一种制备高纯度胰激肽原酶的方法技术

本发明专利技术涉及一种制备高纯度胰激肽原酶的方法，该方法包括以下工艺步骤：（１）原料磨碎、加热反应；（２）提取；（３）盐析；（４）亲和层析分离纯化；（５）超滤浓缩除菌；（６）真空冷冻干燥，即可得到成品。与现有技术相比，本发明专利技术已建立起一套规模化生产的生产工艺，体现出了亲和层析法制备胰激肽原酶的高效性、专一性，有利于生产工艺的稳定可控，减少了生产成本，大大提高了产品品质，其中比活达到８００单位／毫克蛋白以上、纯度达到９０％以上，从而极大地提高了产品的市场竞争力。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种制备高纯度胰激肽原酶的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：　　（１）原料磨碎、加热反应：用研磨设备将新鲜冷冻猪胰直接磨成浆状，控制温度为４０－６０℃，加热搅拌反应４－５ｈ，放置过夜，得到反应液；　　（２）提取：将反应液泵入提取桶，将反应液、纯化水和丙酮按体积比１∶３∶１混合，搅拌３－４ｈ，再经过固液分离装置得到清液；　　（３）盐析：向步骤（２）得到的清液中加入硫酸铵至３０％饱和度，在４℃冷库中放置过夜后过滤，得到提取液，在提取液中再补充硫酸铵至７０％饱和度，在４℃冷库中放置过夜，弃去上清液后用离心法收集底层沉淀，得到粗品；　　（４）亲和层析分离纯化：将得到的粗品用纯化水溶解得到溶解液，将亲和层析介质装入分离柱，用缓冲液进行平衡后用溶解液上样，控制流速在３０ｃｍ／ｈ，上样完毕后继续用缓冲液冲柱至流出液的光密度ＯＤ↓［２８０］值小于０．１；换用ｐＨ为７．０，浓度为０．１ｍｏｌ／Ｌ三（羟甲基）氨基甲烷盐酸盐（Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ）及０．５ｍｏｌ／Ｌ　ＫＣｌ的混合缓冲液继续洗脱，控制流速为５０ｃｍ／ｈ，收集洗脱峰；　　（５）超滤浓缩除菌：对收集到的洗脱峰采用超滤膜进行浓缩，得到的浓缩液通过０．２２μｍ的滤膜过滤除菌得到酶液；　　（６）真空冷冻干燥：将步骤（５）中得到的酶液置于冻干盘中，通过真空冷冻干燥对酶液进行冷冻干燥，即得到产品。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：林克，叶昀，王洪森，
申请(专利权)人：宁波林叶生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：33[中国|浙江]