细胞培养方法技术

本发明专利技术属于重组蛋白

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞培养方法
专利

[0001]本专利技术属于重组蛋白
、
特别是抗体的制造领域
。
更具体地，它涉及在商业规模制造过程中表达产量得到提高的蛋白质的细胞培养方法
。
[0002]专利技术背景
[0003]重组蛋白作为治疗性蛋白质
(
如治疗性抗体
)
的开发需要以工业规模生产重组蛋白
。
为了实现这一目标，可以使用不同的表达系统，包括原核和真核系统
。
然而，在过去的二十年中，大多数被批准作为治疗剂的蛋白质是通过哺乳动物细胞培养物制造的，并且这种系统仍然是生产大量供人使用的重组蛋白的首选表达系统
。
[0004]在过去的
30
年中，一直致力于建立细胞培养和重组蛋白表达的基本参数，研究的重点在于通过改变细胞培养基的组成
(
参见例如
Hecklau C.
等人，
2016
年；
Zang Li.
等人，
2011
年
)
和操作条件以及开发大型生物反应器来实现最佳细胞生长
。
[0005]虽然产量仍然是哺乳动物细胞培养的一个非常重要的方面，但近年来，重点已转向在开发和生产规模的各个阶段控制产品质量和工艺一致性
。
哺乳动物细胞培养产生的治疗性蛋白质表现出不同程度的异质性
。
这种异质性包括但不限于不同的糖基化模式
、
脱酰胺或氧化引起的差异
、
不同的电荷或尺寸变体
。
近年来，皮下递送治疗性蛋白质的趋势稳步下降，这需要配制高浓度的治疗性蛋白质
。
高浓度与聚集水平增加有关
(Purdie J.
等人，
2016
年
)。
增加的电荷变体，例如酸性物质水平的增加可能会影响蛋白质的稳定性
(Banks D.D.
等人，
2009
年
)。
细胞培养条件，例如培养基的组成
(Kshirsagar R.
等人，
2012
年；
US20130281355
；
WO2013158275
；
Ben Yahia B.
等人，
2016
年；
Ben Yahia B.
等人，
2016
年
)
和生长条件，包括进料策略
(WO2018219968
；
Pan
等人，
2017
年
)
，
pH
和温度
(US8765413)
已被证明会影响治疗性蛋白质的产量和质量属性
。
[0006]然而，仍然存在需要提供这样的细胞培养方法，其提高生产治疗性蛋白质的产量，同时对蛋白质异质性的影响最小
。
[0007]专利技术概述
[0008]在第一方面，本专利技术提供一种用于培养表达重组蛋白的哺乳动物细胞的方法，所述方法包括以下步骤：在培养基中培养所述哺乳动物细胞，并且在培养的第1天至第7天添加特殊大剂量
(exceptional bolus)
的半胱氨酸
(Cys)、
色氨酸
(Trp)
和酪氨酸
(Tyr)
，其中所述特殊大剂量在细胞培养物中提供高浓度的
Cys、Tyr
和
Trp。
[0009]在第二方面，本专利技术提供一种用于生产重组蛋白的方法，其中所述方法包括以下步骤：在培养基中培养表达所述重组蛋白的哺乳动物细胞，并且在培养的第1天至第7天添加特殊大剂量的半胱氨酸
(Cys)、
色氨酸
(Trp)
和酪氨酸
(Tyr)
，其中所述特殊大剂量在细胞培养物中提供高浓度的
Cys、Tyr
和
Trp。
[0010]在第三方面，本专利技术提供一种用于提高培养中哺乳动物细胞的比生产力
(Qp)
的方法，其中所述哺乳动物细胞表达重组蛋白，所述方法包括以下步骤：在培养基中培养所述哺乳动物细胞，并且在培养的第1天至第7天添加特殊大剂量的半胱氨酸
(Cys)、
色氨酸
(Trp)
和酪氨酸
(Tyr)
，其中所述特殊大剂量在细胞培养物中提供高浓度的
Cys、Tyr
和
Trp。
[0011]在这些方面中任一方面的情况下，在添加所述特殊大剂量之后，在细胞培养物中存在的
Cys、Trp
和
Tyr
的总浓度分别为：
Cys
为至少约
2.45mM
；
Trp
为至少约
1.50mM
；和
Tyr
为至少约
2.75mM。
[0012]在这些方面中任一方面的进一步优选实施方案中，控制
Cys、Tyr
和
Trp
的总浓度，以在达到最大活细胞浓度峰值之前至少一天在细胞培养物中分别达到至少约
