一种含伊拉米肽的猪精子冷冻保存稀释剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种含伊拉米肽的猪精子冷冻保存稀释剂及其应用，属于动物科学中的精子保存及人工授精技术领域

【技术实现步骤摘要】
一种含伊拉米肽的猪精子冷冻保存稀释剂及其应用


[0001]本专利技术属于动物科学中的精子保存及人工授精
，具体涉及一种含伊拉米肽的猪精子冷冻保存稀释剂，以及含伊拉米肽的猪精子冷冻保存稀释剂冷冻保存猪精子的方法
。

技术介绍

[0002]猪肉是我国居民肉类消费的主要品类之一，生猪生产在畜牧业中具有重要的战略地位
。
人工授精技术是目前生猪繁殖的必需技术之一，几乎全部的集约化生猪养殖企业均于依靠人工授精技术完成生猪扩繁
。
[0003]目前生猪的人工受精常以短期液体保存的精液为主，这主要是由于猪精子对体外保存环境的变化高度敏感
。
但也面临着保存时间较短及细菌繁殖等不利影响
。
而冷冻保存具有保存时间长及运输距离远等优势，逐渐成为生猪保种及远距离配种的首要选择
。
[0004]活性氧是细胞的有氧代谢的副产物，适宜的浓度对精子获能及受精具有重要作用
。
但猪精子在冷冻保存过程中由于外界环境的剧烈变化极易导致细胞内活性氧的利用
/
代谢体系失衡即抗氧化能力降低，造成活性氧过度堆积最终使得精子凋亡
。
[0005]冷冻保存其近乎无限的保存时间以及良好的远程运输耐受性使其成为了种质资源远距离交流的必需技术，能够使优良种质资源不再受时间及距离的限制，有效促进优良生猪繁殖及高质量生猪产品的生产
。
因此，如何缓解猪精子在冷冻过程中的损伤及抗氧化能力降低水平成为改善其冷冻保存质量的重要技术方向之一
。

