抗虫蛋白制造技术

本发明专利技术公开了一种抗虫蛋白

【技术实现步骤摘要】
抗虫蛋白Cry 1Ah胶体金免疫层析速测试纸条及其检测方法


[0001]本专利技术涉及生物工程领域，具体涉及到一种抗虫蛋白
Cry 1Ah
胶体金免疫层析速测试纸条及其检测方法
。

技术介绍

[0002]苏云金杆菌 (Bacillus thuringiensis
，
Bt) 是一种广泛存在的革兰氏阳性菌，该菌分泌的抗虫晶体蛋白是目前主要的生物农药
。
该抗虫晶体蛋白按照氨基酸序列相似性被分为两类：
Cry
蛋白和
Cyt
，其中
Cry
蛋白对多种有害昆虫（如鳞翅目
、
双翅目
、
鞘翅目昆虫）
、
线虫类和原生生物等的幼虫具有毒性
。Cry
蛋白已经被转入农作物使其具有抗虫性，目前转
Cry 蛋白基因的农作物主要有玉米
、
土豆
、
水稻
、
棉花等
。Cry 1Ah 蛋白是 Cry 蛋白中的一种
。
[0003]转基因技术的发展与进步推动了生物学的发展
。
转基因食品虽然能够满足人们对产量
、
抗虫性等方面的要求，但同时也对人类的生活带来了一些潜在的威胁，如某些基因导入宿主之后会使食品产生毒性；转基因食物产生过敏原，使人产生抗药性；食品的营养价值发生改变等
。
在进行转基因食品研究开发和商业化的同时，为了对转基因食品的安全性给予综合评估，使消费者能够快速区分转基因食品与天然食品，建立合适的方法对转基因食品中转基因成分进行鉴定与检测，能够促进农业转基因生物安全管理，保障人和动物以及微生物的安全，同时能够保护生态环境，促进农业转基因生物技术的进一步研究
。
为了对转基因作物或者其衍生物中 Cry 1Ah 蛋白进行快速的定性分析，研究开发
Cry 1Ah
胶体金免疫层析速测试纸条具有非常大的意义
。
[0004]免疫胶体金技术
(Immune colloidal gold technique) 是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术
。
胶体金是由氯金酸
(HAuCl4) 在还原剂如抗坏血酸
、
柠檬酸钠等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用而形成的一种稳定的胶体状态
。
胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性
。
胶体金标记技术是免疫层析快速诊断的核心技术，它以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体反应，其实质是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程
。
根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度
、
颗粒大小
、
形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学
、
组织学
、
病理学和细胞生物学等领域
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种用于转基因玉米抗虫蛋白
Cry 1Ah
检测的胶体金免疫层析速测试纸条及其检测方法，从而适用于转基因玉米及其产品中抗虫蛋白
Cry 1Ah
的现场快速检测以及安全性评价
。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供一种抗虫蛋白
Cry 1Ah
胶体金免疫层析速测试纸条，所述试纸条包括底板以及粘着在底板上，由底板一端向底板另一端设置并依次相连的样品
垫
、
金标垫
、
反应膜和吸水垫，其特征在于，所述金标垫包被抗虫蛋白
Cry 1Ah
单克隆抗体
‑
胶体金结合物，所述结合物中的抗虫蛋白
Cry 1Ah
单克隆抗体由保藏编号为
CGMCC No.45483
的杂交瘤细胞株
3C4 2E6 分泌得到
。
[0007]进一步，所述样品垫与所述金标垫相邻端
、
所述金标垫与所述反应膜相邻端，以及所述反应膜与所述吸水垫相邻端均重叠，各重叠部分宽度均为1‑
2mm。
[0008]进一步，所述样品垫与所述金标垫相邻端为所述样品垫叠放在所述金标垫上方，所述金标垫与所述反应膜相邻端为所述金标垫叠放在所述反应膜上方，所述反应膜与所述吸水垫相邻端为所述吸水垫叠放在所述反应膜上方
