使用编码阿柏西普的制造技术

提供用于治疗个体中的眼部疾病的方法，其包括向所述个体的眼睛施用单位剂量的重组腺相关病毒

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用编码阿柏西普的AAV2变体治疗眼部疾病的方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求
2021
年4月
27
日提交的美国临时专利申请号
63/180,646
的权益和优先权，其公开内容通过引用整体并入本文
。
[0003]ASCII
文本文件的序列表的提交
[0004]以下提交的
ASCII
文本文件的内容通过引用整体并入本文：序列表的计算机可读形式
(CRF)(
文件名称：
627002001340SEQLIST.TXT
，记录日期：
2022
年4月
26
日，大小：
41493
字节
)。


[0005]本公开内容涉及治疗个体中的眼部疾病和病症的方法，其包括向个体的眼睛施用单一单位剂量的编码抗
VEGF
剂
(
例如，阿柏西普
(aflibercept))
的重组腺相关病毒
(rAAV)
颗粒
。

技术介绍

[0006]阿柏西普是一种重组融合蛋白，其充当血管内皮生长因子亚型
A
和
B(VEGF
‑
A
和
VEGF
‑
B)
和胎盘生长因子
(PGF)
的诱饵受体
。
通过结合这些配体，阿柏西普能够阻止它们与血管内皮生长因子受体
(VEGFR)、VEGFR
‑1和
VEGFR
‑2结合，从而特别抑制新血管形成和降低血管通透性
。
阿柏西普由与
IgG1
的
Fc
片段融合的
VEGFR
‑1的结构域2和
VEGFR
‑2的结构域3组成
。
[0007]目前的标准护理抗
VEGF
剂
(
例如阿柏西普
)
需要每4至8周经由玻璃体内
(IVT)
注射重新施用，以实现最佳的治疗结果并保持视力
。
依从这样的方案对于患者
、
其护理者和保健系统来说是繁重的，并且大多数患者随时间推移不能依从最佳疗法，这与视力丧失相关
(Khanani AM
等人
)。
此外，还存在并发症，包括眼内炎
、
视网膜脱离
、
外伤性白内障和眼内压
(IOP)
升高；这些并发症的风险可能随着重复
IVT
注射而增加
(Falavarjani
等人
,(2013)Eye(Lond),27(7):787
‑
794)。
[0008]因此，本领域需要有效
、
降低副作用的风险并适合高长期患者依从性的眼部疾病的疗法
。
[0009]编码用于治疗眼部病症的阿柏西普的
AAV
的用途可见于美国专利申请号
17/017,469、WO 2021/050094
和
WO 2021/050649
，其通过引用整体并入
。
[0010]专利技术简述
[0011]在一些方面，本专利技术提供一种用于治疗个体中的青光眼的方法，所述方法包括向所述个体的一只眼睛施用单位剂量的重组腺相关病毒
(rAAV)
颗粒，其中所述个体是人，并且其中所述
rAAV
颗粒包含：
a)
编码多肽且侧接
AAV2
反向末端重复序列
(ITR)
的核酸，所述多肽包含与
SEQ ID NO:35
的氨基酸序列具有至少约
95
％同一性的氨基酸序列，和
b)AAV2
衣壳蛋白，其包含插入在衣壳蛋白的位置
587
和
588
之间的氨基酸序列
LGETTRP(SEQ ID NO:14)
，其中所述氨基酸残基编号对应于
AAV2 VP1
衣壳蛋白
。
在一些实施方案中，所述青光眼是新
生血管性青光眼
。
在一些方面，本专利技术提供了一种用于降低个体中的眼内压的方法，所述方法包括向所述个体的一只眼睛施用单位剂量的重组腺相关病毒
(rAAV)
颗粒，其中所述个体为人，并且其中所述
rAAV
颗粒包含：
a)
编码多肽且侧接
AAV2
反向末端重复序列
(ITR)
的核酸，所述多肽包含与
SEQ ID NO:35
的氨基酸序列具有至少约
95
％同一性的氨基酸序列，和
b)AAV2
衣壳蛋白，其包含插入在衣壳蛋白的位置
587
和
588
之间的氨基酸序列
LGETTRP(SEQ IDNO
：
14)
