一种四水合辅羧酶的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种四水合辅羧酶的制备方法，主要特征为焦磷酸与脱水剂在加热条件下与维生素Ｂ１进行反应，得到四水合辅羧酶。该方法具有提高产品收率、降低生产成本、提高产品质量、降低环境污染等优势。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及四水合辅羧酶的制备方法。
技术介绍
四水合辅羧酶(Cocarboxylase Tetrahydrate)为维生素类药，又名四水合硫胺焦 磷酸酯，在体内参与糖代谢中丙酮酸和a-酮戊二酸的氧化脱羧反应，是糖类代谢所必需， 缺乏时，氧化受阻形成丙酮酸，乳酸堆积，并影响机体能量供应，其症状主要表现在神经系 统、心血管系统和消化系统方面等。临床上常用于脚气病或Wernicke脑病的治疗。亦可用 于四水合辅羧酶缺乏引起的周围神经炎、消化不良等的辅助治疗。四水合辅羧酶化学名为 4-甲基-3--5-(2-焦磷酸酰氧乙基)噻唑鎗四水合物。结构为 1937年，K. Lohmann和Ph. Sch皿ster从发酵粉中以氯化维生素焦磷酸酯的 形式分离出辅羧酶。同年，Stern和Hofer利用维生素B工和三氯氧磷反应制备了氯化维 生素Bi焦磷酸酯 。 1938年，文献报道了利用维生素 B工与焦磷酸钠与磷酸的混合溶液反应制备硫胺焦磷酸酯，通过利用磷鸨酸溶液与大量的有机溶剂处理 得到硫胺焦磷酸酯，收率10%左右。1940年，文献报道了利用维生素B工类似物5-溴化乙 烯-噻唑和磷酸银反应制备了氯化维生素Bi焦磷酸酯，该方法中，硫胺焦磷酸酯以银盐的形式析出，用硫化氢除去银离子，然后用 氯化氢处理得到氯化硫胺焦磷酸酯。 US2991284、US5047223公开了维生素Bi与磷酸和五氧化二磷混合反应制备得到辅 羧酶粗品混合物并使混合物经过弱碱性离子交换树脂和阳离子交换树脂纯化得到四水合 辅羧酶的方法；CN1887891A公开了一种以磷酸与五氧化二磷在加热条件下与维生素B工反 应得到辅羧酶粗品，粗品再分别通过弱碱性阴离子交换树脂、弱酸性阳离子交换树脂纯化， 再经结晶处理制得高纯度四水合辅羧酶(含量大于99% )的方法。 现有技术多以磷酸为起始原料，其纯化工艺多需要大量有机溶剂处理或有毒气 体，或反应温度高，不利于环境保护，技术本身生产可行性差，收率较低，产品质量不稳定， 成本较高。 JP昭49-14751也公开了一种辅羧酶衍生物的制备方法，即通过维生素B工的盐与 焦磷酸在脱水縮合剂无水金属盐，例如Zn、Al和Mg的盐酸盐，Mn和Na的硫酸盐的作用下， 在10(TC以上搅拌15-10分钟制备辅羧酶。但在实际操作过程中，发现该方法实用性不强，反应几乎无法正常进行。因此寻找一种反应迅速，可重复性强的方法十分必要。 本专利技术克服了现有技术的不足，反应由焦磷酸代替磷酸参与反应，并且筛选出效果较好的脱水剂，通过该方法的使用降低了反应温度，解决了反应的不可行性，低效率、低收率、产品质量不稳定等，使反应可控性更强，收率更高，纯度更高，HPLC检测含量99%以上，单个杂质0. 5 %以内，总杂质1. 0 %以内。并有效降低了对环境的污染。
技术实现思路
本专利技术的提供了一种简单、经济和技术上操作性强、产率高、纯度高的方法来制备 四水合辅羧酶。所述制备方法包括以下步骤 通过焦磷酸与脱水剂在加热条件下与维生素B工反应，脱水剂为五氧化二磷、三氯 氧磷、浓硫酸之一或其任意混合物，优选是五氧化二磷。 该反应中维生素B"脱水剂、焦磷酸的质量比可以为1 : 0. 5 3 : 2 10，优 选l : 1 3 : 3 10。在反应过程中加热条件可以控制在70°C 20(TC，优选100°C 160°C。 为了得到纯度比较高的产品，在得到四水合辅羧酶后可进行精制，精制方法可以 为将四水合辅羧酶用水溶解，加入至与水不互溶的有机叔胺溶液，振摇，取水层，加至弱碱性阴离子交换树脂柱，纯化水洗脱，接收洗脱液，洗脱液加至酸性阳离子交换树脂柱，水洗 脱，接收洗脱液，合并紫外光检测有荧光部分，浓縮，结晶，得到四水合辅羧酶。其中酸性阳 离子交换树脂柱为强酸性阳离子交换树脂柱或弱酸性阳离子交换树脂柱。有机叔胺可为 三丁胺、三戊胺、三辛胺之一或其任意混合物，优选三辛胺。