多顺反子制造技术

本公开涉及多顺反子

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多顺反子RNA疫苗及其用途
[0001]相关申请资料
[0002]本申请要求
2020
年
12
月2日提交的题为“多顺反子自我复制
RNA
及其用途
(Multicistronic self
‑
replicating RNA and uses thereof)”的美国专利申请号
63/120,362
的优先权，其全部内容通过引用并入本文
。
[0003]序列表
[0004]本申请与电子形式的序列表一起提交
。
序列表的全部内容通过引用并入本文
。


[0005]本公开涉及多顺反子
RNA
疫苗及其用途
。
本公开还涉及多顺反子常规
mRNA
疫苗及其用途
。
本公开进一步涉及多顺反子自我复制
RNA
疫苗及其用途
。

技术介绍

[0006]呼吸道病毒感染对人类健康和生命构成重大威胁
。
已知诸如由流感病毒和严重急性呼吸综合征冠状病毒
(SARS
‑
CoV)
引起的那些感染导致全球大流行，世界各地数百万人死亡
。
最近，
SAR
‑
CoV
‑2引起了正在全球范围内进行的严重传染性冠状病毒疾病
2019(COVID
‑
19)
的大流行
。/>[0007]目前，用抗病毒剂或其它药物治疗诸如流感的感染
。
然而，目前对于大多数呼吸道病毒感染没有特异性和有效的治疗
。
对于可用于某些呼吸道病毒感染的那些特异性治疗，例如抗
COVID
‑
19
的
mRNA
疫苗，可以进行进一步改进以增加其功效
。
[0008]病毒疫苗，诸如流感疫苗，依赖于通过中和病毒体或阻断病毒进入细胞而防止感染的抗体的诱导
。
体液免疫应答靶向病毒表面蛋白，然而由于这些表面蛋白在每种毒株内是保守的，抗体介导的针对具有血清学上不同的表面蛋白的毒株的保护是不充分的
。
此外，许多病毒的表面蛋白能够快速突变
。
这意味着大多数疫苗必须是多价的，即包括来自预计在给定时期内最流行的毒株的抗原
。
[0009]为了增强对流感病毒表面蛋白的免疫应答
(
例如，抗体应答
)
，在疫苗制剂中包括各种佐剂和免疫增强剂
。
然而，安全性和有效性问题仍然存在
。
[0010]目前，基于鸡蛋的制造工艺是生产流感疫苗的最常见方式
。
该工艺需要大量的时间来优化病毒在鸡蛋中的生长，也需要资源
(
即，鸡蛋
)
来生产足够量的疫苗，特别是在大流行期间
。
此外，考虑到所需的长研制时间，在可获得疫苗之前进行疫苗株选择，使得难以对病毒的变化作出响应
。
流感疫苗也已经使用基于细胞的制造工艺生产，涉及用培养的哺乳动物细胞
(
例如，
Madin
‑
Darby
犬肾细胞，或
MDCK
细胞
)
代替鸡蛋，和基于病毒的平台，涉及重组病毒
(
例如，编码流感抗原的杆状病毒
)。
[0011]仍然需要研制特异性和有效的病毒疫苗，其可以比目前基于鸡蛋的技术更快速地生产，用于治疗或预防呼吸道病毒感染，诸如流感和
COVID
‑
19。
基于核酸的疫苗比目前基于鸡蛋的制造平台具有明显的优势，尽管仍存在一些挑战
。
例如，
mRNA
的固有不稳定性质导致大多数基于
RNA
的疫苗在产生强
、
持久的免疫应答所需的剂量和持续时间下提供抗原的能
力有限
。
因此，对于本领域技术人员显而易见的是，本领域需要用于将外源核酸递送至受试者的改进手段
。
本领域还需要在受试者的靶细胞内具有增强的稳定性和改进的抗原表达的
mRNA
疫苗
。

