一种氟伐替尼中遗传毒性杂质水合肼的分离检测方法技术

本发明专利技术公开了一种氟伐替尼中遗传毒性杂质水合肼的分离检测方法

【技术实现步骤摘要】
一种氟伐替尼中遗传毒性杂质水合肼的分离检测方法


[0001]本专利技术属于药物分析化学领域，具体涉及氟伐替尼中遗传毒性杂质水合肼的分离检测方法
。

技术介绍

[0002]氟伐替尼是一种处于研究阶段的小分子多靶点激酶抑制剂，氟伐替尼可作用于血管内皮细胞生长因子受体（
VEGFR1/2/3
），纤维细胞生长因子受体（
FGFR1/2/3/4
）和转染期间重新排列（
RET
）等多个靶点，具有靶向治疗肝细胞癌（
hepatocellularcarcinoma
，
HCC
）的潜力
。
其药理作用机制是通过抑制
VEGF/VEGFR、FGF/FGFR
信号通路，从而控制肿瘤细胞生长
、
存活
、
增殖和迁移
。HCC
是最常见的恶性肿瘤之一，具有起病隐匿
、
进展快
、
复发早和预后差的临床特点；我国原发性肝癌发病率一直居高不下，约
90%
是肝细胞肝癌（
HCC
），严重威胁着国人生命健康，是一种临床急需的药物
。
用法用量：需根据
I
期临床和
II
期临床试验结果确定
。
[0003]NH2NH2·
H2O
ꢀꢀ
氟伐替尼水合肼水合肼常用于药物的合成，可作为还原剂，参与多种不同类型的药物合成
。<br/>水合肼可对肝
、
肾
、
血液等系统产生毒副作用，
ICHM7
有数据显示，水合肼具有致突变性，通常作为遗传毒性杂质控制
。
因此，要求药品中水合肼的残留量必须低于可接受限度以下
。
由于水合肼较活泼，分子量小，不含碳原子且极性较大，难以直接使用气相或液相对其进行检测；色谱
‑
质谱法虽然灵敏度高，但高昂的价格限制了它的推广使用
。
开发简单的衍生后
HPLC
检测方法，筛选出合适的衍生化试剂及衍生条件尤为重要
。
[0004]氟伐替尼合成路线中使用了具有遗传毒性风险的水合肼，因此，需对氟伐替尼中水合肼的残留量进行测定
。
根据
ICHM7
的要求，肼的
TD
50
值是
39
μ
g/day
，计算得到氟伐替尼中水合肼的限度为
1950ppm。
因氟伐替尼中还含有硝基苯
、
苯胺类等遗传毒性杂质，为了严格控制氟伐替尼产品的质量，将水合肼的限度收严至
50ppm。
[0005]本专利技术人在氟伐替尼中水合肼检测方法学研究过程中发现，采用芴甲氧羰酰氯为衍生试剂使氟伐替尼中的水合肼衍生成在
264nm
处有较强紫外吸收的产物，空白溶剂衍生及样品溶液衍生均在目标峰附近有较大干扰（结果见图1），且通过调整色谱条件无法改善分离
。
因此，开发专属性好
、
灵敏度高的检测方法对氟伐替尼中的遗传毒性杂质水合肼进行定量分析难度较大
。
[0006]
技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种氟伐替尼中遗传毒性杂质水合肼的分离检测方法，该方法对氟伐替尼中的水合肼能进行准确的定量检测，专属性好
、
灵敏度高，对氟伐替尼原料药及其制剂的质量控制具有重要的意义
。
[0008]为实现本专利技术的目的，提供如下实施方案
。
[0009]在一实施方案中，本专利技术的一种氟伐替尼中杂质水合肼的分离检测方法，该方法采用衍生后液相色谱法，包含以下步骤：1）将对照品水合肼和样品氟伐替尼分别用甲醇溶解，制备对照品溶剂和供试品溶液；2）在对照品溶液和供试品溶液中分别加入衍生试剂2‑
羟基
‑1‑
萘甲醛，在酸性条件下水浴加热至
40℃~60℃
进行衍生化反应，反应时间为
1h~5h
，反应完成后，制得衍生化的对照品溶液和供试品溶液；3）将衍生化的对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱系统中，在
405nm
吸收波长下进行定性或定量检测
。
[0010]优选的，上述本专利技术的分离检测方法，步骤2）中，所述水浴加热温度为
60℃
，所述反应时间为
3h
