一种利用不同寡链制造技术

本发明专利技术提供了一种利用不同寡链

【技术实现步骤摘要】
一种利用不同寡链DNA检测多个目标抗原的免疫PCR方法


[0001]本专利技术涉及免疫检测
，尤其涉及一种利用不同寡链
DNA
检测多个目标抗原的免疫
PCR
方法
。

技术介绍

[0002]乳腺癌
HER2
检测的重要价值得到临床及病理医师的普遍认同，其可作为乳腺癌患者重要预后指标，同时对治疗具有科学的预测价值，且为曲妥珠单抗靶向治疗靶点，切实提高其检测准确性尤为关键
。
但在临床检测过程中，尚未设定统一的检测方法和评价指标，检测的规范性和标准性较低，存在检测结果无法指导临床实践的情况
。
在乳腺癌
HER2
检测过程中，免疫组织化学法为常用检测方法，但是临床研究指出其检测结果容易受到主观判断和收到组织处理情况影响
。
而就检测结果稳定性而言，荧光原位杂交检测方法优势明显，但其检测费用较高，推广存在局限性，且荧光淬灭后结果无法长期保存，不利于临床研究工作开展
。
[0003]免疫
PCR
是一种抗原检测系统，将一段已知序列的
DNA
片段标记到抗原抗体复合物上，再用
PCR
方法将这段
DNA
扩增，然后用常规方法检测
PCR
产物
。
免疫
PCR
集
PCR
的高灵敏度与抗体和抗原反应的特异性于一体
。
其突出的特点是指数级的扩增效果带来了极高的敏感度，能检出浓度低至
2ng/L
的抗原物质，为现行任何一宗免疫定量方法所不及
。
[0004]但现有的免疫
PCR
主要用于目标抗原的定量检测，在对目标抗原进行定性检测时通常需要对目标抗原进行测序，操作复杂
、
时间长且费用高
。
或者通过多色免疫组织化学
(IHC)
的方法，这个方法不仅成本非常昂贵，操作复杂，而且每次最多可以检测6‑8种抗原，检测效率低
。
并且目前尚没有关于乳腺癌
HER2
免疫
PCR
检测的报道
。
[0005]CN104313153A
公开了用于免疫
PCR
中以同时检测样品中多种污染物的标记
DNA
组，每个标记
DNA
均由首序列
、
中间序列和尾序列组成，不同标记
DNA
的首序列相同
、
尾序列相同
、
中间序列的长度不同
。
利用
DNA
长度的不同检测不同的待测物
。
但该方法中标记
DNA
直接连接再待测物标准品上进行
PCR
扩增，由于待测物上连接的寡核苷酸的长度超过
80nt
，其成本和扩增难度会增加，扩增效率和准确度会降低，因此其长度会受到限制，导致同时检测不同待测物的数量受到限制，从而不利于大规模批量检测和筛选
。
而且，
CN104313153A
方法使用普通的凝胶电泳方法，其长度差别的分辨率非常低，导致不能区别太多的不同长度片段，限制了检测对象的通量；而且普通电泳方法在定量上也存在问题
。

