一种用于核酸提取的磁珠的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种用于核酸提取的磁珠的制备方法及其应用

【技术实现步骤摘要】
一种用于核酸提取的磁珠的制备方法及其应用


[0001]本专利技术属于核酸提取科学领域，尤其是涉及一种用于核酸提取的磁珠的制备方法及其应用
。

技术介绍

[0002]近年来，使用磁珠法进行核酸提取具有传统
DNA
提取方法无法比拟的优势，主要体现在以下几个方面：
1、
磁珠法能够实现自动化和大批量操作，针对目前常用的
96
孔的核酸自动提取仪，用一个样品的提取时间即可实现对
96
个样品的处理，这完全符合现代生物学对高通量的操作的要求，同时也使得在传染性疾病爆发时能够进行快速及时的应对，这一特点是传统方法望尘莫及的；
2、
磁珠法提取核酸具有操作简单和用时短的优点，整个提取流程只有四步，大多可以在
36
‑
40
分钟内完成；
3、
磁珠法提取核酸还具有安全无毒的特点，不会使用到传统核酸提取方法中常用的苯或氯仿等有毒试剂，对实验操作人员的伤害减少到最少，完全符合现代绿色环保的理念；
4、
磁珠与核酸的特异性结合使得提取到的核酸纯度高且浓度大
。
[0003]然而，目前磁珠的生产厂家虽然很多，但是制备出来的磁珠提取效果相差也比较大，主要原因在于所制备出来的四氧化三铁纯度不高，且均一性
、
分散性和稳定性都不太好，从而导致包硅后的磁珠质量不稳定
。
因此，开发一种制备稳定性更高的用于核酸提取的磁珠的制备方法是非常有必要的/>。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种用于核酸提取的磁珠的制备方法及其应用
。
[0005]为了达成上述目的，本专利技术的解决方案是：
[0006]一种用于核酸提取的磁珠的制备方法，具体包括以下步骤：
[0007](1)
将金属铁盐溶于由水和醇类溶剂组成的混合溶液中制得金属铁盐溶液；
[0008](2)
往步骤
(1)
中制得的金属铁盐溶液中加入钠盐
、
还原剂和络合剂搅拌均匀制得混合溶液；
[0009](3)
将步骤
(2)
中制得的混合溶液加入到反应釜中进行水热反应；
[0010](4)
水热反应结束后，所得固体经过水和醇类溶剂洗涤后烘干制得四氧化三铁粉末；
[0011](5)
将步骤
(4)
中制得的四氧化三铁粉末混悬于由水和醇类溶剂组成的混合溶液中制得四氧化三铁混悬液；
[0012](6)
往步骤
(5)
中制得的四氧化三铁混悬液中加入表面活性剂
、
硅酯和碱，将所得混合液加热反应；
[0013](7)
加热反应结束后，所得固体经过水和醇类溶剂洗涤后烘干制得所述用于核酸提取的磁珠
。
[0014]优选地，步骤
(1)
中所述的醇类溶剂由乙醇
、
甲醇
、
丙醇
、
异丙醇
、
丙三醇或乙二醇
中的一种或多种组合而成
。
[0015]优选地，步骤
(2)
中所述的钠盐为碳酸氢钠
、
碳酸钠
、
硅酸钠
、
磷酸钠
、
醋酸钠
、
甲酸钠
、
丙酸钠或柠檬酸钠中的一种
。
[0016]优选地，步骤
(2)
中所述的还原剂由甲醇
、
乙醇
、
乙二醇
、
甲酸
、
乙酸
、
柠檬酸
、
水合肼或者亚硫酸钠中的一种或多种组合而成
。
[0017]优选地，步骤
(2)
中所述的络合剂选自
PEG400
，
PEG6000
或油酸钠的一种；所述络合剂的添加量为
0.1wt
‑
3wt
％
。
[0018]优选地，步骤
(3)
中所述的水热反应条件为：反应温度为
50
‑
250℃
；反应时间为4‑
72h。
[0019]优选地，步骤
(6)
中所述的表面活性剂为曲拉通
、tween20
或
SDS
中的一种
。
[0020]优选地，步骤
(6)
中所述的硅酯为硅酸四乙酯或硅酸四甲酯中的一种