技术实现思路

[0006]针对现有技术的以上技术不足与缺陷，本专利技术提供了一种含伊拉米肽的猪精子冷冻保存稀释剂及其冷冻保存猪精子的方法
。
[0007]为实现上述目的，按照本专利技术的一个方面，提供一种含伊拉米肽的猪精子冷冻保存稀释剂，由单独包装的稀释剂
A、
稀释剂
B
和稀释剂
C
组成；其中，稀释剂
A
由伊拉米肽（
Elamipretide
）
、
葡萄糖
、
乳糖
、
青霉素
、
链霉素
、
卵黄
、
二甲基亚砜和超纯水组成；稀释剂
B
由伊拉米肽
、
葡萄糖
、
乳糖
、
青霉素
、
链霉素
、
卵黄
、
二甲基亚砜
、
甘油和超纯水组成；稀释剂
C
由葡萄糖
、
三羟甲基氨基甲烷
、
柠檬酸
、
咖啡因
、
碳酸氢钠
、EDTA
‑
2Na、
丙酮酸钠和超纯水组成
。
[0008]上述稀释剂各原料的质量配比如下：稀释剂
A
：伊拉米肽
9.60mg、
葡萄糖
35g、
乳糖
35g、
青霉素
0.60g、
链霉素
1.00g、200mL
卵黄
、3vol%
二甲基亚砜以及超纯水；稀释剂
A
的制备方法：先将伊拉米肽溶解二甲基亚砜中，再加入葡萄糖
、
乳糖
、
青霉素
、
链霉素和卵黄，使用超纯水溶解并定容至
1000mL
制得，放置
3℃
～
5℃
下保存；稀释剂
B
：伊拉米肽
9.60mg、
葡萄糖
35g、
乳糖
35g、
青霉素
0.60g、
链霉素
1.00g、200mL
卵黄
、3vol%
二甲基亚砜
、7vol%
甘油以及超纯水；稀释剂
B
的制备方法：先将伊拉米肽
溶解二甲基亚砜中，再加入葡萄糖
、
乳糖
、
青霉素
、
链霉素和卵黄，使用超纯水溶解并定容至
1000mL
制得，放置
3℃
～
5℃
下保存；稀释剂
C
：葡萄糖
25g、
三羟甲基氨基甲烷
9g、
柠檬酸
3g、
咖啡因
4.5g、
碳酸氢钠
3g、
乙二胺四乙酸二钠（
EDTA
‑
2Na
）
4.3g
及丙酮酸钠
0.42g
，以及超纯水；稀释剂
C
的制备方法：使用超纯水溶解并定容至
1000mL
制得，放置
3℃
～
5℃
下保存
。
[0009]进一步地限定，所述卵黄为鸡蛋黄，且经过
10000r/min
离心处理并去除沉淀
。
[0010]稀释剂
A
和稀释剂
B
中二甲基亚砜不超过稀释剂总量的
3vol%。
[0011]本专利技术还提供一种含伊拉米肽的猪精子冷冻保存稀释剂冷冻保存猪精子的方法，所述方法是按下述步骤进行的：
S1:
分别将稀释剂
A
和稀释剂
B
的
pH
值调整至
7.2
～
7.4
后在
35℃
～
37℃
下预温；
S2:
原始精液离心处理后去除上清液，立刻使用稀释剂
A
稀释精子至4亿
/mL
，放置
16℃
～
18℃
环境中平衡
30
分钟；
S3:
然后加入与稀释剂
A
等量的稀释剂
B
稀释精子至2亿
/mL
，放置
3℃
～
5℃
环境中平衡
60
分钟；
S4:
然后用冻精细管灌装封口机将稀释后的精子灌装入细管中，梯度降温至
‑
115℃
～
‑
125℃
并维持
55
秒～
65
秒，之后迅速投入液氮保存；
S5:
将稀释剂
C
在
35℃
～
37℃
下预温，冻精细管由液氮中取出后迅速放置
48℃
～
52℃
中持续
15
秒，之后取出并于等量稀释剂
C
混匀，放置在
35℃
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种含伊拉米肽的猪精子冷冻保存稀释剂，其特征在于，所述保存稀释剂由单独包装的稀释剂
A、B
和
C
组成；稀释剂
A
由伊拉米肽
、
葡萄糖
、
乳糖
、
青霉素
、
链霉素
、
卵黄
、
二甲基亚砜和超纯水组成；稀释剂
B
由伊拉米肽
、
葡萄糖
、
乳糖
、
青霉素
、
链霉素
、
卵黄
、
二甲基亚砜
、
甘油和超纯水组成；稀释剂
C
由葡萄糖
、
三羟甲基氨基甲烷
、
柠檬酸
、
咖啡因
、
碳酸氢钠
、EDTA
‑
2Na、
丙酮酸钠和超纯水组成
。2.
根据权利要求1所述的含伊拉米肽的猪精子冷冻保存稀释剂，其特征在于，稀释剂
A
中，伊拉米肽的浓度为
9.60mg/L
，葡萄糖的浓度为
35g/L
，乳糖的浓度为
35g/L
，青霉素的浓度为
0.60g/L
，链霉素的浓度为
1.0g/L
，卵黄的浓度为
200mL/L
，二甲基亚砜的浓度为
3vol%
；稀释剂
B
中，伊拉米肽的浓度为
9.60mg/L
，葡萄糖的浓度为
35g/L
，乳糖的浓度为
35g/L
，青霉素的浓度为
0.60g/L
，链霉素的浓度为
1.0g/L
，卵黄的浓度为
200mL/L
，二甲基亚砜的浓度为
3vol%
，甘油的浓度为
7vol%
；稀释剂
C
中，葡萄糖的浓度为
25g/L
，三羟甲基氨基甲烷的浓度为
9g/L
，柠檬酸的浓度为
3g/L
，咖啡因的浓度为
4.5g/L
，碳酸氢钠的浓度为
3g/L
，
EDTA
‑
2Na
的浓度为 4.3g/L
，丙酮酸钠的浓度为
0.42g/L。3.
根据权利要求1所述的含伊拉米肽的猪精子冷冻保存稀释剂，其特征在于，稀释剂
A、
稀释剂
B、
稀释剂
C
均放置
3℃
～
5℃
条件下保存
。4.
根据权利要求1所述的含伊拉米肽的猪精子冷冻保存稀释剂，其特征在于，所述卵黄为鸡蛋黄，经过离心处理并去除沉淀
。5.
根据权利要求1所述的含伊拉米肽的猪精子冷冻保...

【专利技术属性】
技术研发人员：李井春，郭庆，李雁冰，尹国安，崔卫国，魏国生，王赫川，王骞，李天峰，
申请(专利权)人：黑龙江八一农垦大学，
类型：发明
国别省市：