用于治疗勃起功能障碍的基因修饰外泌体及其制备方法技术

本申请涉及勃起功能障碍治疗的技术领域，具体公开了一种用于治疗勃起功能障碍的基因修饰外泌体及其制备方法

【技术实现步骤摘要】
用于治疗勃起功能障碍的基因修饰外泌体及其制备方法


[0001]本申请涉及勃起功能障碍治疗的
，更具体地说，它涉及用于治疗勃起功能障碍的基因修饰外泌体及其制备方法
。

技术介绍

[0002]勃起功能障碍俗称阳痿，是指阴茎持续不能达到或维持足够的勃起以完成满意的性生活，病程为3个月以上
。
阴茎勃起的原理主要是海绵体神经控制阴茎血管充血，包括阴茎动脉血流量增加以及对流出小静脉的压迫
。ED
的病因包括病理性衰老
、
生理性因素和混合型因素
。
病理性因素包括精神心理因素
、
酒精摄入过量损伤海绵体神经
、
阴茎海绵体神经和血管外伤
、
前列腺癌手术损伤海绵体神经
、
糖尿病引起海绵体神经和血管病变等
。
糖尿病性
ED
是临床上最常见的
ED
类型，海绵体的病理机制包括微血管内皮细胞功能障碍和神经感觉传导不良
。
糖尿病患者
ED
的发生率为
30
％～
80
％，是健康人的6倍
。
[0003]针对该高发疾病，目前研究发现：以相关药物治疗该疾病，例如以
miR
‑
92a
拮抗剂治疗，例如以
miR
‑
328
拮抗剂治疗；上述拮抗剂治疗糖尿病引起的勃起功能障碍时，其共同的技术局限性为/>miRNA
拮抗剂仅仅是
miRNA
的互补序列，同样为一段7～
20
个碱基的
miRNA
，在细胞外液中非常容易被
RNA
酶快速降解，其治疗效果不佳，对海绵体细胞功能的调控作用有限
。

技术实现思路

[0004]为了进一步缓解基因产品在细胞外液中易被
RNA
酶快速降解的问题并进一步提高勃起功能障碍的治疗效果，本申请提供一种用于治疗勃起功能障碍的基因修饰外泌体及其制备方法
。
[0005]在该方案中，
Exo
是
exosome
的缩写，指的是外泌体；
miR
是
microRNA
的缩写，指的是微小
RNA(
即
miRNA)
；
in
是
inhibitor
的缩写，指的是抑制剂
。miR
‑
92a
‑
3p
‑
in
指的是
miRNA
‑
92a
‑
3p
抑制基因，
miR
‑
328
‑
3p
‑
in
指的是
miRNA
‑
328
‑
3p
抑制基因
。Exo
‑
miR
‑
92a
‑
3p
‑
in
指的是携带有
miRNA
‑
92a
‑
3p
‑
in
的外泌体，
Exo
‑
miR
‑
328
‑
3p
‑
in
指的是携带有
miRNA
‑
328
‑
3p
‑
in
的外泌体，
Exo
‑
miR
‑
92a
‑
3p
‑
in/328
‑
3p
‑
in
指的是同时携带有
miRNA
‑
92a
‑
3p
‑
in
和
miRNA
‑
328
‑
3p
‑
in
的外泌体
。
[0006]第一方面，本申请提供一种用于治疗勃起功能障碍的基因修饰外泌体，采用如下的技术方案：用于治疗勃起功能障碍的基因修饰外泌体，所述基因修饰外泌体为
Exo
‑
miR
‑
92a
‑
3p
‑
in/328
‑
3p
‑
in。
[0007]通过采用上述技术方案，本申请的基因修饰外泌体是同时含有
miR
‑
92a
‑
3p
‑
in
和
miR
‑
328
‑
3p
‑
in
的
。
在发挥治疗效果时，这两种基因协同发挥作用，以显著提高勃起功能障碍的治疗效果，实现
1+1
＞2的技术效果
。
在该方案中，相关的基因均是位于外泌体内的，治疗时外泌体的膜结构与细胞膜发生膜融合，将相关
miR
直接释放至细胞内，以发挥作用
。
因
此该方式能够显著降低
miR
‑
92a
‑
3p
‑
in
和
miR
‑
328
‑
3p
‑
in
在细胞外液被
RNA
酶快速酶解而无法发挥拮抗相关基因的作用，以显著提高治疗效果
。
[0008]可选的，所述基因修饰外泌体以基因修饰外泌体悬浮液的形式使用，所述基因修饰外泌体悬浮液中，所述
Exo
‑
miR
‑
92a
‑
3p
‑
in/328
‑
3p
‑
in
含量为
(1.5
‑
5.5)
×
10
11
个
/mL。
[0009]第二方面，本申请提供一种用于治疗勃起功能障碍的基因修饰外泌体的制备方法，采用如下的技术方案：上述用于治疗勃起功能障碍的基因修饰外泌体的制备方法，包括以下步骤：步骤
I、
制备间充质干细胞，备用；制备含有基因
miR
‑
92a
‑
3p
‑
in
和基因
miR
‑
328
‑
3p
‑
in
的重组慢病毒并扩大培养，留重组慢病毒上清液备用；步骤
II、
将所述间充质干细胞和所述重组慢病毒上清液混合，扩大培养；随后筛选培养，得到本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
用于治疗勃起功能障碍的基因修饰外泌体，其特征在于，所述基因修饰外泌体为
Exo
‑
miR
‑
92a
‑
3p
‑
in/328
‑
3p
‑
in。2.
根据权利要求1所述的用于治疗勃起功能障碍的基因修饰外泌体，其特征在于，所述基因修饰外泌体以基因修饰外泌体悬浮液的形式使用，所述基因修饰外泌体悬浮液中，所述
Exo
‑
miR
‑
92a
‑
3p
‑
in/328
‑
3p
‑
in
含量为
(1.5
‑
5.5)
×
10
11
个
/mL。3.
权利要求1‑2任意一项所述用于治疗勃起功能障碍的基因修饰外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤
I、
制备间充质干细胞，备用；制备含有基因
miR
‑
92a
‑
3p
‑
in
和基因
miR
‑
328
‑
3p
‑
in
的重组慢病毒并扩大培养，留重组慢病毒上清液备用；步骤
II、
将所述间充质干细胞和所述重组慢病毒上清液混合，扩大培养；随后筛选培养，得到含有重组慢病毒的重组间充质干细胞；步骤
III、
将所述重组间充质干细胞扩大培养，收集上清，得到所述基因修饰外泌体
。4.
根据权利要求3所述用于治疗勃起功能障碍的基因修饰外泌体的制备方法，其特征在于，步骤
II
中扩大培养时选用的培养基是基础培养基，所述基础培养基的组分包括：间充质干细胞无血清基础培养基
+0.7
‑
1.3wt%
青链霉...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈继冰，王雪莹，
申请(专利权)人：广州四叶草健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：