。
[0009]进一步，所述反应膜为硝酸纤维素膜，所述样品垫由玻璃纤维膜或滤纸制成，所述吸水垫由滤纸制成
。
[0010]进一步，所述反应膜上设有包被抗虫蛋白
Cry 1Ah
单克隆抗体的检测线和包被羊抗鼠
IgG 的质控线
。
[0011]进一步，所述反应膜上设有的包被抗虫蛋白
Cry 1Ah
单克隆抗体由保藏编号为
CGMCC No.45482
的杂交瘤细胞株
2G11 1C7
分泌得到
。
[0012]进一步，所述检测线和所述质控线间隔
0.5
‑
1.0cm。
[0013]杂交瘤细胞株
2G11 1C7
分泌得到抗体的可变区重链氨基酸序列如序列表中
SEQ ID NO
：1所示，可变区轻链氨基酸序列如序列表中
SEQ ID NO
：2所示；杂交瘤细胞株
3C4 2E6
分泌得到抗体的可变区重链氨基酸序列如序列表中
SEQ ID NO
：3所示，可变区轻链氨基酸序列如序列表中
SEQ ID NO
：4所示
。
具体序列为：
细胞株重链可变区氨基酸序列轻链可变区氨基酸序列
2G111C7VQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQSPGNKLEWLGYINYSGSTDYNPSLKSRMSINRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCAKFYYDWYFDVWGAGTTVTVSSDIVMSQSPSSLTVSVGEKVTMSCKSSQSLLYSYNQKNHLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVKAEDLAVYYCQQYYSSWTFGRGTKLEIKR3C42E6QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNAAFISRLSIRKDISKSQVFFKINSLRVNDTAIYYCATNHGGYDGAYFSYWGQGTLVTVSADILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQSIGTTIHWYQQRTNGSP本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种抗虫蛋白
Cry 1Ah
胶体金免疫层析速测试纸条，所述试纸条包括底板以及粘着在底板上，由底板一端向底板另一端设置并依次相连的样品垫
、
金标垫
、
反应膜和吸水垫，其特征在于，所述金标垫包被抗虫蛋白
Cry 1Ah
单克隆抗体
‑
胶体金结合物，所述结合物中的抗虫蛋白
Cry 1Ah
单克隆抗体由保藏编号为
CGMCC No.45483
的杂交瘤细胞株
3C4 2E6 分泌得到
。2.
根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述样品垫与所述金标垫相邻端
、
所述金标垫与所述反应膜相邻端，以及所述反应膜与所述吸水垫相邻端均重叠，各重叠部分宽度均为1‑
2mm。3.
根据权利要求2所述的试纸条，其特征在于，所述样品垫与所述金标垫相邻端为所述样品垫叠放在所述金标垫上方，所述金标垫与所述反应膜相邻端为所述金标垫叠放在所述反应膜上方，所述反应膜与所述吸水垫相邻端为所述吸水垫叠放在所述反应膜上方
。4.
根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述反应膜为硝酸纤维素膜，所述样品垫由玻璃纤维膜或滤纸制成，所述吸水垫由滤纸制成
。5.
根据权利要求1‑4之一所述的试纸条，其特征在于，所述反应膜上设有包被抗虫蛋白
Cry 1Ah
单克隆抗体的检测线和包被羊抗鼠
IgG 的质控线
。6.
根据权利要求5所述的试纸条，其特征在于，所述反应膜上设有的包被抗虫蛋白
Cry 1Ah
单克隆抗体由保藏编号为
CGMCC No.45482
的杂交瘤细胞株
2G11 1C7
分泌得到
。7.
...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘卫晓，宛煜嵩，金芜军，苗朝华，孟丽霞，王占超，王睿哲，董美，杨秀英，高进，王迪，赵伟玲，文婷婷，
申请(专利权)人：中国农业科学院生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：