靶向制造技术

本发明专利技术提供靶向

【技术实现步骤摘要】
靶向KRAS G12V突变多肽的T细胞受体及其用途


[0001]本专利技术涉及靶向
KRAS G12V
突变多肽的
T
细胞受体序列及其编码核苷酸序列
。
本专利技术同时涉及基于该
T
细胞受体开发的
TCR
‑
T
细胞治疗方法
。
以及基于该
T
细胞受体开发的双靶向抗肿瘤蛋白药物
。

技术介绍

[0002]过继性免疫细胞治疗
(adoptive cellular immunotherapy)
是新发展起来的一种前沿技术，在血液肿瘤治疗方面取得了空前成功
。
但是过继性免疫细胞治疗技术在实体瘤治疗方面存在诸多困难
。
寻找合适靶点，以及开发特异性结合这些靶点的受体分子，能够为实体瘤治疗打开新局面
。
其中
KRAS
基因进入研究人员视野
。KRAS
是
Ras
基因家族
(
包括
NRAS、HRAS
和
KRAS)
主要成员之一，是一种鼠类肉瘤病毒癌基因，位于
12
号染色体，长约
35kb
，编码
KRAS
蛋白
。
当
KRAS
发生突变后，持续结合
GTP
，表现出酪氨酸激酶活性激活下游信号通路，从而造成细胞增殖失控，引起肿瘤的发生
。
研究发现大约
30
％的肿瘤中存在
KRAS
突变，包括
90
％的胰腺癌，
50
％的结肠癌和
25
％的肺癌
。
[0003]KRAS
突变常发生在第
12
位甘氨酸，第
13
位甘氨酸和第
61
位谷氨酰胺等位点
。
第
12
位甘氨酸和第
13
位甘氨酸的突变占比高达
97
％，主要为
G12C、G12D、G12V、G12R
和
G13D
等突变型
。KRAS G12V
突变在约
30
％的胰腺癌和
10
％结肠直肠癌患者或非小细胞肺癌中表达
。
而且，
RAS
家族成员在不同癌症类型
(
例如黑色素瘤中的
NRAS)
也共享
G12V
热点突变
。
尽管众多肿瘤中都发现
KRAS
突变，但是由于
KRAS
表面缺少与小分子抑制剂结合的口袋，多年来一直被视为不可成药靶点
。
目前仅有一款
KRAS G12C
抑制剂
AMG 510
获批上市，用于治疗先前接受过全身性治疗的
、
携带
KRAS G12C
突变的晚期非小细胞肺癌
(NSCLC)
患者
。
但是
KRAS G12C
在其它癌症中
(
如胰腺癌
、
结肠癌等
)
出现几率稀少
。
其余高丰度
KRAS
突变类型，如
G12D
和
G12V
也亟需找到新的治疗方法
。
[0004]以
KRAS
高丰度突变为靶点，结合过继性免疫细胞治疗是目前该方向研究的突破点
。
其中的一种过继性免疫细胞疗法称为
T
细胞受体工程
T
细胞治疗
(TCR
‑
T)
，具有明显优势
。TCR
‑
T
疗法是利用
T
细胞的肿瘤杀伤特性，向
T
细胞中转入肿瘤特异性的
TCR
基因，并通过其表达的受体介导
T
细胞对肿瘤抗原的特异性识别，最终实现对肿瘤的识别和杀伤效果
。TCR
‑
T
细胞治疗在国内外治疗难治复发性黑色素瘤
、
滑膜肉瘤
、
多发性骨髓瘤和肺癌等临床试验研究中，已经展示了良好的安全性和有效性
。
寻找特异性高，亲和力强的
TCR
受体是
TCR
‑
T
技术的关键部分和技术堡垒
。

