一株伯克霍尔德菌及其应用制造技术

本申请提供了一株伯克霍尔德菌株BC11

【技术实现步骤摘要】
一株伯克霍尔德菌及其应用


[0001]本申请涉及微生物防治
，尤其是涉及一株具有降解玉米赤霉烯酮的伯克霍尔德菌，其兼具抑菌效果；同时还涉及由该菌株制作的生物防治剂，以及生物防治剂在饲料脱毒的应用。

技术介绍

[0002]我国是养殖大国，对饲料的需求旺盛。然而，由于饲料所具有的营养成分，使霉菌等有害微生物污染普遍存在于饲料的制备、贮存、运输等各个过程。有害微生物对饲料的污染除其自身代谢对饲料营养成分的耗用外，还包括其繁殖、代谢过程中产生的毒素物质。常见于饲料的毒素包括黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、麦角毒素、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮等。其中，玉米赤霉烯酮(F
‑
2毒素)区别于其他毒素在于其是小麦、大豆等谷物的一种内激素。
[0003]F
‑
2毒素是霉菌毒素中污染范围最广、毒性作用最大的霉菌毒素之一，在世界各地的谷物种植及其副产品中污染广泛。F
‑
2毒素具有雌激素样作用，易导致家畜流产或死胎，同时还可在畜禽体内积蓄而传递给食用者，导致动物或人体的急慢性中毒。
[0004]为去除F
‑
2毒素，目前已尝试了物理防控、化学降解、生物防治等多种途径。其中，生物法脱毒较之其余两种途径具有特异性，能更有效地保持饲料的营养成分。目前，采用生物法治理F
‑
2毒素的技术主要集中于酶制剂，如中国专利技术专利CN101903527B；涉及的菌株主要为芽孢菌属、杆菌属菌株如中国专利技术专利CN102406100B、CN102181376B。现有研究证明，饲料体系中的微生物及微生物与毒素间存在互作效应，构成了一个复杂的体系。现有技术均需在饲料使用时进行额外处理，无法应用于饲料的制备、贮存、运输过程。
[0005]如前所述，F
‑
2毒素的产生包括有害微生物代谢和植物体内积存两条途径。F
‑
2毒素具有较强的温度耐受能力，能够在120℃下保持4h不分解，因此，现有的单纯通过抑菌作用进行生物治理的方案，也无法适用于清除饲料中F
‑
2 毒素。

