一种识别制造技术

本发明专利技术提供了一种识别

【技术实现步骤摘要】
一种识别uPAR的纳米抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及抗体
，更具体地，涉及一种识别
uPAR
的纳米抗体及其应用
。

技术介绍

[0002]尿激酶型纤溶酶原激活物（
uPA
）受体（
uPAR
）是一种
GPI
锚定的细胞膜受体，通过共价键与细胞膜外层相连，由三个同源结构域（
D1
，
D2
，
D3
）组成
。D1
区结合
uPA
，
D3
区通过糖基磷脂酰肌醇尾部将
uPAR
锚定在细胞膜表面
。uPAR
主要功能是激活细胞表面的尿激酶（
uPA
）蛋白水解活性
。
完整的
uPAR
以高亲和力（
1nM
）结合
uPA
和
uPA
酶原，当
uPA
酶原结合在
uPAR
上时可以被纤溶酶激活成为具有蛋白水解活性的
uPA
，从而在纤维蛋白溶解
、
伤口愈合或肿瘤发生过程中促进细胞外基质的降解
。
一部分
uPAR
在配体结合后被蛋白水解切割，生成血清可溶性
uPAR
（
suPAR
）
。
[0003]研究表明
uPAR
与人类炎症性及感染性疾病有关，感染细菌或人类免疫缺陷病毒
‑1（
HIV
‑1）时，白细胞表面表达的
uPAR
及血清中的
suPAR
数量增加，
suPAR
水平是
HIV
‑1感染患者生存的独立预测因素，对预测疾病的严重程度具有重要参考价值
。suPAR
在肾脏疾病中也明显上调，被认为是肾脏疾病的可靠生物标志物和疾病进展的致病因素
。uPAR
在脑缺血或损伤
、
脓毒症
、
多发性硬化和风湿性疾病中亦上调
。
[0004]在衰老过程中也发现
uPAR
被广泛诱导，
suPAR
由衰老细胞分泌作为衰老相关分泌表型（
SASP
）的一部分，诱导衰老的治疗可导致
uPAR
阳性细胞数量和血清
suPAR
水平增加，且
uPAR
阳性细胞表现出与表达衰老相关
β
半乳糖苷酶（
SA
‑
β
‑
gal
）的细胞相同的组织学表现，并共表达衰老相关标志物
p16
和
IL
‑
6。
在患有衰老相关疾病（如阿尔茨海默病
、
动脉粥样硬化
、
骨关节炎
、
糖尿病和特发性肺纤维化）的患者中，
uPAR
和
/
或
suPAR
的水平也有明显升高
。2020
年发表在
Nature
上的研究发现靶向
uPAR
的
CAR T
细胞有效逆转了衰老相关病理过程，表明
uPAR
是潜在的衰老细胞的靶标
。
[0005]此外，
uPAR
还作为信号受体发挥作用，通过细胞内信号传导影响迁移
、
粘附
、
分化和增殖从而促进肿瘤细胞的运动
、
侵袭和存活
。
在前列腺癌
、
乳腺癌
、
结直肠癌等几种类型的肿瘤中，
uPAR
和
suPAR
水平升高与不良预后密切相关
。
靶向
uPAR
是目前肿瘤治疗药物的开发热点，近年来备受关注
。
[0006]目前研究构建了可靶向
uPAR
的偶联药物
、
成像剂和纳米药物递送载体，其靶向性依托
uPA
‑
uPAR
结合特性设计出可结合
uPAR
的多肽（如
AE105、U11
）和抗体（如
ATN
‑
658、2G10
），虽呈现出一定的靶向诊疗效果，但仍存在许多问题，如多肽的亲和度低
、
降解代谢快
、
稳定性差
、
特异性低；抗体分子量过大而在体内清除缓慢
、
半衰期长和偶联受阻，且部分抗体因偶联可逆大大降低了抗体的稳定性及配对亲和度等
。
[0007]因此，设计出能够靶向结合
uPAR
且亲和度高
、
稳定性好
、
分子量小
、
特异性高的分子，有助于更有效检测血液及组织中
uPAR
的表达水平
、
有助于精准对
uPAR
高表达病灶进行成像或给药，对肿瘤疾病
、
炎症性疾病
、
衰老相关疾病等多种疾病的诊断
、
治疗及科学研究具有重大意义
