一种紫苏细胞外囊泡及其提取方法技术

本发明专利技术公开了一种紫苏细胞外囊泡及其提取方法，属于细胞外囊泡提取技术领域：其提取方法包括以下步骤：

【技术实现步骤摘要】
一种紫苏细胞外囊泡及其提取方法


[0001]本专利技术属于植物来源细胞外囊泡提取
，尤其涉及一种紫苏细胞外囊泡及其提取方法
。

技术介绍

[0002]紫苏
Perillafrutescens(L.)
隶属于唇形科紫苏植物，为直立的一年生草本植物
。
该属植物广泛种植于中国境内，并在海外广泛种植于不丹，印度，朝鲜等国家
。
紫苏为国家农业部批准的
87
种“药食兼用”中药，其临床应用已有较长时间，最早见于
《
名医别录
》
，
《
中国药典
》
收载了紫苏的叶
、
梗
、
子等主要入药成分，对于伤风，发烧，咳嗽，哮喘等其叶具有治疗作用；其梗可用于治疗心悸
、
食滞
、
腹疼痛；其子可以用于治疗咳嗽，痰喘，气滞，便秘等
。
紫苏叶为卵形，对生，颜色是由绿色到紫色，具有锯齿边缘，具有一种独特的麝香
、
薄荷味
。
紫苏叶中的化学成分主要有黄酮及花青素类
、
挥发油
、
酚酸类
、
苷类
、
三萜类和甾体以及其他化合物，例如香豆素
、
有机酸
、
类胡萝卜素
、
维生素等
。
现有研究表明，紫苏叶具有抗炎
、
抗氧化
、/>抗菌
、
抗肿瘤
、
抗过敏和抗糖等作用
。
[0003]细胞外囊泡
(Extracellular Vesicles,EVs)
是由细胞分泌的
、
具有膜结构的各种类型囊泡的统称
。
当前研究中的囊泡类型主要是尺寸小于
200nm
的
EVs(
参考文献1：苏勇汇，徐珊珊，王欢等
.
药用植物细胞外囊泡作为新型药效物质的研究进展
[J].
中草药，
2023
，
54(12):4044
‑
4052.)
据文献报道，
EVs
为具有完整膜的盘状或球形囊泡状颗粒，其具有典型的外泌体样外观，其
Zeta
电位为
‑
41.83mV(
参考文献2：
Zhang X,Pan Z,WangY,et al.Taraxacum officinale
‑
derived exosome
‑
like nanovesicles modulate gut metabolites to prevent intermittent hypoxia
‑
induced hypertension[J].Biomedicine&Pharmacotherapy,2023,161:114572.)。EVs
从细胞释放到周围环境中，这一生物学过程在从细菌到植物和人类的整个进化过程中都是保守的
。
最初人们认为
EVs
的分泌是细胞清除不需要的物质分子的一种手段，但进一步研究发现，
EVs
可以作为信息载体，参与细胞间通讯
。EVs
能将信息从供体细胞运输到受体细胞，被受体细胞识别后，通过
EVs
表面分子或内吞途径将信息传递到细胞内，进一步激活受体细胞内的信号转导
。
这些信息物质包括蛋白质
、
脂质
、
代谢物
、
糖
、RNA(mRNA、miRNA、siRNA)
甚至
DNA
等
。
在临床医学中，
EVs
可以用于治疗
、
预防疾病，以及成为判断某些疾病的生物标志物
。
在植物中也有研究显示，
EVs
可以作为植物和病原菌细胞之间信息交流的有效载体，或者参与植物对病原体的防御反应，在调节植物免疫方面发挥着重要作用
。
紫苏的细胞外囊泡以活性物质为基础，包含内容物丰富，具有绿色化的优势，因而有着更好的生物相容性和低毒副性
。
[0004]目前，尚未见到有报道紫苏细胞外囊泡的提取方法，现有植物细胞外囊泡提取方法主要有超速离心法
、
密度梯度离心法
、
超滤离心法
、
多聚物沉淀法
