IL10制造技术

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【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】IL10受体结合分子和使用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求
2020
年8月5日提交的美国临时申请号
63/061,562、2020
年9月
15
日提交的美国临时申请号
63/078,745、2021
年1月
11
日提交的美国临时申请号
63/135,884
和
2021
年1月
11
日提交的美国临时申请序列号
63/136,098
的优先权权益，其公开通过引用全文纳入本文以用于所有目的
。

技术介绍

[0003]细胞因子和生长因子配体通常通过细胞表面受体亚基的多聚化发出信号
。
在一些情况下，细胞因子充当多特异性
(
例如，双特异性或三特异性
)
配体，其促进此类受体亚基的缔合，使它们的胞内结构域接近，从而可以发生胞内信号转导
。
细胞因子的性质决定了哪些受体亚基缔合以形成细胞因子受体复合物
。
因此，细胞因子将单个受体亚基桥接为受体复合物，从而导致胞内信号转导
。
[0004]细胞因子受体亚基的胞内结构域具有富含脯氨酸的
JAK
结合结构域，其通常位于细胞膜内表面附近的细胞因子受体亚基的胞内结构域的盒
1/
盒
(box1/box)
区域
。
胞内
JAK
激酶与r/>JAK
结合结构域关联
。
当胞内结构域受体亚基接近时，通常是通过受体的同源配体与受体亚基的胞外结构域的结合，
JAK
相互磷酸化
。
已在哺乳动物细胞中鉴定出四种
Janus
激酶：
JAK1、JAK2、JAK3
和
TYK2。Ihle
等
.(1995)Nature 377(6550):591
‑
4,1995
；
O'Shea
和
Plenge(2012)Immunity 36(4):542
‑
50。JAK
的磷酸化诱导
JAK
的构象变化，提供进一步磷酸化其他胞内蛋白质的能力，其启动导致多种胞内因子激活的级联反应，所述胞内因子转导与受体相关的胞内信号，从而导致胞内反应
(
例如基因转录
)
，通常称为下游信号转导
。
在许多情况下，被
JAK
磷酸化的蛋白质是信号转导和转录激活因子
(STAT)
蛋白家族的成员
。
迄今为止，已鉴定出哺乳动物
STAT
家族的七个成员：
STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5a、STAT5b
和
STAT6。Delgoffe
等，
(2011)Curr Opin Immunol.23(5):632
‑8；
Levy
和
Darnell(2002)Nat Rev Mol Cell Biol.3(9):651
‑
62
以及
Murray,(2007)J Immunol.178(5):2623
‑
9。
激活的
JAK
和
STAT
蛋白的选择性相互作用，统称为
JAK/STAT
途径，提供了响应细胞因子结合而观察到的多种胞内反应
。
[0005]人基因组编码大约四十种不同的
JAK/STAT
细胞因子受体
。
原则上，可以产生大约
1600
种独特的同源二聚体和异二聚体细胞因子受体对，并有可能通过不同的
JAK/TYK/STAT
组合发出信号
(Bazan,Proc Natl Acad Sci U S A.87(18):6934
‑
8,1990
；
Huising
等，
J Endocrinol.189(1):1
‑
25,2006)。
然而，就目前所知，人基因组编码的不同细胞因子配体少于
50
种
(Bazan,Proc Natl Acad Sci U S A.87(18):6934
‑
8,1990
；
Huising
等，
J Endocrinol.189(1):1
‑
25,2006)
，将细胞因子受体复合物的范围限制在那些可由天然配体组装的复合物
。
鉴于细胞因子配体与细胞因子受体亚基的胞外结构域的相互作用决定了受体复合物中受体亚基的组成，并且细胞内
JAK/TYK
和
RTK
酶是简并的，细胞因子和生长因子受体二聚体天然发生配对的数量仅代表系统理论上允许的信号转导
‑
能力型受体配对总数的一小部分
。
[0006]天然存在的细胞因子配体介导多种细胞反应
。
在一些情况下，异源多聚细胞因子受体由受体复合物特有的一个或多个受体亚基构成，称为“专有”亚基，其与多个细胞因子受体共享的其他受体亚基相互作用，通常称为“共有”受体亚基
。
例如，
IL7
受体是
IL7Ra
专有亚基和
CD132
亚基的异二聚体受体复合物，
CD132
亚基也称为“共有
γ”亚基，因为它是多种细胞因子受体复合物
(
包括
IL2、IL4、IL19、IL15
和
IL21)
的共享受体亚基
。
细胞因子与受体亚基的
ECD
相互作用的相对亲和力和动力学以及响应于细胞因子结合而形成的复合物的稳定性介导胞内信号转导的性质和强度
。
在一些情况下，细胞因子与专有亚基的结合增强了完整受体的形成，其中细胞因子对共有亚基的亲和力在不与专有亚基缔合时可能会显著降低
。
[0007]细胞因子配体和受体亚基之间相互作用的细微差别是一个重要的科学研究问题
。
