用于检测制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测

【技术实现步骤摘要】
用于检测B族链球菌的核酸检测组合物、检测装置及方法


[0001]本专利技术涉及核酸分子检测领域，特别涉及一种用于检测
B
族链球菌的核酸检测组合物
、
检测装置及方法
。

技术介绍

[0002]B
族链球菌
(Group Bstreptococcus
，简称
GBS)
是一种定植于人类生殖道和胃肠道
、
部分定植于儿童和成人上呼吸道的革兰阳性球菌，威胁孕产妇及新生儿健康
。GBS
感染是早期新生儿感染的主要危险因素，
GBS
阳性孕妇中约
50
％会垂直传播给新生儿，1％～2％发展成新生儿早发型
GBS
感染，通常会导致其败血症
、
肺炎和脑膜炎，并严重威胁其生命，死亡率高达5％
。
因此，在分娩前，需对妊娠晚期孕妇行
B
族链球菌筛查，并根据筛查结果给孕妇提供针对性的防治措施，从而最大限度地降低胎膜早破
、
早产及围产儿死亡的发生率，进而使母婴受生殖道感染的危害降至最低，改善母婴生存质量
。
[0003]分子即时诊断技术
(
分子
POCT)
作为一种高灵敏度体外诊断方法，到现在已经有十几年的历史
。
伴随着核酸恒温扩增
、
分子信息学
、
微流控技术
、
远程通讯等多个
的不断进步，采用分子
POCT
技术可以快速检测并得到结果，在院外由普通人操作也能实现高性能的核酸检测
。
可适用于家庭检测
、
团体检测
、
院内检测等多个场景
。
[0004]核酸直扩技术作为一种简化的核酸扩增方法，可以在省去核酸提取和纯化步骤的情况下，直接使用粗样本进行扩增
。
快速恒温扩增指温度恒定，在
30min
以内可以判断结果的扩增方式，其简单性与核酸直扩技术相适应，二者结合不仅无需进行繁琐的样品处理步骤，大大节约时间成本，同时可以极大的缩小检测装置的结构，无需复杂的提取过程和控制结构
。
专利
CN107164493A
，提供了一种
GBS
核酸检测试剂盒可以用于完成整个
GBS
核酸检测的工序，不仅可以脱离
GBS
核酸检测对于大量设备的依赖，提升检测效率，而且可以避免在检测过程中引入污染，提升检测精度
。
但其存在便利性不高
、
方法较复杂
、
成本较高等不足
。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供一种用于检测
B
族链球菌的核酸检测组合物
、
检测装置及方法
。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：本专利技术的第一方面，提供一种用于检测
B
族链球菌的核酸检测组合物，包括用于恒温扩增
GBS
的
cAMP
基因上的靶标基因的上游引物
、
下游引物，以及用于检测靶标基因的探针，所述上游引物的序列如
SEQ ID NO.1
所示，所述下游引物的序列如
SEQ ID NO.2
所示；
[0007]优选的是，上
、
下游引物各
0.1
‑
0.5
μ
M
，探针
0.05
‑
0.25
μ
M。
[0008]所述探针的序列中，距离探针5’
端的
30
‑
35nt
的中部位置标记一个
THF
，作为核酸外切酶的识别位点，在探针5’
端标记有一个荧光素
FAM
，在探针的3’
末端标记有一个
C3spacer。
[0009]优选的是，所述探针的序列如
SEQ ID NO.3
所示
。
[0010]优选的是，所述靶标基因的序列如
SEQ ID NO.4
所示
。
[0011]优选的是，所述的用于检测
B
族链球菌的核酸检测组合物还包括用于进行恒温扩增的扩增反应辅助试剂，所述扩增反应辅助试剂包括
200
‑
400ng/
μ
L
重组酶
、200
‑
400ng/
μ
L
重组酶辅因子
、500
‑
1000ng/
μ
L
单链
DNA
结合蛋白
、100
‑
200ng/
μ
LDNA
聚合酶
、200
‑
300ng/