，其中所述氨基酸残基编号对应于
AAV2 VP1
衣壳蛋白
。
在一些实施方案中，所述个体患有青光眼
。
在一些实施方案中，所述青光眼是新生血管性青光眼
。
[0012]在本专利技术的一些实施方案中，所述单位剂量的
rAAV
颗粒为每只眼睛约6×
10
11
个载体基因组
(vg/
眼睛
)
或更少
。
在一些实施方案中，单位剂量的
rAAV
颗粒为每只眼睛约6×
10
10
至约6×
10
11
个载体基因组
(vg/
眼睛
)。
在一些实施方案中，单位剂量的
rAAV
颗粒为每只眼睛约6×
10
10
至约2×
10
11
个载体基因组
(vg/
眼睛
)。
在一些实施方案中，单位剂量的
rAAV
颗粒为每只眼睛约2×
10
11
至约6×
10
11
个载体基因组
(vg/
眼睛
)。
在一些实施方案中，单位剂量的
rAAV
颗粒为每只眼睛约2×
10
11
或约6×
10
11
个载体基因组
(vg/
眼睛
)。
在一些实施方案中，单位剂量的
rAAV
颗粒为每只眼睛约2×
10
11
个载体基因组...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种用于治疗个体中的青光眼的方法，所述方法包括向所述个体的一只眼睛施用单位剂量的重组腺相关病毒
(rAAV)
颗粒，其中所述个体为人，并且其中所述
rAAV
颗粒包含：
a)
编码多肽且侧接
AAV2
反向末端重复序列
(ITR)
的核酸，所述多肽包含与
SEQ ID NO:35
的氨基酸序列具有至少约
95
％同一性的氨基酸序列，和
b)AAV2
衣壳蛋白，其包含插入在所述衣壳蛋白的位置
587
和
588
之间的氨基酸序列
LGETTRP(SEQ ID NO:14)
，其中所述氨基酸残基编号对应于
AAV2 VP1
衣壳蛋白
。2.
如权利要求1所述的方法，其中所述青光眼是新生血管性青光眼
。3.
一种用于降低个体的眼内压的方法，所述方法包括向所述个体的一只眼睛施用单位剂量的重组腺相关病毒
(rAAV)
颗粒，其中所述个体为人，并且其中所述
rAAV
颗粒包含：
a)
编码多肽且侧接
AAV2
反向末端重复序列
(ITR)
的核酸，所述多肽包含与
SEQ ID NO:35
的氨基酸序列具有至少约
95
％同一性的氨基酸序列，和
b)AAV2
衣壳蛋白，其包含插入在所述衣壳蛋白的位置
587
和
588
之间的氨基酸序列
LGETTRP(SEQ ID NO:14)
，其中所述氨基酸残基编号对应于
AAV2 VP1
衣壳蛋白
。3.a
一种降低个体的眼内压的方法，所述方法包括向所述个体的一只眼睛施用单位剂量
rAAV
颗粒，其中所述个体为人，并且其中所述
rAAV
颗粒包含：
a)
编码多肽且侧接
AAV2
反向末端重复序列
(ITR)
的核酸，所述多肽在睫状体中活跃的强启动子的控制之下，和
b)AAV2
衣壳蛋白，其包含插入在所述衣壳蛋白的位置
587
和
588
之间的氨基酸序列
LGETTRP(SEQ ID NO:14)
，其中所述氨基酸残基编号对应于
AAV2 VP1
衣壳蛋白
。4.
如权利要求3所述的方法，其中所述个体患有青光眼
。5.
如权利要求4所述的方法，其中所述青光眼是新生血管性青光眼
。6.
如权利要求1‑5中任一项所述的方法，其中
rAAV
颗粒的所述单位剂量为约6×
10
11
个载体基因组
/
眼睛
(vg/
眼睛
)
或更少
。7.
如权利要求1‑6中任一项所述的方法，其中
rAAV
颗粒的所述单位剂量为在约6×
10
10
至约6×
10
11
个载体基因组
/
眼睛
(vg/
眼睛
)
之间
。8.
如权利要求1‑7中任一项所述的方法，其中
rAAV
颗粒的所述单位剂量为在约6×
10
10
至约2×
10
11
个载体基因组
/
眼睛
(vg/
眼睛
)
之间
。9.
如权利要求1‑8中任一项所述的方法，其中
rAAV
颗粒的所述单位剂量为在约2×
10
11
至约6×
10
11
个载体基因组
/
眼睛
(vg/
眼睛
)
之间
。10.
如权利要求9所述的方法，其中
