次0GY的电子射线照射人永生化角质层细胞的修复柱形图；
[0032]图4为不同浓度芦荟外泌体对单次8GY的电子射线照射人永生化角质层细胞的修复图；
[0033]图5为不同浓度芦荟外泌体对单次8GY的电子射线照射人永生化角质层细胞的修复柱形图；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种芦荟来源外泌体的制备方法，包括以下步骤：S1、选取新鲜芦荟，除去其外皮，将果肉切碎榨汁，得到第一上清液；S2、将所述第一上清液离心获得沉淀；S3、用PBS溶液将所述沉淀重悬，获得芦荟外泌体；其特征在于，所述步骤S2中采用差速离心的方法，并且所述差速离心的步骤中包括使用高速离心进行处理。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤S2中离心的步骤包括多次离心，并且前两次离心为低速离心，第三次离心达到高速离心。3.根据权利要求1
‑
2中任一项所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤S2中离心的步骤中离心的速度和时间均递增。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中离心的步骤包括：S21、取所述第一上清液经2000
×
g离心15分钟，弃去沉淀，得到第二上清液；S22、取所述第二上清液经10000
×
g离心30分钟，弃去沉淀，得到第三上清液；S23、取所述第三上清液经120 000
×
g离心70分钟，弃去上清液，得到第一沉淀，所述第一沉淀的主要成分为外泌体，此...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔艺，王哲，陈有海，王希成，陈钰玲，吴佳欣，
申请(专利权)人：中国科学院深圳理工大学筹，
类型：发明
国别省市：