抗5型猪星状病毒的杂交瘤细胞株制造技术

本发明专利技术公开了抗5型猪星状病毒的杂交瘤细胞株

【技术实现步骤摘要】
抗5型猪星状病毒的杂交瘤细胞株、单克隆抗体及其识别的抗原表位肽和应用


[0001]本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种抗5型猪星状病毒的杂交瘤细胞株
、
单克隆抗体及其识别的抗原表位肽和应用
。

技术介绍

[0002]猪星状病毒
(Porcine astrovirus,PAstV)
属于星状病毒科，哺乳动物星状病毒属成员
。
它的靶器官是猪小肠，尤其是回肠，病毒感染后肠上皮细胞通透性增加，肠壁变薄，大量炎性细胞浸润
。
临床上可引起仔猪呕吐
、
腹泻
、
脱水等症状，与其他猪腹泻病毒引发的症状相似，不易区分，同时易发生混合感染，对养猪业造成了严重危害
。
目前已有大量的流行病学调查显示猪星状病毒在世界范围内广泛流行
。
与其他
RNA
病毒一样，猪星状病毒可产生遗传变异性，从而引起跨物种传播
。2022
年有研究发现
HAstV
和
PAstV
衣壳序列之间具有较高的相似性，表明在星状病毒的进化史中可能涉及人和猪的跨种传播
。
[0003]猪星状病毒是无囊膜二十面体单链正链
RNA
病毒，根据基因组的差异可分为五种基因型
(PAstVl
～
PAstV5)。
病毒基因组长度约为
7kb
，由5′
端非编码区
(5
>′
UTR)
，3个开放阅读框
(Open readiCapg frame,ORF)
即
ORF1a、ORF1b
和
ORF2
，3′
端非编码区
(3
′
UTR)
和
PolyA
尾组成
。ORF1a
和
ORF1b
参与编码与
RNA
转录和复制有关的非结构蛋白
(nonstructural protein,NSP)
，
ORF2
参与编码病毒结构蛋白衣壳蛋白
。
衣壳蛋白在病毒入侵
、
复制等过程中起到关键作用，可以与宿主细胞受体结合，刺激机体产生中和抗体，因此它是开发
PAstV
疫苗的靶点蛋白，也是研究
PAstV
入侵机制的关键蛋白
。
目前缺乏用于
PAstV5
诊断的新型抗体，因此本专利技术制备了针对
PAstV5
衣壳蛋白的单克隆抗体，可为后续抗病毒的研究，建立检测及诊断方法奠定基础
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种抗5型猪星状病毒的杂交瘤细胞株
、
单克隆抗体及其识别的抗原表位肽和应用，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术制备的单抗
6C6
特异性和反应性好，能够特异性识别
PAstV5
，与其他常见的猪肠道病毒没有交叉反应，可应用于实验室以及临床检测
。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0006]本专利技术提供一株杂交瘤细胞株，命名为
PAstV
‑
Cap
‑
6C6
，保藏编号为
CCTCC NO
：
C2023237。
[0007]本专利技术还提供一种所述杂交瘤细胞株分泌的抗5型猪星状病毒的单克隆抗体
6C6。
[0008]进一步地，所述单克隆抗体
6C6
与5型猪星状病毒的衣壳蛋白抗原特异性结合
。
[0009]进一步地，所述单克隆抗体
6C6
的重链亚型为
IgG1
，轻链亚型为
Kappa。
[0010]本专利技术还提供一种所述的单克隆抗体
6C6
的制备方法，利用所述杂交瘤细胞株分泌产生所述抗5型猪星状病毒的单克隆抗体
6C6。
[0011]进一步地，利用所述杂交瘤细胞株在小鼠腹腔中进行分泌增殖，对腹水进行分离
、
纯化，产生所述抗5型猪星状病毒的单克隆抗体
6C6。
[0012]本专利技术还提供一种所述的单克隆抗体
6C6
所识别的抗原表位肽，所述抗原表位肽的氨基酸序列为
NFVRQ。
[0013]进一步地，所述抗原表位肽的结构为
α
螺旋
。
[0014]本专利技术还提供一种所述的杂交瘤细胞株或所述的单克隆抗体
6C6
或所述的抗原表位肽在制备5型猪星状病毒的检测试剂或检测试剂盒中的应用
。
[0015]本专利技术还提供一种所述的杂交瘤细胞株或所述的单克隆抗体
6C6
或所述的抗原表位肽在制备防治感染5型猪星状病毒导致疾病的药物中的应用
。
[0016]本专利技术还提供一种所述的杂交瘤细胞株或所述的单克隆抗体
6C6
或所述的抗原表位肽在制备5型猪星状病毒的疫苗中的应用
。
[0017]本专利技术公开了以下技术效果：
[0018]本专利技术提供了一种抗5型猪星状病毒
(PAstV5)
衣壳蛋白
(Cap)
单克隆抗体
6C6
，经鉴定重链亚型为
IgG1
，轻链亚型为
Kappa
，其识别的抗原表位的氨基酸序列为
75
‑
NFVRQ
‑
79
，呈现
α
螺旋结构
。
本专利技术制备的单抗
6C6
特异性和反应性好，能够特异性识别
PAstV5
，与其他常见的猪肠道病毒没有交叉反应，可应用于实验室以及临床检测
。
附图说明
[0019]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图
。
[0020]图1是实施例中单克隆抗体
6C6
特异性鉴定的
IFA
图；
[0021]图2是实施例中单克隆抗体
6C6
特异性鉴定的
Westernblot
图；
[0022]图3是实施例中单克隆抗体
6C6
亚型鉴定图；
[0023]图4是实施例中单克隆抗体所识别抗原表位鉴定的
SDS
‑
PAGE
图；
[0024]图5是实施例中单克隆抗体所识别抗原表本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一株杂交瘤细胞株，其特征在于，保藏编号为
CCTCC NO
：
C2023237。2.
一种权利要求1所述杂交瘤细胞株分泌的抗5型猪星状病毒的单克隆抗体
6C6。3.
根据权利要求2所述的单克隆抗体
6C6
，其特征在于，所述单克隆抗体
6C6
与5型猪星状病毒的衣壳蛋白抗原特异性结合
。4.
根据权利要求3所述的单克隆抗体
6C6
，其特征在于，所述单克隆抗体
6C6
的重链亚型为
IgG1
，轻链亚型为
Kappa。5.
一种如权利要求2所述的单克隆抗体
6C6
的制备方法，其特征在于，利用所述杂交瘤细胞株分泌产生所述抗5型猪星状病毒的单克隆抗体
6C6。6.
根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，利用所述杂交...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡慧，魏战勇，胡艺欣，靳晓慧，郝晨琳，李泽辉，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：