一株蒙氏假单胞菌制造技术

本发明专利技术公开了一株蒙氏假单胞菌

【技术实现步骤摘要】
一株蒙氏假单胞菌、胶原酶及发酵方法和应用


[0001]本专利技术属于肉骨粉加工
，具体涉及一株蒙氏假单胞菌
、
胶原酶及发酵方法和应用
。

技术介绍

[0002]随着我国经济的发展以及人民生活水平的提高，肉类产品的需求与日俱增，导致动物源下脚料的堆积问题严重，对环境治理造成一定的压力
。
动物皮肉废弃物中因含有大量油脂
、
蛋白等成分，极易腐烂，严重污染空气
、
水源和土壤，并且该类废弃物非常容易遭受微生物的污染，其中含有大肠杆菌
、
沙门氏菌以及耶尔森氏菌的几率更大，严重危害人类的健康
。
传统的焚烧
、
填埋等处理方式已经严重不符合当前“双碳”经济的发展要求，因此有效处理动物源皮肉下脚料，对其进行高值化再利用，对于保护生态环境
、
推动社会的可持续发展具有非常重要的意义
。
[0003]动物皮肉下脚料中含有丰富的胶原蛋白等蛋白质，可用于提取胶原蛋白水解产物多肽和氨基酸等物质，多肽被证实具有抗糖尿病
、
降压
、
抗菌
、
抗氧化等功效，该类物质在保健食品行业
、
化妆品行业等有广阔的需求空间
。
[0004]现阶段对动物皮肉下脚料的再利用方式，如对其进行能源化处理，是将动物皮肉下脚料进行焚烧获取能源，该方法容易对空气造成污染，并且资源化利用程度较低
。
将动物皮肉下脚料进行粉碎
、
压榨等处理作为原料制取动物饲料或肥料，例如公开号为
CN116391795A
的专利
《
一种肉骨粉的制备方法
》
将病死动物的尸体和动物下脚料进行充分清洗后，放入破碎机中破碎筛选，通过加入豆粕等物料和复合菌液进行生物降解，之后经过杀菌
、
干燥
、
压榨
、
复配
、
烘干等步骤得到肉骨粉，用于动物吸收
。
其生物降解过程加入的复合菌剂包括：枯草芽孢杆菌
、
毕赤酵母菌和黑曲霉菌，该过程主要是对添加的豆粕等进行饲料的发酵
。
该专利对动物下脚料进行了粉碎
、
复配等再加工，未对其中的胶原蛋白等资源进行单独利用
。
[0005]公开号为
CN116098236A
的专利
《
一种压榨型肉骨粉原料的制备方法
》
公开了一种将病死动物尸体和动物下脚料进行破碎
、
蒸煮
、
压榨等处理制备肉骨粉的方法，该方法是对动物下脚料进行破碎压榨等再加工，其中的胶原蛋白作为大分子物质被直接再加工，未单独利用
。
[0006]公开号为
CN116376888A
的专利
《
动物皮水解复合酶及其在动物皮提取胶原蛋白中的应用
》
公开了一种用木瓜蛋白酶
、
胰蛋白酶
、
风味蛋白酶
、
米曲霉外切蛋白酶
、
乙二胺四乙酸四钠盐
、
硫酸钠
、
甘露醇和水溶性壳聚糖对猪皮
、
牛皮
、
羊皮中胶原蛋白进行提取的工艺，该工艺仅针对动物皮，其肉质资源需手动去除，增加了工艺，胶原蛋白是分子量介于
1200
‑
1500Da
之间，该工艺提取到的胶原蛋白，平均分子量分别在
1015
‑
1783Da、1009
‑
1732Da
和
1025
‑
1742Da
，该胶原蛋白分子量较大
。
[0027]菌株筛选方法：
[0028]富集：取腐烂羊皮
1g
，加入含玻璃珠的无菌水
50mL/250mL
的锥形瓶中，放在
180rpm、37℃
的摇床培养
30min
，将样品混合均匀
。
[0029]取
5mL
上述培养液加入
35mL
富集培养基中，在
37℃
，
200r/min
条件下培养
48h。
[0030]富集培养基：明胶
10g/L
，蛋白胨
10g/L
，牛肉膏
5g/L
，
NaCl 5g/L
，琼脂
20g/L
，
pH 7.2。
[0031]初筛：取富集后的菌液用十倍稀释法梯度稀释至不同倍数
(10
‑1‑
10
‑8)
，取
10
‑4、10
‑5、10
‑6、10
‑7、10
‑8、10
‑9、10
‑
10
七个稀释梯度，将稀释的样品各取
100
μ
L
菌液，涂布于初筛培养基平板上，每个梯度做3个平行，平板在
37℃
恒温倒置培养
48h
，观察菌落生长情况
。
待菌落长出后，标记单菌落，将单菌落转移至另一初筛验证培养基上
37℃
培养
48h
，滴加酸性汞试剂，检测分解圈，菌落周围出现透明圈者为阳性
。
[0032]用接种环挑取有明显水解圈的菌株，接种到初筛培养基上，划线分离点培养
48h
，得到纯种单菌落
。
[0033]在菌落周围滴加酸性汞试剂，检测分解圈，用游标卡尺测量水解圈和菌落直径，选取水解圈直径与菌落直径比值
(H/C)
较大的菌株作为初筛的产胶原酶菌株，进行复筛
。
[0034]初筛培养基：明胶
20g/L
；
NaCl 5g/L
；琼脂
20g/L
；
pH 7.2
[0035]复筛：将初筛得到的纯种菌接种到
50mL/250mL
复筛培养基中，进行液体摇床培养
48h(37℃
，
120rpm)
，然后
4000rpm
离心
15min
，取上清液，进行胶原酶酶活力测定，取酶活力最高的菌株作为复筛菌株，进行菌种鉴定
。
[0036]复筛培养基：明胶
10g/L
，蛋白胨
5g/L
，牛肉膏
5g/L
，
NaCl 5g/L
，
pH 7.2
表1各菌落水解圈直径与菌落直径比值
(H/C)
[0037本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一株蒙氏假单胞菌
(Pseudomomas monteilii)JY
‑2，保藏编号为
CGMCCNo.26051。2.
一种利用权利要求1所述蒙氏假单胞菌
JY
‑2发酵获得的胶原酶
。3.
权利要求2所述胶原酶的发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1所述蒙氏假单胞菌
JY
‑2的种子液接种到发酵培养基中，在
25℃
进行发酵培养，发酵液中包含所述胶原酶；所述发酵培养基的组成成分包括：牛肉膏7‑
9g/L
，蛋白胨4‑
6g/L
，
K2HPO40.5
‑
1.5g/L
，
NaCl 3
‑
5g/L
，
pH
＝
7.5
‑
8.5。4.
根据权利要求3所述发酵方法，其特征在于，接种量为4％
(v/v)。5.
根据权利要求3所述发酵方法，其特征在于，所述发酵培养的时间为
48h。6.
...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹倩荣，吴芳彤，刘春卯，秦梦，赵露，王力源，周贺，郑翔，
申请(专利权)人：河北省微生物研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：