一种疏水层析介质及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种疏水层析介质及其制备方法，所述疏水层析介质包括载体

【技术实现步骤摘要】
一种疏水层析介质及其制备方法


[0001]本专利技术涉及层析分离技术，特别是指一种疏水层析介质及其制备方法
。

技术介绍

[0002]疏水层析也称疏水作用下层析
(hydrophobic interaction chromatography HIC)
，属于吸附类层析，其利用固定相载体上偶联的疏水性配基与流动相中的一些疏水分子发生可逆性结合而进行分离
。
该方法基于的是蛋白质的疏水差异，蛋白质表面一般有疏水与亲水基团，疏水层析是利用蛋白质表面某一部分具有疏水性，与带有疏水性的载体在高盐浓度时结合
。
在洗脱时，将盐浓度逐渐降低，因其疏水性不同而逐个地先后被洗脱而纯化，可用于分离其它方法不易纯化的蛋白质
。
利用上述方式，可以将蛋白质初步的分离，用于盐析之后的蛋白质进一步提纯
。
[0003]疏水层析介质通常具有亲水性表面，只有亲水性表面的小部分被疏水性配体修饰以提供疏水相互作用位点，其使用的载体通常需要具有没有离子交换特性的亲水表面，其对蛋白质的分离极其重要，因为对于分离蛋白质而言，除了主要的疏水作用，离子交换作用也会对分离蛋白质产生不利影响，出现蛋白质不可逆吸附，造成洗脱困难
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种疏水层析介质及其制备方法，以解决现有技术中的疏水层析介质的易出现不可逆吸附
、
洗脱困难的问题
。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案如下：
[0006]一种疏水层析介质，包括载体
、
通过间隔臂固载在所述载体表面的功能配基；
[0007]其中，所述载体为二氧化硅微球；所述功能配基为异氰酸丙酯
。
[0008]优选地，所述二氧化硅微球的粒径为
30
‑
60
μ
m。
[0009]优选地，所述间隔臂包括如下结构：
‑
OCH2‑
CHOH
‑
NH
‑
。
[0010]本专利技术还提供一种疏水层析介质的制备方法，包括如下步骤：
[0011](1)
取载体进行活化，得到活化载体；
[0012](2)
将步骤
(1)
中得到的活化载体进行接枝反应，得到具有间隔臂的载体；
[0013](3)
向步骤
(2)
中得到的具有间隔臂的载体中加入配基，反应后得到疏水层析介质
。
[0014]优选地，步骤
(1)
具体包括：取载体，加至
2.4mol/L
的氢氧化钠溶液中，再向其中加入环氧氯丙烷
、
丙酮，在
30
‑
40℃
下，搅拌反应1‑
3h
，过滤，得到活化载体
。
[0015]优选地，步骤
(1)
中，所述载体
、
氢氧化钠溶液
、
环氧氯丙烷
、
丙酮的体积比为
1:2:(1
‑
2)
：
2。
[0016]优选地，步骤
(2)
具体包括：取步骤
(1)
中得到的活化载体，加入
3,3
’‑
二氨基二甲基胺
、
水，在
50
‑
60℃
下反应3‑
6h
，过滤，得到具有间隔臂的载体
。
[0017]优选地，所述活化载体
、3,3
’‑
二氨基二甲基胺
、
水的体积比为
1:3:(0.5
‑
0.8)。
[0018]优选地，步骤
(3)
具体包括：取步骤
(2)
中得到的具有间隔臂的载体，加入异氰酸丙酯
、
丙酮，在
80
‑
100℃
下搅拌反应
10
‑
20h
，过滤，得到疏水层析介质
。
[0019]优选地，步骤
(3)
中，所述具有间隔臂的载体
、
异氰酸丙酯
、
丙酮的体积比为
1:(0.03
‑
0.08)
：
2。
[0020]本专利技术的上述方案至少包括以下有益效果：
[0021]本专利技术的疏水层析介质，包括载体
、
通过间隔臂固载在所述载体表面的功能配基；其中，所述载体为二氧化硅微球；所述功能配基为异氰酸丙酯
。
所述疏水层析介质的蛋白质分离效果好，且易洗脱，蛋白质不可逆吸附少
。
具体实施方式
[0022]本专利技术各实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行
。
所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品，不同厂家
、
型号的原料并不影响本专利技术技术方案的实施及技术效果的实现
。
[0023]实施例1[0024]本实施例中的疏水层析介质，包括载体
、
通过间隔臂固载在所述载体表面的功能配基；其中，所述载体为粒径为
30
μ
m
的二氧化硅微球；所述功能配基为异氰酸丙酯；所述间隔臂包括如下结构：
‑
OCH2‑
CHOH
‑
NH
‑
。
[0025]本实施例的疏水层析介质的制备方法，包括如下步骤：
[0026](1)
取取载体，加至
2.4mol/L
的氢氧化钠溶液中，再向其中加入环氧氯丙烷
、
丙酮，在
35℃
下，搅拌反应
1h
，过滤，得到活化载体
。
[0027]其中，所述载体
、
氢氧化钠溶液
、
环氧氯丙烷
、
丙酮的体积比为
1:2:1.5
：
2。
[0028](2)
取步骤
(1)
中得到的活化载体，加入
3,3
’‑
二氨基二甲基胺
、
水，在
50℃
下进行
6h
的接枝反应，过滤，得到具有间隔臂的载体
。
[0029]其中，所述活化载体
、3,3
’‑
二氨基二甲基胺
、
水的体积比为
1:3:0.7。
[0030](3)
取步骤
(2)
中得到的具有间隔臂的载体，加入异氰酸丙酯
、
丙酮，在
80℃...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种疏水层析介质，其特征在于，包括载体
、
通过间隔臂固载在所述载体表面的功能配基；其中，所述载体为二氧化硅微球；所述功能配基为异氰酸丙酯
。2.
根据权利要求1所述的疏水层析介质，其特征在于，所述二氧化硅微球的粒径为
30
‑
60
μ
m。3.
根据权利要求1所述的疏水层析介质，其特征在于，所述间隔臂包括如下结构：
‑
OCH2‑
CHOH
‑
NH
‑
。4.
一种疏水层析介质的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)
取载体进行活化，得到活化载体；
(2)
将步骤
(1)
中得到的活化载体进行接枝反应，得到具有间隔臂的载体；
(3)
向步骤
(2)
中得到的具有间隔臂的载体中加入配基，反应后得到疏水层析介质
。5.
根据权利要求4所述的疏水层析介质的制备方法，其特征在于，步骤
(1)
具体包括：取载体，加至
2.4mol/L
的氢氧化钠溶液中，再向其中加入环氧氯丙烷
、
丙酮，在
30
‑
40℃
下，搅拌反应1‑
3h
，过滤，得到活化载体
。6.
根据权利要求5所述的疏水层析介质的制备方法，其特征在于，步骤
(1)
中，所述载体
、
氢氧化钠溶液
、
环氧氯丙烷...

【专利技术属性】
技术研发人员：高飞，王佳琛，朱至放，
申请(专利权)人：苏州博进生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：