一种甲硫氨酸腺苷转移酶突变体及其应用制造技术

本申请涉及基因工程和酶工程领域，具体涉及一种甲硫氨酸腺苷转移酶突变体及其应用

【技术实现步骤摘要】
NO
：1所示的序列
。
[0008]在本申请的一些实施方式中，所述甲硫氨酸腺苷转移酶的突变体与野生型甲硫氨酸腺苷转移酶相比，能够提高甲硫氨酸腺苷转移酶的稳定性，优选为能够提高大肠杆菌生产的甲硫氨酸腺苷转移酶的稳定性
。
[0009]在本申请的一些实施方式中，所述甲硫氨酸腺苷转移酶的突变体的氨基酸序列，选自以下任一种：
[0010]1)
第
94
位的丝氨酸突变为缬氨酸
、
苯丙氨酸
、
或甘氨酸；
[0011]2)
第
124
位的苯丙氨酸突变为赖氨酸或丙氨酸；
[0012]3)
第
140
位的苏氨酸突变为亮氨酸
、
精氨酸
、
或天冬酰胺；
[0013]4)
第
172
位的谷氨酰胺突变为缬氨酸或组氨酸；
[0014]5)
第
225
位的异亮氨酸突变为甲硫氨酸或缬氨酸
。
[0015]在本申请的一些实施方式中，所述甲硫氨酸腺苷转移酶的突变体的氨基酸的序列包括如
SEQ ID NO
：
2、SEQ ID NO
：
3、SEQ ID NO
：
4、SEQ ID NO
：
5、SEQ ID NO
：
6、SEQ ID NO
：
7、SEQ ID NO
：
8、SEQ ID NO
：
9、SEQ ID NO
：
10、SEQ ID NO
：
11、SEQ ID NO
：
12、
或
SEQ ID NO
：
13
所示的序列
。
优选地，所述甲硫氨酸腺苷转移酶的突变体的氨基酸的序列如
SEQ ID NO
：
6、SEQ ID NO
：
10、
或
SEQ ID NO
：
12
所示
。
[0016]本申请第二方面提供一种分离的多核苷酸，编码前述的甲硫氨酸腺苷转移酶突变体
。
[0017]本申请第三方面提供一种构建体，含有前述的多核苷酸
。
[0018]本申请第四方面提供一种宿主细胞，含有前述的构建体或基因组中整合有前述的多核苷酸
。
[0019]本申请第五方面提供了一种甲硫氨酸腺苷转移酶的生产方法，包括适于上述甲硫氨酸腺苷转移酶突变体表达的条件下，培养宿主细胞获得所述甲硫氨酸腺苷转移酶
。
[0020]本申请第六方面提供了前述的甲硫氨酸腺苷转移酶的突变体
、
前述的核苷酸
、
前述的构建体
、
或前述的宿主细胞在制备检测产品和
/
或
S
‑
腺苷甲硫氨酸中的应用
。
[0021]在本申请的一些实施方式中，检测产品为同型半胱氨酸检测产品
。
[0022]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0023]通过对甲硫氨酸腺苷转移酶随机突变和饱和突变的方法获得了
12
种稳定性显著提高的突变体，其中3种稳定性提高超过
50
％，其余介于
20
％
‑
50
％之间
。
这些稳定性提高的甲硫氨酸腺苷转移酶突变体有助于解决其实际应用过程中不稳定的问题
附图说明
[0024]图1显示为甲硫氨酸腺苷转移酶突变体表达纯化结果示意图
。
其中，泳道1为
MAT
‑
F124A
‑
上清，泳道2为
MAT
‑
F124A
‑
沉淀，泳道3为
MAT
‑
F124A
‑
洗脱，泳道4为
MAT
‑
Q172V
‑
上清，泳道5为
MAT
‑
Q172V
‑
沉淀，泳道6为
MAT
‑
Q172V
‑
洗脱，泳道7为
MAT
‑
I225M
‑
上清，泳道8为
MAT
‑
I225M
‑
沉淀，泳道9为
MAT
‑
I225M
‑
洗脱；
Marker
从上到下分别是：
97KD、66KD、43KD、31KD、20KD、14KD。