。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种识别
uPAR
的纳米抗体及纳米抗体的相关应用
。
[0009]本专利技术所采取的技术方案是：本专利技术的第一个方面，提供一种抗
uPAR
的纳米抗体或其抗原结合片段，所述纳米抗体或其抗原结合片段包含重链；所述重链包含：重链可变区，所述重链可变区具有：如
SEQ ID NO:2
所示的
CDR1、
如
SEQ ID NO:3
所示的
CDR2
和如
SEQ ID NO:4
所示的
CDR3
；或，如
SEQ ID NO:6
所示的
CDR1、
如
SEQ ID NO:7
所示的
CDR2
和如
SEQ ID NO:8
所示的
CDR3
；或，如
SEQ ID NO:10
所示的
CDR1、
如
SEQ ID NO:11
所示的
CDR2
和如
SEQ ID NO:12
所示的
CDR3
；或，如
SEQ ID NO:14
所示的
CDR1、
如
SEQ ID NO:15
所示的
CDR2
和如
SEQ ID N本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种抗
uPAR
的纳米抗体或其抗原结合片段，所述纳米抗体或其抗原结合片段包含重链；所述重链包含：重链可变区，所述重链可变区具有：如
SEQ ID NO:2
所示的
CDR1、
如
SEQ ID NO:3
所示的
CDR2
和如
SEQ ID NO:4
所示的
CDR3
；或，如
SEQ ID NO:6
所示的
CDR1、
如
SEQ ID NO:7
所示的
CDR2
和如
SEQ ID NO:8
所示的
CDR3
；或，如
SEQ ID NO:10
所示的
CDR1、
如
SEQ ID NO:11
所示的
CDR2
和如
SEQ ID NO:12
所示的
CDR3
；或，如
SEQ ID NO:14
所示的
CDR1、
如
SEQ ID NO:15
所示的
CDR2
和如
SEQ ID NO:16
所示的
CDR3。2.
根据权利要求1所述的纳米抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区具有：如
SEQ ID NO:1
所示的氨基酸序列；或，如
SEQ ID NO:5
所示的氨基酸序列；或，如
SEQ ID NO:9
所示的氨基酸序列；或，如
SEQ ID NO:13
所示的氨基酸序列
。3.
一种重组蛋白，包含：权利要求1或2所述的纳米抗体或其抗原结合片段；和任选的协助表达和
/
或纯化的标签序列
。4.
与权利要求1或2所述的纳米抗体或其抗原结合片段
、
或权利要求3所述的重组蛋白相关的生物材料，所述生物材料包含
b1)
～
b16)
中至少一种：
b1)
编码权利要求1或2所述的纳米抗体或其抗原结合片段
、
或权利要求3所述的重组蛋白的核酸分子；
b2)
包含
b1)
所述核酸分子的表达盒；
b3)
包含
b1)
所述核酸分子的载体；
b4)
包含
b2)
所述表达盒的载体；
b5)
包含
b1)
所述核酸分子的转基因细胞系；
b6)
包含
b2)
所述表达盒的转基因细胞系；
b7)
包含
b3)
所述载体的转基因细胞系；
b8)
包含
b4)
所述载体的转基因细胞系；
b9)
包含
b1)
所述核酸分子的微生物；
b10)
包含
b2)
所述表达盒的微生物；
b11)
包含
b3)
所述载体的微生物；
b12)
包含
b4)
所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢晨，陈艳莲，黄辉，余海东，张亭亭，张铭烜，
申请(专利权)人：中山大学附属第八医院深圳福田，
类型：发明
国别省市：