。
[0021]一种将前述制备方法得到的磁珠在核酸提取中的应用，具体包括以下步骤：具体包括以下步骤：
[0022](1)
取裂解液和核酸样本混匀后室温放置，然后加入磁珠混匀后继续室温静置制得含磁珠混合液；
[0023](2)
将步骤
(1)
中制得的含磁珠混合液进行磁吸附，去上清；
[0024](3)
往步骤
(2)
的剩余物中加入洗涤液，混悬后进行磁吸附，去上清；
[0025](4)
往步骤
(3)
的剩余物中加入漂洗液，混悬后进行磁吸附，去上清；
[0026](5)
往步骤
(4)
的剩余物中加入缓冲液，混匀后进行磁吸附，吸取上清即为提取纯化
DNA
溶液
。
相对于现有的磁珠制备方法，本专利技术的原理和增益效果如下：
[0027]1.
本专利技术所提供的磁珠的制备方法首先是使用三价铁盐与混合还原剂在水热条件下进行还原反应制得四氧化三铁粉末，然后将硅酯在碱性条件下水解成二氧化硅并包裹于四氧化三铁表面，从而制备得到核酸提取用的磁珠
。
[0028]2.
将本专利技术所提供的方法制备的磁珠可用于核酸提取，结果表明：将样本核酸
(DNA
或
RNA)
在裂解液条件下释放出来，然后吸附到磁珠表面，吸走上清，清洗后即可得到纯度高的核酸；整个核酸提取过程操作简单且耗时少
。
[0029]3.
本专利技术所提供的方法制备的磁珠具有颗粒均匀
、
分散性好和稳定性高等优点；此外，本专利技术所提供的用于核酸提取的磁珠的制备方法还具有操作简便以及实验成本低的优点
。
附图说明
[0030]图1为实施例1所制备磁珠的
SEM
图；
[0031]图2为实施例3所制备磁珠的
SEM
图
。
具体实施方式
[0032]下面进一步结合附图和实施例以详细说明本专利技术
。
同样应理解，以下实施例只用于对本专利技术进行进一步说明，不能理解为对本专利技术保护范本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于核酸提取的磁珠的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(1)
将金属铁盐溶于由水和醇类溶剂组成的混合溶液制得金属铁盐溶液；
(2)
往步骤
(1)
中制得的金属铁盐溶液中加入钠盐
、
还原剂和络合剂搅拌均匀制得混合溶液；
(3)
将步骤
(2)
中制得的混合溶液加入到反应釜中进行水热反应；
(4)
水热反应结束后，所得固体经过水和醇类溶剂洗涤后烘干制得四氧化三铁粉末；
(5)
将步骤
(4)
中制得的四氧化三铁粉末混悬于由水和醇类溶剂组成的混合溶液中制得四氧化三铁混悬液；
(6)
往步骤
(5)
中制得的四氧化三铁混悬液中加入表面活性剂
、
硅酯和碱，将所得混合液加热反应；
(7)
加热反应结束后，所得固体经过水和醇类溶剂洗涤后烘干制得所述用于核酸提取的磁珠
。2.
根据权利要求1所述的用于核酸提取的磁珠的制备方法，其特征在于：步骤
(1)
中所述的醇类溶剂由乙醇
、
甲醇
、
丙醇
、
异丙醇
、
丙三醇或乙二醇中的一种或多种组合而成
。3.
根据权利要求1所述的用于核酸提取的磁珠的制备方法，其特征在于：步骤
(2)
中所述的钠盐为碳酸氢钠
、
碳酸钠
、
硅酸钠
、
磷酸钠
、
醋酸钠
、
甲酸钠
、
丙酸钠或柠檬酸钠中的一种
。4.
根据权利要求1所述的用于核酸提取的磁珠的制备方法，其特征在于：步骤
(2)
中所述的还原剂由甲醇
、
乙醇
、
乙二醇
、
甲酸<...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈江能，许全贵，王佩浩，
申请(专利权)人：厦门安普利生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：