一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法技术

本发明专利技术涉及活性肽提取技术领域，公开了一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，将动物眼球进行冷冻处理，并在低温条件下快速研磨成粉末状，以保持活性肽的完整性和稳定性，制备一种特殊的提取剂，该提取剂由多种天然有机溶剂和表面活性剂组成，其中成分和比例经过精确调配，以提高活性肽的提取效率和纯度，动物眼球粉末与特殊提取剂充分混合，并搅拌和震荡，特殊提取剂与动物眼球中的小分子活性肽发生选择性结合，将混合物进行离心和过滤，采用反相高效液相色谱的纯化技术对提取物进行纯化

【技术实现步骤摘要】
一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法


[0001]本专利技术涉及活性肽提取
，具体为一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法
。

技术介绍

[0002]活性肽，是一千多种肽的总称（如大豆肽，深海鱼皮肽，海参肽等是活性肽中的一种）
。
肽是两个或两个以上的氨基酸以肽键相连的化合物，在人体内起重要生理作用，发挥生理功能
。
具有活性的多肽称为活性肽，又称生物活性肽或生物活性多肽
。
目前，动物眼球中的小分子活性肽被广泛认为具有重要的生物活性和医药应用潜力
。
[0003]然而，现有的提取方法存在许多技术难题，提取效率低，操作步骤复杂，活性肽的提取数量较少，并且得到的活性肽纯度和稳定性不足
。
为此，需要设计相应的技术方案给予解决
。