技术实现思路

[0006]本申请提供了一株伯克霍尔德菌，该菌是由专利技术人在自然环境中筛选得到的Burkholderia contaminans，菌株编号BC11
‑
1，已于2022年2月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.24417，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0007]首先，菌株BC11
‑
1具有降解F
‑
2毒素的能力，利用其生长代谢，可实现对 F
‑
2毒素的生物防治。
[0008]其次，菌株BC11
‑
1兼具抑制镰刀菌属真菌和降解F
‑
2毒素的能力。菌株 BC11
‑
1的生长代谢，一方面抑制了产F
‑
2毒素的主要有害微生物镰刀菌属真菌的正常代谢，使其产毒能力下降，另一方面还对已经存在的F
‑
2毒素进行降解，对F
‑
2毒素的来源以及存量进行同步治理。
[0009]再次，菌株BC11
‑
1还具有抑制产黄曲霉毒素的有害微生物以及降解黄曲霉毒素B1
的能力。现有研究已证明，饲料体系中的微生物以及微生物与毒素间存在互作效应。菌株BC11
‑
1对饲料中含量最多、危害最大的两类有害微生物的抑制及其所产毒素的降解，通过单一菌株实现多项功能，有利于减少饲料整体防治处理所需药剂的投入种类，进一步提高饲料防治技术的安全性。
[0010]由于菌株BC11
‑
1兼具抑菌和解毒能力，因此，可在饲料生产、流通前期即投入该菌株，使其持续发挥抑菌、解毒作用，有利于饲料营养成分的保持，同时，也无须在饲料使用时进行额外处理，保持饲料正常的使用流程。
[0011]本申请还提供了菌株BC11
‑
1的全培养液、胞外代谢物作为生物防治剂的应用以及制备上述生物防治剂的方法。
[0012]菌株BC11
‑
1全培养液生物防治剂中含有菌株BC11
‑
1及其胞外代谢物，具体制作方法包括：将菌株BC11
‑
1采用LB固体培养基活化、LB液体培养基培养获得种子液，再由种子液制备菌液浓度不低于1
×
108cfu/mL的全培养液。
[0013]为便于保藏、使用，还可采用冻干技术对上述全培养液进行冻干处理，制备粉剂生物防治剂，控制每克粉剂中活菌总浓度为1
×
10
11
CFU。
[0014]为了提高生物防治剂的安全性，还可制备菌株BC11
‑
1胞外代谢物生物防治剂，具体制作方法是将前述全培养液进行低温离心后，取上清液经微孔滤膜过滤除菌。
[0015]本申请一实施例中公开了采用上述生物防治剂对饲料进行浸泡以除菌、解毒的应用。
[0016]如前所述，F
‑
2毒素是某些植物体的内激素，植物体内会积蓄F
‑
2毒素。虽然植物体内积蓄毒素量不大，但对于牛等需要大量采食并伴反刍的家畜仍具有较大的威胁。本申请另一实施例中公开了采用上述生物防治剂对植物体进行浸泡解毒的应用。对植物体的解毒，能够进一步提高饲料的安全性。
[0017]本申请还提供了获得更高F
‑
2毒素降解效果的菌株BC11
‑
1的培养方法，具体是在进行菌株BC11
‑
1种子液培养时，在LB液体培养基中加入额外碳源，碳源采用甘油、蔗糖、甘露醇中的一种或几种的配合。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本申请或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0019]图1展示了本申请实施例2中公开的菌株BC11
‑
1全培养液生物防治剂对多种有害微生物的生长抑制效果，其中，CK为使用无菌水进行的对照实验；
[0020]图中，
[0021]1‑
5号培养基中分别接种了齐整小核菌(Sclerotiumrolfsii)、灰葡萄孢(Botrytiscinerea)、变红镰刀菌(Fusariumincarnatum)、黄曲霉菌(Aspergillusflavus)、拟茎点霉(Phomopsisasparagi)，
[0022]7‑
10号培养基中分别接种了禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)、立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)、链格孢菌(Alternariatenuissima)、稻弯孢菌(Curvularia本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株伯克霍尔德菌，其特征在于，为Burkholderia contaminans菌株BC11
‑
1，已在2022年2月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No. 24417。2.采用权利要求1所述伯克霍尔德菌降解玉米赤霉烯酮的应用。3.采用权利要求1所述伯克霍尔德菌抑制镰刀菌属真菌并降解玉米赤霉烯酮的应用。4.采用权利要求1所述伯克霍尔德菌同时抑制真菌、降解黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的应用。5.一种生物防治剂，其特征在于，为权利要求1所述伯克霍尔德菌的全培养液或权利要求1所述伯克霍尔德菌的胞外代谢物。6.根据权利要求5所述的一种生物防治剂，其特征在于，由以下步骤制得：S1.采用LB固体培养基活化权利要求1所述伯克霍尔德菌，获得活化菌；S2.采用LB液体培养基培养步骤S1所得的活化菌，获得种子液；S3.采用步骤S2的种子液制备菌液浓度不低于1
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【专利技术属性】
技术研发人员：华丽霞，何炼，代顺冬，蒋秋平，况再银，孙小芳，曾华兰，张敏，韦树谷，叶鹏盛，赖佳，黄玲，张骞方，盛玉珍，刘勇，
申请(专利权)人：四川省农业科学院经济作物育种栽培研究所，
类型：发明
国别省市：