一种产广谱抗菌肽的肠膜明串珠菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及动物养殖领域，具体公开了一种抗菌肽及其制备与在动物饲料添加剂中的应用

【技术实现步骤摘要】
一种产广谱抗菌肽的肠膜明串珠菌及其应用


[0001]本专利技术属于生物工程
，具体是一种产广谱抗菌肽的肠膜明串珠菌及其应用
。

技术介绍

[0002]随着生活质量的不断提高和全球经济一体化，食品安全已成为一个世界性的挑战和全球重要的公共卫生问题
。
动物性食品安全已经成为全世界关注的焦点，其中抗生素残留问题是影响乳
、
肉制品安全的重要因素之一
。
近年来，由于抗生素在动物生产过程中的过度使用，导致动物机体紊乱，肠道微生态平衡被破坏，动物机体的自身抵抗力下降，同时也导致动物产品和环境中出现大量抗生素残留，使致病菌的耐药性增强，危害人类健康
。
目前，抗生素在饲料业中已面临着被淘汰或禁用的局面
。
早在
1986
年瑞士就开始限制部分抗生素用作饲料添加剂，欧盟在
2006
年全面禁止将抗生素作为饲料添加剂用于饲料中
。
我国也在
2020
年全面禁止饲料中添加抗生素
。
这样一来，影响较为严重的就是养殖行业与饲料行业
。
因此，研发安全且高效的新型饲料添加剂来替代传统抗生素具有重要意义
。
[0003]抗菌肽
(Antimicrobial peptides
，
AMP)
是生物体内经诱导产生的一种具有生物活性的小分子多肽，分子量在
2000
～
7000
>左右，由
20
～
60
个氨基酸残基组成，其是机体天然免疫防御系统的重要组成部分
。
抗菌肽的作用机理不同于抗生素，抗生素通常是通过作用于细菌特定靶点来杀死细菌，而大部分抗菌肽是通过物理性吸附并迅速渗透和破坏菌膜来杀死细菌
。
抗菌肽还可以作用于微生物生物合成过程，如细胞壁合成
、DNA、
蛋白质以及蛋白质折叠等
。
与抗生素相比，抗菌肽的抗菌能力更具有广谱性
。
此外，由于抗菌肽易被蛋白酶酶解，在动物体内不易残留，因此其不易产生耐药性
。
抗菌肽生物学活性高
、
绿色无残留
、
不易产生耐药性病原菌，是动物生产中较为合适的饲料添加剂
。
抗菌肽多从植物
、
昆虫等材料中提取，因提取原料受限和提取工艺复杂
、
成本较高，难以形成产业化
。
由于微生物生产抗菌肽有成本低
、
无毒害
、
周期短等明显优点，近年来微生物生产抗菌肽的研究开始兴起
。
通过微生物发酵，获取高活性的抗菌肽是具有重要前景的生产技术
。
此外，已有研究报道，乳酸菌源广谱抗菌肽已广泛应用于食品发酵与保鲜
。
但其在动物饲料添加剂方面的应用研究还鲜有报道
。

技术实现思路

[0004]本专利技术提出一种新型抗菌动物饲料添加剂及其制备方法与应用，本专利技术解决饲用抗生素在动物养殖业中造成的细菌耐药以及耐药性传递等问题，并进一步丰富天然抗菌物质和饲料添加剂的种类及用途
。
为了达到上述目的，本专利技术采取以下技术方案：
[0005]本专利技术提供了一株可以产具有广谱抑菌活性抗菌肽的肠膜明串珠菌
(Leuconostoc mesenteroides)
，所述肠膜明串珠菌保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：
CCTCC NO:M 20231423
，保藏日期为
2023
年8月
10
日
。
[0006]本专利技术的肠膜明串珠菌是从家庭自制泡菜中分离获得，并命名为
MCW02。
该菌革兰
氏染色为阳性，在
MRS
固体培养基中生长，菌落呈不透明的白色圆形小菌落，表面光滑，边缘整齐，菌落直径为1～
2mm。
[0007]上述肠膜明串珠菌
MCW02
可以产广谱抗菌肽
MCW02
‑
AMP
，其中抗菌肽的氨基酸序列为：
LHRLCGSPSIPLSFNLAVVLPRRNT。
[0008]本专利技术所述的菌株
MCW02
其代谢产物中抗菌肽热稳定性较好，
25
～
100℃
处理
1h
，抑菌活性几乎保持不变
。
酸碱稳定性强，在
pH 4
～9之间，抑菌活性几乎保持不变，在
pH 2
～4之间以及
pH 10
～
12
之间，抑菌活性均降低，但仍有抑菌活性
。
[0009]所述菌株
MCW02
其代谢产物中抗菌肽具有较强的抑菌作用，其发酵液不仅可以抑制革兰氏阳性细菌，同时对多种革兰氏阴性细菌具有较强的抑制作用：对金黄色葡萄球菌
、
大肠杆菌
、
沙门氏菌
、
肺炎克雷伯菌
、
蜡状芽孢杆菌
、
铜绿假单胞菌等细菌表现了较强的抑制作用；对青霉
、
木霉
、
黑曲霉
、
米曲霉等丝状真菌也能有效抑制
。
同时本专利技术所产抗菌肽其广谱抗菌活性不局限于以上病原菌种属
。
[0010]有益效果
[0011]本专利技术所述菌株
MCW02
所产广谱抗菌肽可用于解决饲用抗生素在动物养殖业中造成的细菌耐药及耐药性传递等问题，并进一步丰富了天然抗菌物质和饲料添加剂的种类
。
本专利技术通过平皿抑菌圈法验证菌株
MCW02
所产广谱抗菌肽作为功能性抗菌饲料添加剂的抑菌效果
。
[0012]本专利技术通过使用菌株
MCW02
产生广谱抗菌肽，可以在常规配合饲料中实现抑菌效果，而无需添加抗生素
。
这样既避免了增加饲料成本，也解决了药物残留的问题
。
在全球范围内，抗生素的使用已受到限制，导致饲料配方面临挑战
。
因此，加强畜牧业科技创新，提高生产效率和质量，是当前的重要任务
。
本专利技术所述广谱抗菌肽具有广阔的市场需求，预测在未来养殖中本专利技术所述广谱抗菌肽有望成为替代抗生素的最佳替代品
。
[0013]本专利技术采用肠膜明串珠菌生产广谱抗菌肽的生产周期短，成本低，且不受原料的限制，可大规模工业化生产，因此较动植物来源的抗菌肽具有明显优势
。
附图说明
[0014]图
1PCR
扩增产物凝胶电泳图，从左到右依次是
Marker、MCW02、MCW02。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一株产生广谱高效抗菌肽的肠膜明串珠菌菌种，所述菌株具体为肠膜明串珠菌
(Leuconostoc mesenteroides)MCW02
，于
2023
年8月
10
日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：
CCTCC NO:M 20231423。2.
一种肠膜明串珠菌的制备方法，其特征在于，包括以下的步骤：以泡菜为菌源，在培养基中培养肠膜明串珠菌
。3.
根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述泡菜为酸白菜
。4.
一种权利要求1所述产广谱抗菌肽的肠膜明串珠菌，其特征在于：所述抗菌肽
MCW02
‑
AMP
的氨基酸序列为：
LHRLCGSPSIPL...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈刚，张灵梅，宋子博，
申请(专利权)人：湖南麦肯伟科技有限公司，
类型：发明
国别省市：