，所述酸性条件由加入的甲酸提供，甲酸体积百分比为
1.6%~4.0%
，优选为
2.4%。
[0011]上述本专利技术的分离检测方法，所述液相色谱条件如下：色谱柱：苯基己基键合硅胶色谱柱；流动相组成：流动相
A
为磷酸
‑
水，其体积比为
0.1:99.9
，流动相
B
为乙腈；流动相的流速：
0.9~1.1ml/min
；检测波长：
405nm
；柱温：
25℃~40℃
；进样量：5μ
l~100
μ
l
；上述本专利技术的分离检测的方法，所述液相色谱条件进一步包括洗脱参数：选自下列之一，1）梯度洗脱1，2）梯度洗脱2，3）等度洗脱：流动相
A
和流动相
B
的体积比为（
30~10
）
:
（
70~90
）
。
[0012]在一优选实施方案中，上述本专利技术的分离检测方法，所述色谱条件：流动相的流速为
1.0ml/min
，柱温为
40℃
，进样量为
20
μ
l
，所述等度洗脱法，其流动相
A
和流动相
B
的体积比为
20:80。
[0013]上述本专利技术的分离检测方法，具体包含以下操作步骤：
a)
衍生试剂：取2‑
羟基
‑1‑
萘甲醛适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每
1ml
中约含2‑
羟基
‑1‑
萘甲醛
5mg
的溶液，作为衍生试剂；
b)
对照品储备液的制备：取水合肼适量，精密称定，用甲醇稀释制成每
1ml
中约含水合肼
2.5
μ
g
的溶液，作为对照品储备液；
c)
对照品衍生溶液的制备：移取甲醇适量至量瓶中，随后分别精密移取对照品储备液
、
衍生试剂
、
甲酸适量至同一量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取适量溶液于顶空瓶，压盖密封，在恒温混匀仪上
60℃
振摇反应
3h
即得；
d)
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种氟伐替尼中杂质水合肼的分离检测方法，该方法采用衍生后液相色谱法，包含以下步骤：1）将对照品水合肼和样品氟伐替尼分别用甲醇溶解，制备对照品溶剂和供试品溶液；2）在对照品溶液和供试品溶液中分别加入衍生试剂2‑
羟基
‑1‑
萘甲醛，在酸性条件下水浴加热至
40℃~60℃
进行衍生化反应，反应时间为
1h~5h
，反应完成后，制得衍生化的对照品溶液和供试品溶液；3）将衍生化的对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱系统中，在
405nm
吸收波长下进行定性或定量检测
。2.
根据权利要求1所述的方法，步骤2）中，所述水浴加热温度为
60℃。3.
根据权利要求1所述的方法，步骤2）中，所述反应时间为
3h。4.
根据权利要求1所述的方法，步骤2）中，所述酸性条件由加入的甲酸提供，甲酸体积百分比为
1.6%~4.0%。5.
根据权利要求4所述的方法，所述甲酸体积百分比为
2.4%。6.
根据权利要求1所述的方法，所述液相色谱条件如下：色谱柱：苯基己基键合硅胶色谱柱；流动相组成：流动相
A
为磷酸
‑
水，其体积比为
0.1:99.9
，流动相
B
为乙腈；流动相的流速：
0.9~1.1ml/min
；检测波长：
405nm
；柱温：
25℃~40℃
；进样量：5μ
l~100
μ
l。7.
根据权利要求6所述的方法，所述液相色谱条件进一步包括洗脱参数：选自下列之一，1）梯度洗脱1，2）梯度洗脱2，3）等度洗脱：流动相
A
和流动相
B
的体积比为（
30~10
）
:
（
70~90
）
。8.
根据权利要求6所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪亚云，杨溦，曹亚明，傅谌成，邹春兰，张彦，刘强，雷皇书，
申请(专利权)人：重庆药友制药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：