一种非天然的抗人制造技术

本发明专利技术提供一种非天然抗人

【技术实现步骤摘要】
medicine.Immunology letters.2018
；
196:22
‑
32.)。
目前国际上已经采用放射性核素标记的
CD45
抗体用于造血干细胞移植前的预处理
。Glatting G
利用
111
In
标记的抗
CD45
单抗
YAML568
预处理8名骨髓移植患者，生物学分布检测表明红骨髓中的浓度明显高于脾脏
、
肝脏
、
肾脏等重要组织，在对骨髓产生明显抑制的同时，机体其它重要脏器功能无明显受损
(Glatting G,M
ü
ller M,Koop B,Hohl K,Friesen C,Neumaier B,et al.Anti
‑
CD45 monoclonal antibody YAML568:A promising radioimmunoconjugate for targeted therapy of acute leukemia.Journal of nuclear medicine:official publication,Society of Nuclear Medicine.2006
；
47(8):1335
‑
41.)。Phuong Vo
在临床
Ι
期试验中发现，
10
名晚期
AML
和5名高危骨髓增生异常综合征患者，在r/>HLA
配型外周血干细胞移植前预处理方案中采用
I
‑
抗
CD45
抗体联合氟达拉滨和
2Gy
全身照射治疗，可达到较理想的骨髓清除作用
(Vo P,Gooley TA,Rajendran JG,Fisher DR,Orozco JJ,Green DJ,et al.Yttrium
‑
90
‑
labeled anti
‑
CD45 antibody followed by a reduced
‑
intensity hematopoietic cell transplantation for patients with relapsed/refractory leukemia or myelodysplasia.Haematologica.2020
；
105(6):1731
‑
7.)。
然而，普通
CD45
抗体不能常规应用于靶向治疗白血病，它可导致患者产生严重的细胞免疫缺陷或嗜中性粒细胞缺乏
。
[0005]CD45RA
是
CD45
分子的一种变构体，在初始
T
细胞
、B
细胞
、
部分粒细胞
、
部分单核细胞表面表达，而在活化和记忆
T
细胞
、
成熟红细胞和血小板及机体其他非造血组织器官细胞上不表达
(Li S,Tang Y,Zhang J,Guo X,Shen H.3A4,a new potential target for B and myeloid lineage leukemias.Journal of drug targeting.2011
；
19(9):797
‑
804.)。
耐药性白血病干细胞
(LSC)
被认为是急性髓细胞性白血病
(AML)
治疗后复发的原因
。CD45RA
在大多数
AML
患者的白血病细胞中表达
。CD45RA
是急性髓性白血病中白血病干细胞亚群的特异性标志物
(Kersten B,Valkering M,Wouters R,van Amerongen R,Hanekamp D,Kwidama Z,et al.CD45RA,a specific marker for leukaemia stem cell sub
‑
populations in acute myeloid leukaemia.British journal of haematology.2016
；
173(2):219
‑
35.
；
Li S,Shen D,Guo X,Liao C,Tang Y.Construction,Expression,and Characterization of a Novel Human
‑
Mouse Chimeric Antibody,Hm3A4:A Potential Therapeutic Agent for B and Myeloid Lineage Leukemias.DNA and cell biology.2018
；
37(9):778
‑
85.)
，开发针对
CD45RA
抗原的
CAR
‑
T
将有可能为白血病临床治疗提供新的靶向治疗方法
。CAR
的成功率一方面与靶点调变有关系，另一方面，跟识别靶点单源抗体人源化的程度有关
。
大多数
CAR
是鼠源性的，鼠源性
CAR
对人体有免疫原性，其免疫原性激发人抗鼠抗体
(Human anti
‑
mouse antibody
，
HAMA)
反应
,
可产生人抗鼠
scFv
抗体，
CAR
被中和导致
CAR
的功能大大被削弱，
HAMA
还引起一些变态反应
,
包括相对轻微的症状如皮疹
、
发热和头晕
,
到严重副反应
,
如休克和器官衰竭
,
甚至可能致命
。

技术实现思路

[0006]本专利技术的一个目的是提供一种非天然抗人
CD45RA
人源化嵌合抗原受体的制备方法，是一种能识别
CD45RA
抗原阳性白血病细胞的
CAR
‑
T
细胞制剂即非天然抗人
CD45RA
人源
化嵌合抗原受体基因
(Hu3A4CAR
基因
)
修饰的
T
细胞
(Hu3A4CAR
‑
T)
的构建方法：通过
T
细胞表达
CAR
蛋白，特异性地结合人
CD45RA
抗原
。
所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种非天然抗人
CD45RA
人源化嵌合抗原受体的制备方法，其特征在于，通过
T
细胞表达
CAR
蛋白，特异性地结合人
CD45RA
抗原，所述嵌合抗原受体的靶向识别区为人
CD45RA
抗原靶点，
HuCD45RACAR
或
Hu3A4CAR
基因由下列结构构成：
CD8a leader
为
CAR
的前导序列如
SEQ ID NO.1
所示，人源化
CD45RA
单链抗体
3A4scFv
为靶向识别区，其序列如
SEQ ID NO.3、SEQ ID NO 5
所示，
CD8a hinge
为铰链区，其序列
SEQ ID NO 7
所示，
CD8a
的
transmembrane
为
CAR
跨膜区，其序列如
SEQ ID NO 9
所示，
CD137
的胞内信号转导区与
CD3
ζ
的胞内信号转导区串联为完整的人源化
CD45RACAR
基因即
HuCD45RACAR
或
Hu3A4CAR
基因
。2.
根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，具体通过以下步骤实现：
(1)
查询比较文献，确定二代
3A4CAR
的基本结构，检索...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤永民，张萍，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：