技术实现思路

[0005]本专利技术第一方面提供一种
T
细胞受体
(TCR)
分子，所述
TCR
分子特异性靶向
KRAS G12V
突变，其
α
链可变区的
CDR3
序列含有
CAVRDIEGAGNNRKLIW(SEQ ID NO:1)
或
SEQ ID NO:1
的突变体，和
/
或
β
链可变区的
CDR3
序列含有
CASSEGQYSYEQYF(SEQ ID NO:2)
或
SEQ ID NO:2
的突变体
。
[0006]本专利技术第二方面提供一种多价
TCR
复合体，所述多价
TCR
复合体包含两个以上本专利技术任一实施方案所述的
TCR
分子
。
[0007]本专利技术第三方面提供一种能同时结合肿瘤细胞和免疫细胞的双靶向蛋白分子，所述双靶向蛋白分子包括本专利技术任一实施方案所述的靶向肿瘤细胞表面
KRAS G12V
突变的
TCR
分子和用于招募并重定向免疫细胞至肿瘤细胞周围的单链抗体
(scFv)
，其中，所述
TCR
分子的
α
链可变区和
β
链可变区中的信号肽和跨膜结构域被删除
。
[0008]本专利技术第四方面提供一种核酸分子，所述核酸分子包含编码本专利技术任一实施方案所述的
TCR
分子或双靶向蛋白分子的核酸序列或其互补序列；
[0009]本专利技术第五方面提供一种核酸构建物，所述的核酸构建物含有本专利技术任一实施方案所述的核酸分子
。
[0010]本专利技术第六方面提供一种分离的细胞，所述细胞：
[0011](1)
含有本专利技术任一实施方案所述的核酸构建物或染色体中整合有本专利技术任一实施方案所述的核酸分子，和
/
或
[0012](2)
表达本专利技术任一实施方案所述的
TCR
分子或本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种
T
细胞受体
(TCR)
分子，其特征在于，所述
TCR
分子特异性靶向
KRAS G12V
突变，其
α
链可变区的
CDR3
序列含有
CAVRDIEGAGNNRKLIW(SEQ ID NO:1)
或
SEQ ID NO:1
的突变体，和
/
或
β
链可变区的
CDR3
序列含有
CASSEGQYSYEQYF(SEQ ID NO:2)
或
SEQ ID NO:2
的突变体；其中，与
SEQ ID NO:1
相比，所述
SEQ ID NO:1
的突变体具有1‑5个氨基酸突变，或具有至少
80
％的序列相同性，且保留
SEQ ID NO:1
作为
TCR
α
链可变区的
CDR3
所具有的结合活性；与
SEQ ID NO:2
相比，所述
SEQ ID NO:2
的突变体具有1‑5个氨基酸突变，或具有至少
80
％的序列相同性，且保留
SEQ ID NO:2
作为
TCR
β
链可变区的
CDR3
所具有的结合活性；优选地，所述
TCR
分子中：
α
链可变区的
CDR1
序列含有
SVSGNP(SEQ ID NO:3)
或其突变体，
CDR2
序列含有
YITGDN(SEQ ID NO:4)
或其突变体；和
/
或
β
链可变区的
CDR1
序列含有
SNHLY(SEQ ID NO:5)
或其突变体，
CDR2
序列含有
FYNNEI(SEQ ID NO:6)
或其突变体
。2.
如权利要求1所述的
TCR
分子，其特征在于，所述
TCR
分子
α
链可变区含有
SEQ ID NO:7
所示的氨基酸序列，或包含与
SEQ ID NO:7
所示的氨基酸序列相比具有1个或多个突变的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列组成；和
/
或所述
TCR
分子
β
链可变区含有
SEQ ID NO:8
所示的氨基酸序列，或包含与
SEQ ID NO:8
所示的氨基酸序列相比具有1个或多个突变的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列组成；其中，包含所述突变的
TCR
分子保留了含有
SEQ ID NO:7
和
SEQ ID NO:8
的
TCR
分子特异性靶向
KRAS G12V
突变多肽的生物学活性
。3.
如权利要求1所述的
TCR
分子，其特征在于，所述
TCR
分子
α
链可变区含有
SEQ ID NO:19
所示的氨基酸序列，或包含与
SEQ ID NO:19
所示的氨基酸序列相比具有1个或多个突变的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列组成；和
/
或所述
TCR
分子
β
链可变区含...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹雪梅，张小慧，干驰，温茂荣，于光婕，
申请(专利权)人：上海镔铁生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：