rAAV
颗粒的所述单位剂量为约2×
10
11
或约6×
10
11
个载体基因组
/
眼睛
(vg/
眼睛
)。11.
如权利要求
10
所述的方法，其中
rAAV
颗粒的所述单位剂量为约2×
10
11
个载体基因组
/
眼睛
(vg/
眼睛
)。12.
如权利要求
11
所述的方法，其中
rAAV
颗粒所述单位剂量的为约6×
10
11
个载体基因组
/
眼睛
(vg/
眼睛
)。13.
如权利要求1‑
12
中任一项所述的方法，其还包括向所述个体的对侧眼睛施用单位剂量的
rAAV
颗粒
。14.
如权利要求
13
所述的方法，其中向所述对侧眼睛施用所述单位剂量的
rAAV
颗粒是在向所述一只眼睛施用所述单位剂量的
rAAV
颗粒之后至多约2周
。
15.
如权利要求
14
所述的方法，其中：
(a)
向所述对侧眼睛施用所述单位剂量的
rAAV
颗粒是在与向所述一只眼睛施用所述单位剂量的
rAAV
颗粒的同一天；或
(b)
向所述对侧眼睛施用所述单位剂量的
rAAV
颗粒是在向所述一只眼睛施用所述单位剂量的
rAAV
颗粒之后约1天至约
14
天之间
。16.
如权利要求
13
‑
15
中任一项所述的方法，其中与向所述个体的一只眼睛施用的所述单位剂量的
rAAV
颗粒相比，向所述个体的对侧眼睛施用的所述单位剂量的
rAAV
颗粒包含相同或更少的载体基因组
/
眼睛
(vg/
眼睛
)。17.
如权利要求
16
所述的方法，其中向所述对侧眼睛施用所述单位剂量的
rAAV
颗粒是在向所述一只眼睛施用所述单位剂量的
rAAV
颗粒之后至少约2周
。18.
如权利要求
15
所述的方法，其中与向所述个体的一只眼睛施用的
rAAV
颗粒的所述单位剂量相比，向所述个体的对侧眼睛施用的
rAAV
颗粒的所述单位剂量包含更多的载体基因组
/
眼睛
(vg/
眼睛
)。19.
如权利要求1‑
18
中任一项所述的方法，其中所述核酸包含
SEQ ID NO:40
的核酸序列或与其具有至少
85
％同一性的序列
。20.
如权利要求1‑
19
中任一项所述的方法，其中所述多肽包含
SEQ ID NO:35
的氨基酸序列
。21.
如权利要求1‑
20
中任一项所述的方法，其中所述多肽包含
SEQ ID NO:41
的氨基酸序列
。22.
如权利要求1‑
21
中任一项所述的方法，其中所述多肽为阿柏西普
。23.
如权利要求1‑
22
中任一项所述的方法，其中所述核酸还包含第一增强子区
、
启动子区
、5'UTR
区
、
第二增强子区和聚腺苷酸化位点
。24.
如权利要求1‑
23
中任一项所述的方法，其中所述核酸以5’
至3’
顺序包含：
(a)
第一增强子区；
(b)
启动子区；
(c)5'UTR
区；
(d)
编码多肽的核酸，所述多肽包含与
SEQ ID NO:35
的氨基酸序列具有至少约
95
％同一性的氨基酸序列；
(e)
第二增强子区；和
(f)
聚腺苷酸化位点；并且侧接
AAV2
反向末端重复序列
(ITR)。25.
如权利要求
23
或权利要求
24
所述的方法，其中所述第一增强子区包含
CMV
序列，所述
CMV
序列包含
SEQ ID NO:22
的序列或与其具有至少
85
％同一性的序列
。26.
如权利要求
23
‑
25
中任一项所述的方法，其中所述启动子区包含
CMV
序列，所述
CMV
序列包含
SEQ ID NO:23
的序列或与其具有至少
85
％同一性的序列
。27.
如权利要求
24
‑
26
中任一项所述的方法，其中所述编码多肽的核酸包含
SEQ ID NO:40
的核酸序列或与其具有至少
85
％同一性的序列
。28.
如权利要求
24
‑
27
中任一项所述的方法，其中所述多肽包含
SEQ ID NO:35
的氨基酸序列或与其具有至少
95

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：阿德夫拉姆生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：