一种细胞角蛋白制造技术

本发明专利技术提供一种细胞角蛋白

【技术实现步骤摘要】
一种细胞角蛋白18
‑
M30测定试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术属于生化试剂检测
，具体涉及一种细胞角蛋白
18
‑
M30
测定试剂盒及其制备方法
。

技术介绍

[0002]慢性肝病中以
CHB、NAFLD
常见，干细胞凋亡均是其干细胞损伤的不可忽略的重要机制，多种肝病的发生
、
发展
、
肝纤维化
、
肝硬化均与干细胞凋亡有关
。
近年来研究发现细胞角蛋白
18
‑
M30(Cytokeratin 18
‑
M30,CK18
‑
M30)
与肝细胞损伤
、
细胞凋亡等生理病理反应相关，其中
CK18
的一个凋亡片段
M30
，作为一个新的抗原在干细胞凋亡早期阶段可以在外周血或者细胞培养上清中检测到，而在细胞坏死时则无法检测
。
目前广受关注的细胞凋亡检测指标即为
CK18
‑
M30。
[0003]肝活检是诊断
NAFLD
的金标准，并且可以准确区分
NAFL
和
NASL
，但肝活检是有创操作，并且存在采样误差和诊断偏倚等现象，花费相对较高，故临床普及相对困难
。CK18
‑
M30
作为唯一有病理基础的外显性标志物，因其无创性
、
可重复
、
并能准确区分
NAFL、NASH
二者，确定疾病分级的特点，已受到临床日益关注
。
同时血清
CK18
‑
M30
可作为反映慢性乙型肝炎合并非酒精性脂肪肝患者中肝脏炎症
、
纤维化的血清学指标之一
。
目前，临床检测血清中的
CK18
‑
M30
蛋白的方法有免疫层析法
、
化学发光法
、
酶联免疫法等，商品化的产品少，且灵敏度不足
。

技术实现思路

[0004]鉴于此，本专利技术提供一种细胞角蛋白
18
‑
M30
测定试剂盒及其制备方法
。
[0005]为达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0006]一种细胞角蛋白
18
‑
M30
测定试剂盒，所述试剂盒包括：试剂
M、
试剂
R1、
试剂
R2、
校准品和质控品；
[0007]其中，所述试剂
M
含包被链霉亲和素的磁微粒，且磁微粒与链霉亲和素的质量比为3：
(0.1
～
1.0)
磁微粒粒径为
0.2
～
3.0
μ
m
；
[0008]所述试剂
R1
含生物素化的
CK18
‑
M30
单克隆抗体，且生物素与
CK18
‑
M30
单克隆抗体的质量比为
(1
～
5)
：1；
[0009]所述试剂
R2
含标记吖啶酯的
CK18
‑
M30
单克隆抗体，且
CK18
‑
M30
单克隆抗体与吖啶酯质量比例为
(2
～
8)
：1；
[0010]所述校准品和质控品为含有不同浓度人细胞角蛋白
18
‑
M30
的抗原稀释液
。
[0011]在一些具体实施例中，优选地，所述试剂
M
中磁微粒与链霉亲和素的质量比为3：
(0.3
～
1.0)
，磁微粒粒径为
1.0
～
3.0
μ
m
；
[0012]所述试剂
R1
中生物素与
CK18
‑
M30
单克隆抗体的质量比为3：1；
[0013]所述试剂
R2
中
CK18
‑
M30
单克隆抗体与吖啶酯质量比例为
(4
～
8)
：
1。
[0014]进一步地，所述试剂
M、
所述试剂
R1
的组分还包括：
pH
为
5.0
～
8.0
的缓冲液
5.0
～
50.0g/L、
无机盐
10.0
～
50.0g/L、
表面活性剂
1.0
～
50.0g/L、
保护剂
100.0
～
600.0g/L、
防腐剂
1.0
～
10.0g/L
；
[0015]所述试剂
R2
的组分还包括：
pH
为
6.0
～
9.0
的缓冲液
5.0
～
50.0g/L、
无机盐
1.0
～
30.0g/L、
表面活性剂
1.0
～
10.0g/L、
保护剂
50.0
～
200.0g/L、
防腐剂
1.0
～
2.0g/L。
[0016]进一步地，所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液
、MES
缓冲液
、Gly
缓冲液；
[0017]所述无机盐为
NaCl、KCl、KH2PO4中的至少一种；
[0018]所述表面活性剂为吐温
‑
20、EDTA
二钠中的至少一种；
[0019]所述保护剂为蔗糖
、BSA、
酪蛋白中的至少一种；
[0020]所述防腐剂为
Proclin
系列防腐剂
。
[0021]进一步地，所述试剂盒还包括预激发液
、
激发液
。
[0022]一种上述试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
[0023]S1、
试剂
M
的制备：
[0024]取磁微粒置于包被缓冲液中，加入
EDC
，混匀，外加磁场集磁去除上清液，再加入缓冲液，混匀，得活化磁微粒溶液；
[0025]取链霉亲和素置于包被缓冲液中，混匀，加入上述活化磁微粒溶液中，混匀，外加磁场集磁去除上本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种细胞角蛋白
18
‑
M30
测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：试剂
M、
试剂
R1、
试剂
R2、
校准品和质控品；其中，所述试剂
M
含包被链霉亲和素的磁微粒，且磁微粒与链霉亲和素的质量比为3：
(0.1
～
1.0)
，磁微粒粒径为
0.2
～
3.0
μ
m
；所述试剂
R1
含生物素化的
CK18
‑
M30
单克隆抗体，且生物素与
CK18
‑
M30
单克隆抗体的质量比为
(1
～
5)
：1；所述试剂
R2
含标记吖啶酯的
CK18
‑
M30
单克隆抗体，且
CK18
‑
M30
单克隆抗体与吖啶酯质量比例为
(2
～
8)
：1；所述校准品和质控品为含有不同浓度人细胞角蛋白
18
‑
M30
的抗原稀释液
。2.
根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂
M
中磁微粒与链霉亲和素的质量比为3：
(0.3
～
1.0)
，磁微粒粒径为
1.0
～
3.0
μ
m
；所述试剂
R1
中生物素与
CK18
‑
M30
单克隆抗体的质量比为3：1；所述试剂
R2
中
CK18
‑
M30
单克隆抗体与吖啶酯质量比例为
(4
～
8)
：
1。3.
根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂
M、
所述试剂
R1
的组分还包括：
pH
为
5.0
～
8.0
的缓冲液
5.0
～
50.0g/L、
无机盐
10.0
～
50.0g/L、
表面活性剂
1.0
～
50.0g/L、
保护剂
100.0
～
600.0g/L、
防腐剂
1.0
～
10.0g/L
；所述试剂
R2
的组分还包括：
pH
为
6.0
～
9.0
的缓冲液
5.0
～
50.0g/L、
无机盐
1.0
～
30.0g/L、
表面活性剂
1.0
～
10.0g/L、
保护剂
50.0
～
200.0g/L、
防腐剂
1.0
～
2.0g/L。4.
根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液
、MES
缓冲液
、Gly
缓冲液；所述无机盐为
NaCl、KCl、KH2PO4中的至少一种；所述表面活性剂为吐温
‑
20、EDTA
二钠中的至少一种；所述保护剂为蔗糖
、BSA、
酪蛋白中的至少一种；所述防腐剂为
Proclin
系列防腐剂
。5.
根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括预激发液
、
激发液
。6.
...

【专利技术属性】
技术研发人员：李海军，吴盼，
申请(专利权)人：湖南菲科生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：