例如，天然存在的细胞因子的许多特性表明
,
它们在人疾病的治疗中具有潜在用途，但此类天然存在的细胞因子也可能引发不利和不良影响
。
在许多情况下，疾病与表达潜在治疗性细胞因子受体的具体细胞类型有关
。
然而，细胞因子受体也表达在其他不希望成为治疗干预靶标的细胞类型上
。
天然配体的给予激活两种细胞类型
,
导致不期望的副作用
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种
IL10
受体
(IL10R)
结合分子，其包含：
(a)
特异性结合
IL10Ra
的第一亚基胞外结构域的第一单域抗体
(sdAb)(IL10Ra sdAb)
；和
(b)
特异性结合
IL10Rb
胞外结构域的第二单域抗体
(IL10Rb sdAb)
；其中：
·
IL10Ra sdAb
和
IL10Rb sdAb
稳定缔合；
·
IL10Ra
和
IL10Rb
响应于与细胞因子受体的同源配体接触发生二聚化；和
·
使表达
IL10Ra
和
IL10Rb
的细胞与有效量的
IL10R
结合分子接触导致
IL10Ra
和
IL10Rb
的胞内结构域接近，导致胞内信号转导
。2.
如权利要求1所述的
IL10R
结合分子，其中所述
IL10Ra sdAb
和
IL10Rb
共价连接
。3.
如权利要求1所述的
IL10R
结合分子，其中所述
IL10Ra sdAb
和
IL10Rb
使用接头共价连接
。4.
如权利要求1所述的
IL10R
结合分子，其中所述
IL10
受体是多肽
。5.
一种
IL10R
结合分子，
IL10R
是下式
[#1]
的多肽：
H2N
‑
(IL10 VHH#1)
–
(L1)
a
–
(IL10 VHH#2)
–
(L2)
b
‑
(CP)
c
‑
COOH
ꢀꢀꢀꢀ
[#1]
其中：“—”代表共价键；
L1
和
L2
是接头；
CP
是螯合肽；
a、b
和
c
独立地选自整数0或1；“H2N”表示氨基末端；并且“COOH”表示多肽的羧基末端
。6.
如权利要求5所述的
IL10R
结合分子，其中所述
IL10 VHH#1
是
IL10Ra sdAb
且
IL10 VHH#2
是
IL10Rb sdAb
，
IL10 VHH#1
是
IL10Rb sdAb
且
IL10 VHH#2
是
IL10Ra sdAb。7.
如权利要求6所述的
IL10R
结合分子，其中所述
IL10Ra sdAb
是一种
sdAb
，其包含：
·
CDR1
，其相对于
SEQ ID NO:1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37、40、43、46、49
和
52
中任一个的序列具有至少
90
％
(
例如，
91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％
)
序列同一性，或具有
0、1、2
或3个氨基酸变化，任选保守氨基酸变化；
·
CDR2
，其相对于
SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38、41、44、47、50
和
53
中任一个的序列具有至少
90
％
(
例如，
91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％
)
序列同一性，或具有
0、1、2
或3个氨基酸变化，任选保守氨基酸变化；和
·
CDR3
，其相对于
SEQ ID NO:3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51
和
54
中任一个的序列具有至少
90
％
(
例如，
91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％
)
序列同一性，或具有
0、1、2
或3个氨基酸变化，任选保守氨基酸变化；并且所述
IL10Rb sdAb
是一种
sdAb
，其包含：
·
CDR1
，其相对于
SEQ ID NO:55、58、61、64、67、70、73、76、79、82、85、88、91、94、97、100、103、106、109、112、115、118、121、124、127、130、133、136、139、142、145、148
和
151
中任一个的序列具有至少
90
％
(
例如，
91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％
)
序列同一性，或具有
0、1、2
或3个氨基酸变化，任选保守氨基酸变化；
·
CDR2
，其相对于
SEQ ID NO:56、59、62、65、68、71、74、77、80、83、86、89、92、95、98、101、104、107、110、113、116、119、122、125、128、131、134、137、140、143、146、149
和
152
中任一个的序列具有至少
90
％
(
例如，
91
％
...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：辛德凯因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：