一种高纯度粪便病原体制造技术

本发明专利技术属于分子生物学检测技术领域，涉及一种高纯度粪便病原体

【技术实现步骤摘要】
一种高纯度粪便病原体DNA或RNA提取试剂盒


[0001]本专利技术属于分子生物学检测
，尤其是涉及一种高纯度粪便病原体
DNA
或
RNA
提取试剂盒
。

技术介绍

[0002]肠道菌群是机体的重要组成部分，包括潜在能源的发酵
、
短链脂肪酸的产生以及致癌物质的激活或失活，其菌群结构数量和种类的变化与机体的健康状况息息相关，我们有必要通过各种分析方法来研究宿主与体内菌群之间的相互作用关系
。
[0003]与培养方法相比，微生物临床样本的分子分析可以提供各种优势，包括检测更广泛的目标生物，以及更高的灵敏度和特异性
。
与血液或其他临床样本相比，粪便中复杂的微生物菌群
、
可变的稠度以及可变的内源性和膳食成分使病原体
DNA/RNA
提取特别困难，然而从这种异质复杂的样本中提取高纯度的
DNA/RNA
，是下游进一步分析的关键
(
如感染病原体的
PCR
分析
)。
针对粪便病原体的检测方法包括免疫学检测法
、
生物传感器法和核酸检测法三种
。
免疫学检测法利用抗原
‑
抗体杂交反应，能够快速检测目标物；生物传感器检测法主要依靠光学和电化学分析技术，样品制备简单，能够实现间测系统的微型化；而核酸检测法通过对目标序列进行放大扩增，可以检测目标病原体的特定基因，检测准确度高
。r/>[0004]目前，对于粪便病原体提取试剂，存在组分复杂
、
提取纯度低以及不能适用于不同形状粪便的技术问题
。

技术实现思路

[0005]本专利技术针对现有技术的不足，提供了一种高纯度粪便病原体
DNA
或
RNA
提取试剂盒
。
组成成分简单
、
操作方法简便且提取核酸准确率高，能够快速
、
简便及高纯度的实现粪便
DNA/RNA
的提取
。
[0006]为此，本专利技术提供了一种高纯度粪便病原体
DNA
或
RNA
提取试剂盒，包括样本前处理液
、
裂解液和洗涤液1，所述样本前处理液包括醋酸钾
、
盐酸胍和
Tween80。
[0007]在本专利技术的一些实施方式中，所述样本前处理液中醋酸钾的浓度为
0.5
‑
1.5M。
在一些例子中，所述样本前处理液中醋酸钾的浓度可以但不限于为
0.5M、1.0M
或
1.5M。
优选地，所述样本前处理液中醋酸钾的浓度为
1.0M。
[0008]在本专利技术的一些实施方式中，所述样本前处理液中盐酸胍的浓度为
1.0
‑
5.0M
，在一些例子中，所述样本前处理液中盐酸胍的浓度可以但不限于为
1M、2M、3M、4M
或
5M。
优选地，所述样本前处理液中盐酸胍的浓度为
5.0M。
[0009]在本专利技术的一些实施方式中，所述样本前处理液中
Tween80
的质量百分含量为
15
％
‑
25
％
。
在一些例子中，所述样本前处理液中
Tween80
的质量百分含量可以但不限于为
15
％
、20
％或
25
％
。
[0010]在本专利技术的一些实施方式中，所述裂解液包括
Tris
‑
HCl、EDTA、
盐酸胍
、
十二烷基硫酸钠
、NP
‑
40
和异丙醇
。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，所述裂解液中
Tris
‑
HCl
的浓度为
0.05
‑
0.2M。
在一些例子中，所述裂解液中
Tris
‑
HCl
的浓度可以但不限于为
0.05M、0.1M、0.15M
或
0.2M。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，所述裂解液中
EDTA
的浓度为
0.02
‑
0.6M。
在一些例子中，所述裂解液中
EDTA
的浓度可以但不限于为
0.02M、0.1M、0.2M
或
0.6M。
[0013]在本专利技术的一些实施方式中，所述裂解液中盐酸胍的浓度为
4.0M。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中，所述裂解液中十二烷基硫酸钠的质量百分含量为1％
‑4％
。
在一些例子中，所述裂解液中十二烷基硫酸钠的质量百分含量可以但不限于为
1.0
％
、2
％或
4.0
％
。
优选地，所述裂解液中十二烷基硫酸钠的质量百分含量为2％
。
[0015]在本专利技术的一些实施方式中，所述裂解液中
NP
‑
40
的质量百分含量为
0.5
％
‑2％
。
在一些例子中，所述裂解液中
NP
‑
40
的质量百分含量可以但不限于为
0.5
％
、1.0
％或
2.0
％
。
优选地，所述裂解液中
NP
‑
40
的质量百分含量为
1.0
％
。
[0016]在本专利技术的一些实施方式中，所述裂解液中异丙醇的体积比为
30
％
‑
70
％
。
在一些例子中，所述裂解液中异丙醇的体积比可以但不限于为
30
％
、40
％
、60
％或
70
％
。
[0017]在本专利技术的一些实施方式中，所述洗涤液1包括
Tris
‑
HCl、EDTA、
碳酸氢钠
、
盐酸胍和异丙醇
。
[0018]在本专利技术的一些实施方式中，所述洗涤液1中
Tris
‑
HCl
的浓度为
0.04
‑
0.2mol/L。
在一些例子中，所述洗涤液1中
Tris
‑
HCl
的浓度可以但不限于为
0.04M、0.16M
或
0.2M。
[0019]在本专利技术的一些本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种高纯度粪便病原体
DNA
或
RNA
提取试剂盒，包括样本前处理液
、
裂解液和洗涤液1，其特征在于，所述样本前处理液包括醋酸钾
、
盐酸胍和
Tween80。2.
根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述样本前处理液中醋酸钾的浓度为
0.5
‑
1.5M
；所述样本前处理液中盐酸胍的浓度为
1.0
‑
5.0M
；所述样本前处理液中
Tween80
的质量百分含量为
15
％
‑
25
％
。3.
根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述裂解液包括
Tris
‑
HCl、EDTA、
盐酸胍
、
十二烷基硫酸钠
、NP
‑
40
和异丙醇
。4.
根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述裂解液中
Tris
‑
HCl
的浓度为
0.05
‑
0.2M
；所述裂解液中
EDTA
的浓度为
0.02
‑
0.6M
；所述裂解液中盐酸胍的浓度为
4.0M
；所述裂解液中十二烷基硫酸钠的质量百分含量为1％
‑4％；所述裂解液中
NP
‑
40
的质量百分含量为
0.5
％
‑2％；所述裂解液中异丙醇的体积比为
30
％
‑
70
％

【专利技术属性】
技术研发人员：李彤，汪康游，牛明月，卜振中，李红东，苗保刚，李明，
申请(专利权)人：西安天隆科技有限公司，
类型：发明
国别省市：