[0025]图2显示为甲硫氨酸腺苷转移酶突变体的稳定性结果示意图
。
具体实施方式
[0026]为了使本专利技术的专利技术目的
、
技术方案和有益效果更加清晰，下面结合实施例对本专利技术作进一步说明
。
应理解，所述实施例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围
。
下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法，熟悉此技术的人士可由本说明所揭露的内容容易地了解本申请专利技术的其他优点及功效
。
[0027]本申请的专利技术人经过大量探索研究，意外发现了一种甲硫氨酸腺苷转移酶突变体，上述甲硫氨酸腺苷转移酶突变体与野生型甲硫氨酸腺苷转移酶相比，甲硫氨酸腺苷转移酶的稳定性显著提高，从而可以被应用于工业
SAM
的生产以及临床检测
HCY
在血液中的含量，在此基础上完成了本专利技术
。
[0028]本申请提供一种甲硫氨酸腺苷转移酶突变体，所述甲硫氨酸腺苷转移酶的突变体的氨基酸序列相对于野生型甲硫氨酸腺苷转移酶的氨基酸序列，其第
94
位
、
第
124
位
、
第
140
位
、
第
172
位和第
225
位中的一位或多位氨基酸发生突变，突变后的氨基酸选自缬氨酸
、
苯丙氨酸
、
甘氨酸
、
赖氨酸
、
丙氨酸
、
亮氨酸
、
精氨酸
、
天冬酰胺
、
组氨酸或甲硫氨酸
。
野生型甲硫氨酸腺苷转移酶的氨基酸序列如
SEQ ID NO
：1所示，核苷酸序列如
SEQ ID NO
：
14
所示，具体序列如下：
[0029]MAKHLFTSESVSEGHPDKIADQISDAVLDAILEQDPKARVACETYVKTGMVLVGGEITT
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种甲硫氨酸腺苷转移酶突变体，其特征在于，所述甲硫氨酸腺苷转移酶突变体的氨基酸序列相对于野生型甲硫氨酸腺苷转移酶的氨基酸序列，其第
94
位
、
第
124
位
、
第
140
位
、
第
172
位和第
225
位中的一位或多位氨基酸发生突变，突变后的氨基酸选自缬氨酸
、
苯丙氨酸
、
甘氨酸
、
赖氨酸
、
丙氨酸
、
亮氨酸
、
精氨酸
、
天冬酰胺
、
组氨酸或甲硫氨酸；所述野生型甲硫氨酸腺苷转移酶的氨基酸序列包括如
SEQ ID NO
：1所示的序列
。2.
如权利要求1所述的甲硫氨酸腺苷转移酶突变体，其特征在于，所述甲硫氨酸腺苷转移酶的突变体与野生型甲硫氨酸腺苷转移酶相比，能够提高甲硫氨酸腺苷转移酶的稳定性，优选为能够提高大肠杆菌生产的甲硫氨酸腺苷转移酶的稳定性
。3.
如权利要求1所述的甲硫氨酸腺苷转移酶突变体，其特征在于，所述甲硫氨酸腺苷转移酶的突变体的氨基酸序列，选自以下任一种：
1)
第
94
位的丝氨酸突变为缬氨酸
、
苯丙氨酸
、
或甘氨酸；
2)
第
124
位的苯丙氨酸突变为赖氨酸或丙氨酸；
3)
第
140
位的苏氨酸突变为亮氨酸
、
精氨酸
、
或天冬酰胺；
4)
第
172
位的谷氨酰胺突变为缬氨酸或组氨酸；
5)
第
225
位的异亮氨酸突变为甲硫氨酸或缬氨酸
。4.
如权利要求3所述的甲硫氨酸腺苷转移酶突变体，其特征在于，所述甲硫氨酸腺苷转移酶的...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴赞，朱飞云，陆婷，
申请(专利权)人：上海蓝园生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：