重组腺相关病毒包装质粒制造技术

本发明专利技术公开了针对

【技术实现步骤摘要】
重组腺相关病毒包装质粒、突变体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种重组腺相关病毒包装质粒
、
突变体及其制备方法和应用
。

技术介绍

[0002]人类研究的终极疆域就是对于大脑的研究，包括大脑的结构连接
、
意识的形成
、
情绪调控
、
学习记忆
、
以及神经功能疾病等
。
大脑主要包括左
、
右大脑半球，是中枢神经中最大和最复杂的结构，是调节机体功能的器官，也是意识
、
精神
、
语言
、
学习
、
记忆和智能等高级神经活动的物质基础
。
从结构上看，大脑分为额叶
、
颞叶
、
顶叶
、
枕叶和脑岛等部分，
1909
年，德国解剖学家布鲁德曼
(Brodmann)
曾根据皮层细胞的类型以及纤维的疏密对大脑进行分区
。
随着技术的进步，对不同脑区的划分越来越精细
。
不同脑区
、
不同类型神经元之间的连接编码出了生物的意识和行为，因此，绘制脑联结图谱
、
揭示神经元连接的结构是解码大脑功能奥秘的基础
。
而对神经元的精细标记是表征神经元连接的重要基础性工作
。
对单个神经元的标记不仅能帮助我们了解其在神经环路中的形态结构，还有助于精确解析神经信号如何组织及如何通过大脑传递到目标区域
。
[0003]基于病毒载体的标记示踪成为解析神经元结构连接的重要方法之一，通过病毒载体携载荧光标记基因转导神经元，可标记出完整的神经元结构或神经网络结构
。
其中重组腺相关病毒
(Recombinant adeno
‑
associatedvirus
，
rAAV)
是在非致病的野生型
AAV
基础上改造而成的基因转移载体
。
由于具有安全性高
、
种类多
、
嗜性广和介导外源基因长期稳定表达等优点，已成为神经科学和基因治疗领域应用最为广泛的基因递送载体之一
(Bedbrook etal.,Annual Review ofNeuroscience,2018
；
Wang et al.,Nature Reviews Drug Discovery,2019)。AAV
有不同的血清型，不同血清型的衣壳蛋白各不相同，衣壳蛋白的差异决定了其大部分转导特性
。
在这些不同的血清型中，常用作基因转移载体的有1，2，5，6，8，9等血清型，它们对神经细胞具备较强转导能力
。
已经公布了自然界中存在的
AAV
共有
AAV1
～
AAV13
等
13
种血清型，不同血清型有不同的靶向性和应用，各血清型
AAV
的制备方法和产量也有差异
。
[0004]目前，
AAV13
被发现在中枢神经系统中扩散范围较小，适用于小核团脑区精准标记及精准给药
(Han etal.,International Journal ofMolecular Sciences,2022)。
但
AAV13
载体表达外源基因强度较弱
。
目前对
AAV13
衣壳蛋白的优化升级或蛋白工程改造的工作尚未见报道
。

技术实现思路

[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供一种重组腺相关病毒包装质粒
、
突变体及其制备方法和应用
。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0007]本专利技术第一方面提供重组腺相关病毒包装质粒，所述重组腺相关病毒包装质粒为
pAAVRC2/13
‑
585
‑
7m8、pAAVRC2/13
‑
587
‑
7m8
；其中，所述重组腺相关病毒包装质粒
pAAVRC2/13
‑
585
‑
7m8、pAAVRC2/13
‑
587
‑
7m8
携带
AAV2
野生型病毒的
Rep
基因和经改造后的
AAV13
病毒的
Cap
基因；所述重组腺相关病毒包装质粒
pAAVRC2/13
‑
585
‑
7m8、pAAVRC2/13
‑
587
‑
7m8
均用于编码
AAV
衣壳蛋白
VP1。
[0008]进一步的，所述重组腺相关病毒包装质粒
pAAVRC2/13
‑
585
‑
7m8
的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：5所示；所述重组腺相关病毒包装质粒
pAAVRC2/13
‑
587
‑
7m8
的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：6所示
。
[0009]本专利技术第二方面提供所述的重组腺相关病毒包装质粒的制备方法，该方法包括：以质粒
pAAV2/13
为起始模板，基于点突变的原理，分别构建所述重组腺相关病毒包装质粒
pAAVRC2/13
‑
585
‑
7m8、pAAVRC2/13
‑
587
‑
7m8。
[0010]进一步的，该方法具体包括：以质粒
pAAV2/13
为起始模板，基于点突变的原理，通过
PCR
反应分别构建并扩增得到所述重组腺相关病毒包装质粒
pAAVRC2/13
‑
585
‑
7m8、pAAVRC2/13
‑
587
‑
7m8。
[0011]进一步的，为构建所述质粒
pAAV2/13
‑
585
‑
7m8
使用的正向引物
Cap13
‑
585
‑
7m8
‑
F
的序列如
SEQ ID NO.1
所示
、
反向引物
Cap13
‑
585
‑
7m8
‑
R
的序列如
SEQ ID NO.2
所示；为构建所述质粒<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
重组腺相关病毒包装质粒，其特征在于，所述重组腺相关病毒包装质粒为
pAAVRC2/13
‑
585
‑
7m8、pAAVRC2/13
‑
587
‑
7m8
；其中，所述重组腺相关病毒包装质粒
pAAVRC2/13
‑
585
‑
7m8、pAAVRC2/13
‑
587
‑
7m8
携带
AAV2
野生型病毒的
Rep
基因和经改造后的
AAV13
病毒的
Cap
基因；所述重组腺相关病毒包装质粒
pAAVRC2/13
‑
585
‑
7m8、pAAVRC2/13
‑
587
‑
7m8
均用于编码
AAV
衣壳蛋白
VP1。2.
根据权利要求1所述的重组腺相关病毒包装质粒，其特征在于，所述重组腺相关病毒包装质粒
pAAVRC2/13
‑
585
‑
7m8
的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：5所示；所述重组腺相关病毒包装质粒
pAAVRC2/13
‑
587
‑
7m8
的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：6所示
。3.
根据权利要求1或2所述的重组腺相关病毒包装质粒的制备方法，其特征在于，该方法包括：以质粒
pAAV2/13
为起始模板，基于点突变的原理，分别构建所述重组腺相关病毒包装质粒
pAAVRC2/13
‑
585
‑
7m8、pAAVRC2/13
‑
587
‑
7m8。4.
根据权利要求3所述的重组腺相关病毒包装质粒的制备方法，其特征在于，该方法具体包括：以质粒
pAAV2/13
为起始模板，基于点突变的原理，通过
PCR
反应分别构建并扩增质粒
pAAV2/13
‑
585
‑
7m8、pAAV2/13
‑
587
‑
7m8
，得到所述重组腺相关病毒包装质粒
pAAVRC2/13
‑
585
‑
7m8、pAAVRC2/13
‑
587
‑
7m8。5.
根据权利要求4所述的重组腺相关病毒包装质粒的制备方法，其特征在于，所述质粒
pAAV2/13
‑
585
‑
7m8
的正向引物
Cap13
‑
585
‑
7m8
‑
F
的序列如
SEQ ID NO.1
所示
、
反向引物
Cap13
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩增鹏，骆能松，蔡玉祥，林坤章，徐富强，
申请(专利权)人：中国科学院深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：