一种核酸纯化工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种核酸纯化工艺，属于核酸纯化技术领域，该核酸纯化工艺包括如下步骤：第一步

【技术实现步骤摘要】
一种核酸纯化工艺


[0001]本专利技术属于核酸纯化
，具体涉及一种核酸纯化工艺
。

技术介绍

[0002]核酸是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此，核酸的纯化是分子生物学实验技术中最重要，也是最基础的技术
。
目前，磁珠法核酸纯化技术应用最广泛，
Fe
304
纳米粒子不仅具有纳米材料高比表面积
、
导电性好的特性而且具有磁性纳米材料的优点，具有良好的吸附性
。
但由于其也存在着分散性差
、
容易聚集等弊端，因此其使用也受到了一定的限制
。
[0003]现有中提取核酸用的生物磁珠粒径大，存在表面能小
、
核酸吸附效率低的问题；并且在研究中发现，现有方法制备磁性微球存在一定的局限性，例如制得的磁性微球悬浮性差，微球材料间团聚严重，静置容易聚沉，亲水性也较差，容易沾壁；并且在合成过程中需要使用大量的有机溶剂，造成废液处理成本高
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种核酸纯化工艺，以解决核酸吸附效率低的问题
。
[0005]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0006]一种核酸纯化工艺，包括如下步骤：
[0007]第一步
、
将尿素
、
十六烷基三甲基氯化铵和羧基化笼型聚倍半硅氧烷加入醋酸溶液中，搅拌
20min
，加入纳米纤维素，摇匀，烘干洗涤，除杂得到凝胶液；再将纳米磁性微球加入无水乙醇中，超声分散，加入氨水和上述凝胶液中，搅拌
6h
，磁性分离，洗涤，干燥
12h
，得到磁珠；向核酸样本中加入裂解液，静置3‑
5min
，再加入磁珠，混匀后，静置3‑
5min
；
[0008]第二步
、
磁场作用下，固定磁珠，过滤，洗涤2‑3次；
[0009]第三步
、
加入洗脱液，静置5‑
8min
，固定磁珠，过滤得到纯化后的核酸
。
[0010]优选地，尿素
、
十六烷基三甲基氯化铵
、
羧基化笼型聚倍半硅氧烷
、
醋酸溶液和纳米纤维素的用量比为
5g
：
0.8g
：
5mL
：
15mL
：
3g
；其中醋酸溶液浓度为
10
％
。
[0011]优选地，纳米磁性微球
、
无水乙醇
、
氨水和凝胶液的用量比为
0.4g
：
45mL
：
5mL
：
0.6mL。
[0012]优选地，纳米磁性微球为可溶性铁离子盐与含镍和含钴离子的盐中任意一种或两种制得
。
[0013]优选地，可溶性铁离子盐中铁的离子价态为二价或三价
。
[0014]优选地，羧基化笼型聚倍半硅氧烷通过如下步骤制备：
[0015]将八乙烯基笼型聚倍半硅氧烷和四氢呋喃加入蒸馏水中，超声
10min
，升温至
70℃
，加入过硫酸铵和亚硫酸氢钠，搅拌
5min
，加入丙烯酸，调节
pH
为
4.5
，反应
3h
，降温得到羧基化笼型聚倍半硅氧烷
。
[0016]优选地，八乙烯基笼型聚倍半硅氧烷
、
四氢呋喃
、
蒸馏水
、
过硫酸铵
、
亚硫酸氢钠和
[0033]将
1gFeO(OH)(CAS
号为
1310
‑
14
‑1，湖北万得化工有限公司
)
加入
200mL
浓度为6％的氨水中，
200℃
反应
24h
，冷却至室温，离心，蒸馏水洗涤至上层清液
pH
为7，再用无水乙醇洗涤，干燥，得到
Fe
304
纳米磁性微球
。
[0034]将实施例2‑3和对比例1中所得的磁性纳米微珠进行测试，采用
MPMX
‑
XL
‑7型磁学测量系统进行磁性测试，
Quanta600FEG
型场发射扫描电镜进行
SEM
表征，测试结果如表1所示：
[0035]表1[0036]项目饱和磁化强度
(emu/g)
粒径
(nm)
实施例
278.6940
‑
45
实施例
379.5540
‑
45
对比例
176.6640
‑
50
[0037]由表1可以看出，实施例2‑3中的纳米磁性微球具有超顺磁性，相比于对比例1中的磁性纳米微球，具有较高的顺磁性，且粒子更加均匀，分散性高
。
[0038]实施例4[0039]本实施例提供一种核酸纯化工艺，具体步骤如下：
[0040]将
5g
尿素
、0.8g
十六烷基三甲基氯化铵和
5mL
羧基化
POSS
加入
15mL
醋酸溶液，搅拌
20min
，加入
3g
纳米纤维素，摇匀，
80℃
烘干洗涤，按顺序分别置于无水乙醇
、
乙酸乙酯
、
正己烷中浸泡
6h
，得到凝胶液；再将
0.40g
实施例2中纳米磁性微球加入
45mL
无水乙醇中，超声
15min
，加入
5mL
氨水和
0.6mL
上述凝胶液中，搅拌
6h
，磁性分离，洗涤，干燥
12h
，得到磁珠；将核酸样本置于
EP
管中，加入裂解液，静置
5min
，再加入磁珠，混匀后，室温静置
5min
；磁场作用下固定磁珠，过滤，加入洗涤液，洗涤2‑3次；最后加入洗脱液，静置
5min
，固定磁珠，过滤得到纯化后的核酸
。
[0041]实施例5[0042]与实施例4不同仅在于：采用实施例3中的纳米磁性微球，得到纯化后的核酸，其余原料及步骤均与实施例4相同
。
[0043]对比例4[0044]与实施例4不同仅在于：采用对比例1中的纳米磁性微球，得到纯化后的核酸，其余原料及步骤均与实施例4相同
。
[0045]对比例5[0046]与实施例4不同本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种核酸纯化工艺，其特征在于，包括如下步骤：第一步
、
将尿素
、
十六烷基三甲基氯化铵和羧基化笼型聚倍半硅氧烷加入醋酸溶液中，搅拌
20min
，加入纳米纤维素，摇匀，烘干洗涤，除杂得到凝胶液；再将纳米磁性微球加入无水乙醇中，超声分散，加入氨水和上述凝胶液中，搅拌
6h
，磁性分离，洗涤，干燥
12h
，得到磁珠；向核酸样本中加入裂解液，静置3‑
5min
，再加入磁珠试剂，混匀后，静置3‑
5min
；第二步
、
磁场作用下，固定磁珠，过滤，洗涤2‑3次；第三步
、
加入洗脱液，静置5‑
8min
，固定磁珠，过滤得到纯化后的核酸
。2.
根据权利要求1所述的一种核酸纯化工艺，其特征在于，尿素
、
十六烷基三甲基氯化铵
、
羧基化笼型聚倍半硅氧烷
、
醋酸溶液和纳米纤维素的用量比为
5g
：
0.8g
：
5mL
：
15mL
：
3g
；其中醋酸溶液浓度为
10
％
。3.
根据权利要求1所述的一种核酸纯化工艺，其特征在于，纳米磁性微球
、
无水乙醇

【专利技术属性】
技术研发人员：刘宗文，雍金贵，刘奇，高恩，潘红，
申请(专利权)人：安徽瑞拜药业有限公司，
类型：发明
国别省市：