有机胺的溶液可为三丁胺、三戊 胺、三辛胺之一或其任意混合物与甲基异丁基甲醇的混合溶液，优选三辛胺与甲基异丁基 甲醇的混合溶液。 其纯化精制工艺可以为如CN1887891A所公开的纯化精制工艺，即将反应液得到的粗品，先置于大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂中，用纯化水洗脱，洗脱液置于弱酸性阳离子交换树脂中，用纯化水洗脱，收集洗脱液，经后处理结晶纯化得到四水合辅羧酶。 其纯化精制工艺可以为将反应液加入至与水可互溶的非水溶剂-水溶剂系统中使析出固体，取固体用水溶解，置于大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂中，用纯化水洗脱，洗脱液置于弱酸性阳离子交换树脂中，用纯化水洗脱，收集洗脱液，经后处理结晶纯化得到四水合辅羧酶。 所述的弱碱性阴离子交换树脂和酸性阳离子交换树脂为市售的商品树脂，其具 体型号可根据生产商的不同而不同，如弱碱性阴离子交换树脂的D301、D303、 D315、D335、 D311、D85、WA10、 IRA_76、 IRA-400型号；酸性阳离子交换树脂的732、 WK40、 HZD_2、 HD-8型 号。树脂柱的填充、预处理等为现有技术，一般按生产商提供的树脂使用说明书方法处理即 可。 为得到更高纯度和质量要求的四水合辅羧酶，尤其是满足某些特定制药的要求， 如注射剂与口服剂，即使对原料纯度要求如99%以上，其对原料的有关物质等质量指标有 不同的要求，其纯化精制工艺可以重复其中一或多个纯化工艺步骤，如"反应液加入至与水 可互溶的非水溶剂_水溶剂系统中使析出固体"、"固体用水溶解，加入至与水不互溶的有机 叔胺溶液，振摇，取水层"、"结晶"等工艺步骤可以为重复2次以上或其纯化工艺步骤互相结合多次以达到特定制剂对原料的要求。所述的四水合辅羧酶的制备方法，如将焦磷酸加入到反应器中，10(TC充分搅拌 1 2小时，加入维生素B"反应0. 5 1. 5小时，再加热到120°C ，加入五氧化二磷或三氯氧 磷、浓硫酸等，搅拌反应至薄层色谱法(TLC)检测原料点完全消失(展开剂如甲醇水 乙酸=2 : 1 : 0. 5)，冷却至5(TC以下，加入纯化水形成透明溶液。搅拌下将此溶液滴入 5°C以下无水乙醇或甲醇、丙酮、乙腈、异丙醇、四氢呋喃等溶液中，大量类白色固体析出，过滤，取固体，或取固体溶于纯化水中按以上操作重复一次，将所得固体溶于纯化水中，三辛胺-甲基异丁基甲醇溶液或三丁胺、三戊胺溶液萃取1 2次，取水溶液，装入弱碱性阴离 子交换树脂(如D301)柱中，纯化水洗脱，将洗脱液直接引入强酸性阳离子交换树脂(如 732)柱，纯化水洗脱，紫外检测洗脱液出现荧光时开始接收洗脱液，接收洗脱液至紫外检测 洗脱液没有荧光时停止接收洗脱液。洗脱液减压浓縮(温度不高于35°C )，向浓縮液中滴 入1 4倍量的无水乙醇或甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、异丙醇、四氢呋喃，大量白色固体析出， 过滤、干燥得类白色固体，即得，或浓縮液处理析出白色固体适量水溶解，再次加入无水乙 醇或甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、异丙醇、四氢呋喃使白色固体析出，过滤、干燥，即得。 本专利技术所述焦磷酸与脱水剂在加热条件下与维生素B工反应的反应终点判断，可以 为上述的TLC法，也可以为其他合适的方法，如可以为CN1887891A所述的反应至无游离氯 离子方法(反应液用0. 1M硝酸银溶液检测不本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种四水合辅羧酶的制备方法，其特征在于所述制备方法包括以下步骤：　　通过焦磷酸与脱水剂在加热条件下与维生素Ｂ１反应，所述的脱水剂为五氧化二磷、三氯氧磷、浓硫酸之一或其任意混合物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：曹志华，胡军，刘烽，常迪，张勇，
申请(专利权)人：北京京卫信康医药科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]