2.45mM、
至少约
2.75mM
和至少约
1.50mM。
[0013]优选地，同时或按顺序达到这些高浓度
。Cys、Try
和
Trp
可以是同一进料培养基的一部分或不同进料培养基的一部分
。
[0014]定义
[0015]在发生冲突的情况下，以本说明书
(
包括定义
)
为准
。
除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语的含义与本文主题所属的
的普通技术人员通常理解的含义相同
。
提供本文所用的以下定义是为了便于理解本专利技术
。
[0016]本说明书和权利要求书中所用的用于例如本文的短语“A
和
/
或
B”中的术语“和
/
或”旨在包括“A
和
B”、“A
或
B”、“A”和“B”。
[0017]本说明书和权利要求书中所用的术语“细胞培养”或“培养”是指细胞在体外即生物体或组织之外的生长与增殖
。
哺乳动物细胞的合适的培养条件是本领域已知的，例如在
Ozturk&Hu(2005)
中所教导的
。
哺乳动物细胞可以在悬浮液中培养或贴壁至固体基底上的情况下培养
。
[0018]术语“细胞培养基”、“培养基
(culture medium)”、“培养基
(medium)”及其任意复数形式是指其中可以培养任何类型的细胞的任何培本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种用于培养表达重组蛋白的哺乳动物细胞的方法，所述方法包括以下步骤：在培养基中培养所述哺乳动物细胞，并且在培养的第1天至第7天添加特殊大剂量
(exceptionalbolus)
的半胱氨酸
(Cys)、
色氨酸
(Trp)
和酪氨酸
(Tyr)
，其中所述特殊大剂量在细胞培养物中提供高浓度的
Cys、Tyr
和
Trp。2.
一种用于生产重组蛋白的方法，其中所述方法包括以下步骤：在培养基中培养表达所述重组蛋白的哺乳动物细胞，并且在培养的第1天至第7天添加特殊大剂量的半胱氨酸
(Cys)、
色氨酸
(Trp)
和酪氨酸
(Tyr)
，其中所述特殊大剂量在细胞培养物中提供高浓度的
Cys、Tyr
和
Trp。3.
一种用于提高培养中哺乳动物细胞的比生产力
(Qp)
的方法，其中所述哺乳动物细胞表达重组蛋白，所述方法包括以下步骤：在培养基中培养所述哺乳动物细胞，并且在培养的第1天至第7天添加特殊大剂量的半胱氨酸
(Cys)、
色氨酸
(Trp)
和酪氨酸
(Tyr)
，其中所述特殊大剂量在细胞培养物中提供高浓度的
Cys、Tyr
和
Trp。4.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在添加所述特殊大剂量之后，在细胞培养物中存在的
Cys、Trp
和
Tyr
的总浓度分别为：
a.Cys
为至少约
2.45mM
；
b.Trp
为至少约
1.50mM
；和
c.Tyr
为至少约
2.75mM。5.
根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中调整特殊大剂量中
Cys、Try
和
Trp
的浓度，以达到细胞培养物中高浓度的
Cys、Try
和
Trp
，其中待达到的高浓度的
Cys、Try
和
Trp
由以下组成：
a.Cys
为至少约
2.45mM
；
b.Trp
为至少约
1.50mM
；和
c.Tyr
为至少约
2.75mM。6.
根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法进一步包括以下初步步骤：进行至少一个初始实验来确定所述哺乳动物细胞达到最大活细胞浓度
(VCC)
的日子，和
/
或，所述方法进一步包括以下初步步骤：进行至少一个初始实验来确定培养开始之后细胞培养基中
Cys、Trp
和
Tyr
的每日浓度，以确定待通过特殊大剂量添加的
Cys、Trp
和
Tyr
的量
。7.
根据权利要求6所述的方法，其中在达到最大活细胞浓度
(VCC)
的日子之前，在细胞培养物中添加特殊大剂量的
Cys、Ty...

【专利技术属性】
技术研发人员：B，
申请(专利权)人：UCB，
类型：发明
国别省市：