技术实现思路

[0012]本公开的专利技术人已经鉴定了具有改进的活性并且允许多于一种抗原的有效表达的
RNA(
即，多顺反子
RNA)。
本公开基于专利技术人对具有改进活性的自我复制
RNA
的鉴定
。
特别地，本专利技术人已经鉴定了允许有效表达多于一种抗原并且不导致不需要的融合蛋白形成的自我复制
RNA。
[0013]专利技术人的发现为多顺反子
RNA
提供了基础
。
本专利技术人的发现也为多顺反子自我复制
RNA
提供了基础
。
此外，本专利技术人的发现为多顺反子常规
(
即非自我复制
)RNA
提供了基础
。
本专利技术人的发现还为治疗或预防受试者中的疾病或疾患
(
例如，由呼吸道病毒感染诸如流感
、SARS
‑
COV
‑2感染
、COVID
‑
19
或
ARDS
引起的疾病
)
或延缓其进展的方法提供了基础
。
[0014]因此，本公开提供了一种多核苷酸，其包含：
a)
编码目的第一多肽的第一核苷酸序列；和
b)
编码目的第二多肽的第二核苷酸序列，其与选自由亚基因组
(SG)
启动子和内部核糖体进入位点
(IRES)
组成的组的调节元件可操作地连接
。
[0015]在一个实例中，多核苷酸按从
5'
至
3'
的顺序包含：
a)
编码目的第一多肽的第一核苷酸序列；和
b)
编码目的第二多肽的第二核苷酸序列，其与选自由
SG
启动子和
IRES
组成的组的调节元件可操作地连接
。
[0016]本公开还提供了一种多核苷酸，其包含：
a)
编码目的第一抗原的第一核苷酸序列；和
b)
编码目的第二抗原的第二核苷酸序列，其与选自由
SG
启动子和
IRES
组成的组的调节元件可操作地连接
。
[0017]在一个实例中，多核苷酸按从
5'
至
3'
的顺序包含：
a)
编码目的第一抗原的第一核苷酸序列；和
b)
编码目的第二抗原的第二核苷酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种多顺反子自我复制
RNA
，其包含：
a)
编码第一抗原的第一核苷酸序列，其与亚基因组
(SG)
启动子可操作地连接；和
b)
编码第二抗原的第二核苷酸序列，其与选自由
SG
启动子和内部核糖体进入位点
(IRES)
组成的组的调节元件可操作地连接
。2.
根据权利要求1所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述
RNA
按从
5'
至
3'
的顺序包含：
a)
编码第一抗原的第一核苷酸序列，其与
SG
启动子可操作地连接；和
b)
编码第二抗原的第二核苷酸序列，其与
IRES
或
SG
启动子可操作地连接
。3.
根据权利要求2所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述
RNA
包含一个或多个附加的核苷酸序列，其中每个序列编码附加的抗原，所述附加的抗原与选自由
SG
启动子和
IRES
组成的组的调节元件可操作地连接，并且其中所述一个或多个核苷酸序列位于所述第二核苷酸序列的
3'
处
。4.
根据权利要求1至3中任一项所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述
SG
启动子是最小
SG
启动子或延伸的
SG
启动子
。5.
根据权利要求4所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述延伸的
SG
启动子在
5'
端延伸，其中核苷酸存在于编码
RNA
病毒的非结构蛋白的序列中
。6.
根据权利要求1至5中任一项所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述
IRES
是衍生自脑心肌炎病毒
(EMCV)
的野生型
IRES。7.
根据权利要求1至6中任一项所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述
RNA
按从
5'
至
3'
的顺序包含：
a)
编码第一抗原的第一核苷酸序列，其与最小
SG
启动子可操作地连接；和编码第二抗原的第二核苷酸序列，其与最小
SG
启动子可操作地连接；或
b)
编码第一抗原的第一核苷酸序列，其与最小
SG
启动子可操作地连接；和编码第二抗原的第二核苷酸序列，其与延伸的
SG
启动子可操作地连接；或
c)
编码第一抗原的第一核苷酸序列，其与最小
SG
启动子可操作地连接；和编码第二抗原的第二核苷酸序列，其与野生型
EMCVIRES
可操作地连接
。8.
根据权利要求4至7中任一项所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述最小
SG
启动子由
SEQ ID NO:1
中所列的序列编码
。9.
根据权利要求4至7中任一项所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述延伸的
SG
启动子由
SEQ ID NO:2
或
SEQ ID NO:3
或
SEQ ID NO:47
中所列的序列编码
。10.
根据权利要求6至9中任一项所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述野生型
EMCVIRES
由
SEQ ID NO:4
中所列的序列编码
。11.
根据权利要求1至
10
中任一项所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述抗原以基本相同的水平表达
。12.
根据权利要求1至
11
中任一项所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述自我复制
RNA
来自甲病毒
。13.
根据权利要求
12
所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述甲病毒选自由以下组成的组：塞姆利基森林病毒
(SFV)、
辛德毕斯病毒
(SIN)
和委内瑞拉马脑炎病毒
(VEE)
及其组合
。14.
根据权利要求1至
13
中任一项所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述抗原是来自呼吸道病毒的病毒抗原
。
15.
根据权利要求
14
所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述呼吸道病毒选自由以下组成的组：流感病毒
、
呼吸道合胞病毒
、
副流感病毒
、
偏肺病毒
、
鼻病毒
、
冠状病毒
、
腺病毒和博卡病毒
。16.
根据权利要求
15
所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述抗原来自所述流感病毒的不同毒株
。17.
根据权利要求
15
或权利要求
16
所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述抗原来自所述流感病毒的不同亚型
。18.
根据权利要求
15
至
17
中任一项所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述抗原是流感病毒血凝素
(HA)
蛋白
、
神经氨酸苷酶
(NA)
蛋白
、
基质
(M)
蛋白
、
核蛋白
(NP)
和
/
或非结构
(NS)
蛋白
。19.
根据权利要求
15
至
18
中任一项所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述抗原是
H5
蛋白和
/
或
N1
蛋白
。20.
根据权利要求
19
所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述
RNA
按从
5'
至
3'
的顺序包含：
a)
编码所述
H5
蛋白的第一核苷酸序列；和编码所述
N1
蛋白的第二核苷酸序列；或
b)
编码所述
N1
蛋白的第一核苷酸序列；和编码所述
H5
蛋白的第二核苷酸序列
。21.
根据权利要求
15
所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述冠状病毒是严重急性呼吸综合征冠状病毒
2(SARS
‑
CoV
‑
2)。22.
根据权利要求
21
所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述抗原是
SARS
‑
CoV
‑2核壳体
(N)
蛋白和
/
或刺突
(S)
蛋白
。23.
根据权利要求
22
所述的多顺反子自我复制
RNA
，其中所述
RNA
按从
5'
至
3'
的顺序包含：
a)
编码所述
N
蛋白的第一核...

【专利技术属性】
技术研发人员：P，
申请(专利权)人：SEQIRUS，
类型：发明
国别省市：