μ
L
肌酸激酶
。
[0012]优选的是，所述的用于检测
B
族链球菌的核酸检测组合物还包括用于稀释核酸扩增产物的稀释缓冲液，所述稀释缓冲液包括
50
‑
150mM Tris
‑
HCl
和
10
‑
100mM EDTA。
稀释缓冲液体积为
200
‑
300
μ
L。
[0013]优选的是，所述的用于检测
B
族链球菌的核酸检测组合物还包括用于裂解样本的裂解液，所述裂解液包括
50
‑
100mM Tris
‑
HCl、50
‑
80mM EDTA、2wt
％
‑
5wt
％吐温
、0.5
‑
2mM
盐酸胍
、0.5
‑
2mM
异硫氰酸胍
、0.5
‑
1M NaCl、2wt
％
‑
5wt
％十二烷基硫酸钠
、2
‑
5wt
％十二烷基肌氨酸钠和去离子水
。
裂解液体积
100
‑
150
μ
L。
[0014]优选的是，所述的用于检测
B
族链球菌的核酸检测组合物还包括用于辅助进行恒温扩增的溶解液，所述溶解液包括
30
‑
50mM Tris
‑
HCl、50
‑
100mM
醋酸钾
、50
‑
100mM
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于检测
B
族链球菌的核酸检测组合物，其特征在于，包括用于恒温扩增
GBS
的
cAMP
基因上的靶标基因的上游引物
、
下游引物，以及用于检测
cAMP
基因上的靶标基因的探针，所述上游引物的序列如
SEQ ID NO.1
所示，所述下游引物的序列如
SEQ ID NO.2
所示；所述探针的序列中，距离探针5’
端的
30
‑
35nt
的中部位置标记一个
THF
，作为核酸外切酶的识别位点，在探针5’
端标记有一个荧光素
FAM
，在探针的3’
末端标记有一个
C3 spacer。2.
根据权利要求1所述的用于检测
B
族链球菌的核酸检测组合物，其特征在于，所述探针的序列如
SEQ ID NO.3
所示
。3.
根据权利要求2所述的用于检测
B
族链球菌的核酸检测组合物，其特征在于，所述靶标基因的序列如
SEQ ID NO.4
所示
。4.
根据权利要求3所述的用于检测
B
族链球菌的核酸检测组合物，其特征在于，还包括用于进行恒温扩增的扩增反应辅助试剂，所述扩增反应辅助试剂包括
200
‑
400ng/
μ
L
重组酶
、200
‑
400ng/
μ
L
重组酶辅因子
、500
‑
1000ng/
μ
L
单链
DNA
结合蛋白
、100
‑
200ng/
μ
LDNA
聚合酶
、200
‑
300ng/
μ
L
肌酸激酶
。5.
根据权利要求4所述的用于检测
B
族链球菌的核酸检测组合物，其特征在于，还包括用于稀释核酸扩增产物的稀释缓冲液，所述稀释缓冲液包括
50
‑
150mM Tris
‑
HCl
和
10
‑
100mM EDTA。6.
根据权利要求5所述的用于检测
B
族链球菌的核酸检测组合物，其特征在于，还包括用于裂解样本的裂解液，所述裂解液包括
50
‑
100mM Tris
‑
HCl、50
‑
80mM EDTA、2wt
％
‑
5wt
％吐温
、0.5
‑
2mM
盐酸胍
、0.5
‑
2mM
异硫氰酸胍
、0.5
‑
1M NaCl、2wt
％
‑
wt5
％十二烷基硫酸钠
、2
‑
5wt
％十二烷基肌氨酸钠和去离子水
。7.
根据权利要求6所述的用于检测
B
族链球菌的核酸检测组合物，其特征在于，还包括用于辅助进行恒温扩增的溶解液，所述溶解液包括
30
‑
50mM Tris
‑
HCl、50
‑
100mM
醋酸钾
、50
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：昝明辉，郑伟港，祁洪涛，叶本晨，刘莹，王东，董文飞，万江鹏，吴再辉，安帅，
申请(专利权)人：希莱乐检郑州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：