、
免疫磁珠法以及试剂盒提取法等
。
其中超速离心法结合蔗糖密度梯度离心是最常使用的方法，但其需要多步超速离心步骤，处理大规模外囊泡提取耗时长，且回收率很低；此外，重复多次的离心操作还有可能对囊泡造成损害，从而降低其质量
。
这些都限制了紫苏细胞外囊泡的大规模提取
。
因
此，专利技术一种紫苏细胞外囊泡的提取方法进一步提高其利用率势在必行
。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供一种紫苏细胞外囊泡的提取方法，旨在解决现有植物来源细胞外囊泡的大规模提取存在的离心步骤多
、
消耗时间长
、
产品收率低和对囊泡伤害大等缺陷，本专利技术采用
PEG8000
对紫苏细胞外囊泡进行提取；
PEG8000
具有较强的亲水性，能与紫苏细胞外囊泡以氢键的形式形成复合物，从而使得细胞外囊泡在较低转速下即可沉淀；同时应用岩藻多糖作为保护剂对提取得到的紫苏细胞外囊泡进行保护
。
[0006]本专利技术技术方案如下：
[0007]一种紫苏细胞外囊泡及其提取方法，包括以下步骤：
[0008](1)
将新鲜紫苏清洗干净，用去离子水冲洗三次，沥干表面水分后，剪碎，加入紫苏重量1‑3倍重量的
PBS
缓冲液用搅拌机进行榨汁，取干净纱布折叠三次进行过滤，收集过滤后的汁液；
[0009](2)
离心提取：将步骤
(1)
中的汁液在
4℃
下
500g
‑
1500g
离心
5min
‑
15min
；随后取其上清液，在
4℃
下
2000g
‑
4000g
离心
15min
‑
25min
；随后取上清，在
4℃
下
9000g
‑
11000g
离心
25min
‑
35min
，取上清液收集；
[0010](3)
取
(2)
中的上清液，过两级微孔滤膜抽滤，随后加本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种紫苏来源细胞外囊泡的提取方法，其特征在于，紫苏榨汁后加入
PEG8000
溶液过夜孵育，孵育后的液体分离提纯即得
。(1)
将新鲜紫苏清洗干净，用去离子水冲洗三次，沥干表面水分后，剪碎，加入紫苏1‑3倍重量的磷酸盐缓冲液用搅拌机进行榨汁，取干净纱布折叠三次进行过滤，收集过滤后的汁液；
(2)
离心提取：将步骤
(1)
中的汁液在
4℃
下
500g
‑
1500g
离心
5min
‑
15min
；随后取其上清液，在
4℃
下
2000g
‑
4000g
离心
15min
‑
25min
；随后取上清，在
4℃
下
9000g
‑
11000g
离心
25min
‑
35min
，取上清液收集；
(3)
取
(2)
中的上清液，过两级微孔滤膜抽滤，随后加入
8wt
％的
PEG8000
溶液，
4℃
过夜孵育
。(4)
将
(3)
中过夜孵育后的液体在
4℃
下
13000g
‑
15000g
离心
20min
‑
40min
，随后弃去上清液，用
500
μ
LPBS
缓冲液重悬沉淀，随后过3μ
m
和
0.22
μ
m
的滤膜，得到悬液；
(5)
往
(4)
获得的滤液中加入等体积
2wt
％的岩藻多糖溶液作为细胞外囊泡的保护剂，随后进行真空冷冻干燥，即可得到以冻干形式保存的紫苏细胞外囊泡
。2.
根据权利要求1所述的细胞外囊泡的提取方法，其特征在于：步骤
(1)
中所述的紫苏，为新鲜现采的紫苏，茎绿色或紫色，钝四棱形；叶阔卵形或圆形，基部圆形或阔...

【专利技术属性】
技术研发人员：何燕，叶慧玲，刘旭杰，唐钧泽，冯振振，鲍颖，李心怡，曹桂宁，陈静曼，
申请(专利权)人：广东工业大学，
类型：发明
国别省市：