技术实现思路

[0004]（一）解决的技术问题针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，解决了提取效率低，操作步骤复杂，活性肽的提取数量较少，并且得到的活性肽纯度和稳定性不足的技术问题
。
[0005]（二）技术方案为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，方法步骤包括如下：
S1、
冷冻研磨预处理：将动物眼球进行冷冻处理，并在低温条件下快速研磨成粉末状，以保持活性肽的完整性和稳定性；
S2、
特殊提取剂的制备：制备一种特殊的提取剂，该提取剂由多种天然有机溶剂和表面活性剂组成，其中成分和比例经过精确调配，以提高活性肽的提取效率和纯度；
S3、
提取过程：将
S1
中制备的动物眼球粉末与
S2
中的特殊提取剂充分混合，并在适当的温度和
pH
条件下进行搅拌和震荡，特殊提取剂与动物眼球中的小分子活性肽发生选择性结合，并将其从组织中释放；
S4、
分离过滤：经过一定时间的提取，将混合物进行离心和过滤，以去除残留的固体颗粒和杂质；
S5、
对提取物纯化：采用反相高效液相色谱的纯化技术对提取物进行纯化，以获得高纯度的小分子活性肽
。
[0006]优选的，步骤
S1
中，所述冷冻处理采用液氮罐进行液氮冷冻处理，冷冻处理温度控制在
‑
190℃
至
‑
200℃
之间；所述低温研磨采用低温研磨仪进行低温研磨，温度控制在
‑
80℃
至
‑
120℃
之间，并可在研磨过程中保持样品的低温状态
。
[0007]优选的，步骤
S2
中，所述天然有机溶剂包括有乙醇
、
丙酮和甲醇，所述表面活性剂包括有十二烷基硫酸钠
、
三十烷基磺酸钠和辛基糖苷，其中按重量分数为：乙醇
20
‑
40
份，丙酮
10
‑
30
份，甲醇5‑
15
份，十二烷基硫酸钠1‑5份，三十烷基磺酸钠
0.5
‑2份，辛基糖苷
0.1
‑1份
。
[0008]优选的，步骤
S3
中，所述混合装置采用震荡器作为实验室设备进行，搅拌和震荡的温度控制在
4℃
左右的低温条件下进行；
pH
条件控制在6‑8之间；所述震荡器由一个坚固的外壳构成，内部包含电机
、
震荡平台和控制面板，所述震荡器内部配备一个电机，通过电源供电，驱动震荡平台进行振动；所述震荡平台的表面较为平整，用于放置容器，包括有烧瓶或试管，由不锈钢的耐腐蚀材料制成；所述震荡器上配备有控制面板，用于设置和调整振动的参数，包括有振动频率
、
振幅和计时器，控制面板还包括显示屏，显示当前的操作状态和参数设置
。
[0009]优选的，步骤
S4
中，所述离心设备采用高速离心机进行离心操作，高速离心机通过产生高速旋转的离心力，将液体中的固体颗粒沉淀到管底；所述过滤设备在离心操作后，使用过滤设备进一步去除残留的固体颗粒和杂质，所述过滤设备中过滤器的孔径为
0.2
微米至
0.45
微米的滤膜
。
[0010]优选的，步骤
S5
中，对提取物进行纯化的方法步骤包括以下步骤：准备样品：将提取物进行适当的预处理，包括去除悬浮物
、
固体颗粒或杂质，使用离心
、
过滤或其他方法进行初步清除；选择纯化技术：根据样品的特性和纯化需求，选择反相高效液相色谱的纯化技术，实现目标化合物与杂质的有效分离；设计分离方案：根据所选择的纯化技术，设计分离方案，确定合适的流动相和梯度条件，通过试验和优化来确定最佳的分离条件；样品加载：将预处理后的提取物样品加载到纯化系统中，根据纯化技术的不同，采用填充柱
、
载样器或其他适当的装置进行样品的加载；进行纯化：根据设计的分离方案，进行纯化操作，确保流动相的稳定性和流速的控制，根据所选择的纯化技术，需要进行多次循环或梯度洗脱来获得目标化合物；监测和收集：通过检测器监测流出的溶液，以监控目标化合物的峰，根据所需纯化的目标，选择根据吸光度
、
荧光强度或其他检测信号来进行定量监测，在目标化合物的峰出现时，进行样品收集，以分数收集或时间窗口收集的方式；分析和验证：对纯化后的样品进行分析和验证，确保纯化后的样品符合预期的纯度和质量要求
。
[0011]优选的，步骤
S3
中，所述提取过程中引入超声波辅助脉冲提取，具体步骤如下：设备准备：准备一个超声波装置，用于产生高频率的超声波脉冲，确保设备的功率和频率可调节；提取条件优化：在混合物的搅拌和震荡过程中，通过超声波辅助脉冲提取，优化超声波的功率
、
频率和脉冲时间；超声波辅助脉冲提取：将混合物置于超声波装置中，设定适当的超声波参数，并施加脉冲；
分离和过滤：经过一定时间的超声波辅助脉冲提取，将混合物进行离心和过滤；对提取物纯化：采用反相高效液相色谱的纯化技术对提取物进行纯化
。
[0012]优选的，步骤
S3
中，在提取过程中引入分子印迹技术，以增强对小分子活性肽的选择性提取，具体步骤如下：分子印迹材料制备：根据目标小分子活性肽的结构特征，设计并合成分子印迹聚合物；分子印迹固相萃取：将分子印迹聚合物与提取物混合，并进行固相萃取，在适当的温度和
pH
条件下，目标活性肽与分子印迹聚合物中的识别空腔发生选择性结合；脱附和洗脱：通过调节脱附条件，将目标活性肽从分子印迹聚合物中脱附和洗脱；分离和过滤：经过分子印迹固相萃取后，将混合物进行离心和过滤，以去除残留的固体颗粒和杂质；对提取物纯化：采用反相高效液相本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，其特征在于，方法步骤包括如下：
S1、
冷冻研磨预处理：将动物眼球进行冷冻处理，并在低温条件下快速研磨成粉末状，以保持活性肽的完整性和稳定性；
S2、
提取剂的制备：制备一种提取剂，该提取剂由多种天然有机溶剂和表面活性剂组成，其中成分和比例经过精确调配，以提高活性肽的提取效率和纯度；
S3、
提取过程：将
S1
中制备的动物眼球粉末与
S2
中的提取剂充分混合，并在适当的温度和
pH
条件下进行搅拌和震荡，提取剂与动物眼球中的小分子活性肽发生选择性结合，并将其从组织中释放；
S4、
分离过滤：经过提取，将混合物进行离心和过滤，以去除残留的固体颗粒和杂质；
S5、
对提取物纯化：采用反相高效液相色谱的纯化技术对提取物进行纯化，以获得高纯度的小分子活性肽
。2.
根据权利要求1所述的一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，其特征在于：步骤
S1
中，冷冻处理采用液氮罐进行液氮冷冻处理，冷冻处理温度控制在
‑
190℃
至
‑
200℃
之间；低温研磨采用低温研磨仪进行低温研磨，温度控制在
‑
80℃
至
‑
120℃
之间，并可在研磨过程中保持样品的低温状态
。3.
根据权利要求1所述的一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，其特征在于：步骤
S2
中，所述天然有机溶剂包括有乙醇
、
丙酮和甲醇，所述表面活性剂包括有十二烷基硫酸钠
、
三十烷基磺酸钠和辛基糖苷，其中按重量分数为：乙醇
20
‑
40
份，丙酮
10
‑
30
份，甲醇5‑
15
份，十二烷基硫酸钠1‑5份，三十烷基磺酸钠
0.5
‑2份，辛基糖苷
0.1
‑1份
。4.
根据权利要求1所述的一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，其特征在于：步骤
S3
中，混合装置采用震荡器作为实验室设备进行，搅拌和震荡的温度控制在
4℃
的低温条件下进行；
pH
条件控制在6‑8之间；所述震荡器由一个坚固的外壳构成，内部包含电机
、
震荡平台和控制面板，所述震荡器内部配备一个电机，通过电源供电，驱动震荡平台进行振动；所述震荡平台的表面较为平整，用于放置容器，包括有烧瓶或试管，由不锈钢的耐腐蚀材料制成；所述震荡器上配备有控制面板，用于设置和调整振动的参数，包括有振动频率
、
振幅和计时器，控制面板还包括显示屏，显示当前的操作状态和参数设置
。5.
根据权利要求1所述的一种动物眼球中的小分子活性肽的提取方法，其特征在于：步骤
S4
中，离心设备采用高速离心机进行离心操作，高速离心机通过产生高速旋转的离心力，将液体中的固体颗粒沉淀到管底；过滤设备在离心操作后，使用过滤设备进一步去除残留的固体颗粒和杂质，过滤设备中过滤器的孔径为
0.2
微米至
0.4...

【专利技术属性】
技术研发人员：王树丙，高建林，
申请(专利权)人：好棣山东生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：