重组人乳头瘤病毒制造技术

本发明专利技术公开了经密码子优化的人乳头状瘤病毒主要衣壳蛋白

【技术实现步骤摘要】
重组人乳头瘤病毒33亚型蛋白表达
本申请是申请日为
2015
年3月
30
日，申请号为
201510145962.0
，专利技术名称为“重组人乳头瘤病毒
33
亚型蛋白表达”的专利技术专利的分案申请
。


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体而言，本专利技术涉及人乳头状瘤病毒主要衣壳蛋白，其编码基因，及其制备方法和用途
。

技术介绍

[0002]人乳头状瘤病毒
(human papilloma virus
，
HPV)
是乳多空病毒科多瘤病毒亚科的一个无包膜的小型双链环状
DNA
病毒
。HPV
是无包膜二十面体对称病毒，其病毒基因组
DNA
为闭合环状，长度约
7200
‑
8000bp
，由早期编码区
(early region)、
晚期编码区
(late region)
和位于两者之间的长调控区
(long control region)
组成
。
其中晚期编码区含两个开放阅读框
(ORF)
，编码病毒衣壳蛋白
L1、L2。L1
蛋白分子量约
55kDa
，为主要衣壳蛋白，以
72
个五聚体的形式支撑整个病毒衣壳结构，在不同型别中氨基酸序列高度保守，能够刺激机体产生保护性抗体/>。L2
蛋白分子量较小，多位于
L1
蛋白内部
。
[0003]1995
年，国际癌症研究中心公布的研究结果证实，
HPV
与宫颈癌有密切的因果关系
。
由此可见，
HPV
感染已成为严重危害人类健康的病原体
。HPV
可通过人体间的密切接触传播，引起被感染者的皮肤出现寻常疣和肛门生殖器尖锐湿疣等病变，被列为性传播疾病
。
因此，研制高效
、
廉价的
HPV
疫苗，对于预防女性宫颈癌和
HPV
感染所引起的性传播疾病具有十分重要的意义
。
[0004]目前已经确定的
HPV
型超过
100
种
。
采用灵敏的检测方法，可以从几乎
100
％的宫颈癌患者病变组织中检测到高危
HPV
‑
DNA。
根据
HPV
亚型与女性生殖道恶性肿瘤的关系，将
HPV
分为低危型和高危型
。HPV6、11、34、40、42
等型多见于良性宫颈病变如宫颈湿疣及宫颈上皮轻度不典型性增生病变中，属
HPV
低危型；而宫颈上皮重度不典型增生及宫颈癌中以
HPV16、18、31、33、35、39、45
，
52
，
58
型感染更为多见，这些亚型为高危型
。
[0005]昆虫表达系统
、
酵母表达系统
、
原核表达系统和哺乳动物细胞等多种表达系统都可以通过单独表达主要衣壳蛋白
L1
或联合表达
L1+L2
的方式获得病毒样颗粒
(VLPs)。L1
单独表达得到的
VLPs
与天然病毒衣壳结构类似，可用于诱导与保护免受病毒侵袭有关的高效价病毒中和抗体应答
。
[0006]因此，鉴于
L1
蛋白于不同基因型别内部高度保守，并且能够单独表达形成
(VLPs)
，以
L1
蛋白作为
HPV
疫苗研发的目标蛋白具有较高的可行性
。
不过，以表达重组病毒蛋白得到的
VLPs
作为
HPV
疫苗的商业化开发与生产需要解决许多技术问题，其中第一个必须克服的困难就是重组病毒蛋白的表达水平
。
[0007]尽管现有技术中已经开发了一些针对
HPV
的疫苗，然而普遍还存在
HPV
蛋白表达效率低下，表达获得的蛋白活性低，无法组装成病毒样颗粒或组装获得的颗粒免疫效果不理想等问题
。
因此，本领域还有必要开发改进的
HPV
疫苗产品
。

技术实现思路

[0008]利用毕赤酵母作为表达重组蛋白的表达系统具有表达量高
、
操作简便
、
成本低等特点，相较于更高等的昆虫细胞与哺乳动物细胞来讲更利于大规模工业化生产
。
由于不同物种间氨基酸密码子使用频率不一，在利用毕赤酵母表达重组蛋白的时候，往往根据目的蛋白的氨基酸序列经过密码子优化调整后得到更利于翻译的
DNA
序列
。
因此，经过密码子优化后的
HPV33
在毕赤酵母中可以获得较高的表达水平，更有利于针对
HPPV33
的预防性疫苗的研发与生产
。
[0009]根据本专利技术的第一方面，提供一种分离的基因，其编码人乳头状瘤病毒主要衣壳蛋白
L1
，所述的基因具有毕赤酵母偏爱的密码子
。
[0010]在优选的实施方式中，所述分离的基因为能够在毕赤酵母中表达的
HPV33 L1
基因，所述基因分别具有
SEQ ID NO
：
2、3
和4所示的核苷酸序列
。
所述
SEQ ID NO:2
所示的核苷酸序列具有与
SEQ ID NO:3
所示的核苷酸序列大约
96
％的同一性，所述
SEQ ID NO:2
所示的核苷酸序列具有与
SEQ ID NO:4
所示的核苷酸序列大约
92
％的同一性，所述
SEQ ID NO:3
所示的核苷酸序列具有与
SEQ ID NO:4
所示的核苷酸序列大约
96
％的同一性
。
[0011]在本专利技术的第二方面，提供一种表达载体，所述的表达载体中含有所述的基因的序列
。
[0012]在一优选的实施方式中，所述的表达载体是毕赤酵母表达载体
。
[0013]在本专利技术的第三方面，提供一种基因工程化的宿主细胞，所述的细胞含有所述的表达载体，或其基因组中整合有所述的基因
。
[0014]在一优选的实施方式中，所述表达载体含有本专利技术的
HPV33 L1
基因
。
[0015]根据本专利技术的一个具体实施方案，所述含有本专利技术的
HPV33 L1
基因本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种分离的基因，其编码人乳头瘤主要衣壳蛋白
HPV33 L1
，其特征在于，所述的基因具有毕赤酵母偏爱的密码子，所述基因的序列为
SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3
或
SEQ ID NO:4
所示核苷酸序列
。2.
一种表达载体，所述的表达载体中含有权利要求1所述的基因的序列
。3.
一种基因工程化的宿主细胞，所述的细胞含有权利要求2所述的表达载体，或其基因组中整合有权利要求1所述的基因
。4.
如权利要求3所述的宿主细胞，其特征在于，所述的细胞是毕赤酵母细胞
。5.
一种制备具有免疫原性的大分子的方法，所述具有免疫原性的大分子由毕赤酵母表达的人乳头状瘤病毒主要衣壳蛋白
HPV33 L1
自我装配而成，其特征在于，所述方法包括
:(1)
培养权利要求3所述的宿主细胞，从而在宿主细胞内表达所述的人乳头状瘤病毒主要衣壳蛋白
HPV33 L1
，并组装形成具有免疫原性的大分子；
(2)
分离所述的具有免疫原性的大分子
。6.
如权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤
(2)
中包括
:(a)
破碎步骤
(1)
...

【专利技术属性】
技术研发人员：许丹，仝鑫，江元翔，谢云，陈荣军，郭慧丽，杜府亮，田平生，王子龙，梁小平，曾宪放，史力，
申请(专利权)人：上海泽润生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：