技术实现思路

[0006]针对现有技术中所存在的不足，本专利技术提供了一种利用不同寡链
DNA
检测多个目标抗原的免疫
PCR
方法，其解决了现有技术中存在的免疫
PCR
进行大规模批量检测和筛选时目标检测物数量受限
、
扩增效率和准确度低的问题
。
[0007]本专利技术第一方面，提供一种利用不同寡链
DNA
检测多个目标抗原的免疫
PCR
方法，将不同长度的寡链
DNA
标记的不同抗体与多个目标抗原结合，形成抗原抗体复合物；将不同
(SEQ ID NO:6)。
[0029]在本专利技术的一实施方案中，所述片段
A、
片段
B
的核苷酸序列包括：
[0030]片段
A
：5‑
GACCGTTATGCACAGTTGAGGACACTTGGATGTGAGGAAC
‑
3(SEQ ID NO:7)
[0031]片段
B
：
[0032]3‑
CTGTGAACCTACACTCCTTGAATTGGCCTAATGTCATGCTGGGTGCTGCATG TATCCTGTCCGAATCG
‑
5(SEQ ID NO:8)。
[0033]在本专利技术的一实施方案中，所述片段
A、
片段
B
的核苷酸序列包括：
[0034]片段
A
：5‑
GACCGTTATGCACAGTTGAGCATCGACAGTTCGTAGACTC
‑
3(SEQ ID NO:9)
[0035]片段
B
：
[0036]3‑
GTAGCTGTCAAGCATCTGAGTCGAACTGAGACTAATGTGCTGCAGCTGTGGTC ATGTATCCTGTCCGAATCG
‑
5(SEQ ID NO:10)。
[0037]在本专利技术的一具体实施例中，所述片段
A、
片段
B
的核苷酸序列包括：
[0038]片段
A
：5‑
GACCGTTATGCACAGTTGAGCAAGGAGTGTAGGTTCACAG
‑
3(SEQ IDNO:11)
[0039]片段
B
：
[0040]3‑
GTTCCTCACATCCAAGTGTCTGCAGACTAATGTTCGAACTGAGCCTGTGGTT GCAGCATGTATCCTGTCCGAATCG
‑
5(SEQ ID NO:12)。
[0041]进一步地，不同长度的寡链
DNA
之间，片段
B
的第二互补序列区和片段
A
的第一互补序列区的核苷酸序列不相同，片段
B
的第二任意碱基序列区的长度不相同；片段
B
的第二引物接头序列区和片段
A
的第一引物接头序列区相同
。
[0042]进一步地，一个长度的
PCR
产物对应检测一个目标抗原，多个不同长度的
PCR
产物对应检测多个不同的目标抗原
。
[0043]本专利技术第二方面，提供一种用于检测多个目标抗原的免疫
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种利用不同寡链
DNA
检测多个目标抗原的免疫
PCR
方法，其特征在于，将不同长度的寡链
DNA
标记的不同抗体与多个目标抗原结合，形成抗原抗体复合物；将不同长度的寡链
DNA
标记的抗体抗原复合物进行
PCR
反应得到不同长度的
PCR
产物以检测多个目标抗原；其中，所述不同长度的寡链
DNA
包括相同长度的片段
A、
不同长度的片段
B
，片段
A
用于与抗体连接，片段
B
的长度可变，片段
B
和片段
A
部分互补形成杂交链，通过
overlap PCR
得到不同长度的寡链
DNA。2.
如权利要求1所述的一种利用不同寡链
DNA
检测多个目标抗原的免疫
PCR
方法，其特征在于，所述检测为毛细管电泳
。3.
如权利要求2所述的一种利用不同寡链
DNA
检测多个目标抗原的免疫
PCR
方法，其特征在于，对不同长度的寡链
DNA
标记的抗体抗原复合物进行毛细管电泳，通过电泳结果分析，得到标记抗体的种类和含量，计算目标抗原的种类和含量
。4.
如权利要求1所述的一种利用不同寡链
DNA
检测多个目标抗原的免疫
PCR
方法，其特征在于，片段
A
包括第一引物接头序列区
‑
第一任意碱基序列区
‑
第一互补序列区，所述第一引物接头序列区用于与抗体连接；片段
B
包括第二互补序列区
‑
第二任意碱基序列区
‑
第二引物接头序列区，所述第二互补序列区和第一互补序列区互为互补序列
。5.
如权利要求4所述的一种利用不同寡链
DNA
检测多个目标抗原的免疫
PCR
方法，其特征在于：不同长度的寡链
DNA
之间，片段
B
的第二互补序列区和片段
A
的第一互补序列区的核苷酸序列不相同，片段
B
的第二任意碱基序列区的长度不相同；片段
B
的第二引物接头序列区和片段
A
的第一引物接头序列区相同
。6.
如权利要求1所述的一种利用不同寡链
DNA
检测多个目标抗原的免疫
PCR
方法，其特征在于：一个长度的
PCR
产物对应检测一个目标抗原，多个不同长度的
PCR
产物对应...

【专利技术属性】
技术研发人员：施巍炜，
申请(专利权)人：特瑞福医疗科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：