CD69制造技术

本发明专利技术涉及分子生物学和医药技术领域

【技术实现步骤摘要】
CD69用于白血病耐药性诊断及预后的用途


[0001]本专利技术涉及分子生物学和医药

。
具体而言，本专利技术涉及白血病的化疗耐药性标志物，以及使用所述标志物评估白血病化疗耐药性的方法
。
本专利技术还涉及白血病的预后标志物，以及使用所述标志物预测或监测白血病预后的方法
。

技术介绍

[0002]肿瘤患者通常对化疗药物产生显著应答，但仍残留耐药的肿瘤细胞，最终导致复发和患者生存率降低
。
化疗是急性髓系白血病
(AML)
的主要治疗策略，而
AML
是一种以骨髓中异常未成熟的造血细胞积累为特征的多克隆异质性血液肿瘤
。
目前
AML
病人的总体预后仍不理想，据美国
SEER
数据库统计，5年生存率仅为
30
％
。
化疗耐药导致病人难治复发是造成这一现状的主要原因，也是当前
AML
治疗中的重要挑战
。
约
60
～
85
％的
AML
患者在化疗后达到完全缓解，但
30
％以上的缓解患者仍会复发
。
通常认为，对化疗耐药的白血病细胞在缓解期的骨髓中残留
。
识别并监控和靶向清除该细胞群体，是评估化疗疗效
、
提前预警耐药甚至复发
、
改善预后的重要途径
。
目前主要采用形态学观察
、
表面抗原和基因突变的分子检测，判断缓解期肿瘤细胞的存在
。
然而，实际缺乏对临床病人中残留细胞的生物学认识，缺少特异性的诊断
、
监测和靶向干预的手段
。

技术实现思路

[0003]白血病干细胞
(leukemia stem cell,LSC)
在病人初诊细胞的移植小鼠
(PDX)
模型中被发现具有自我更新能力并且更为静息的特点，其转录表达印记
LSC17
的信号强与预后不良相关
(
包括总体生存率
/
无事件生存率的降低
、
复发率升高
、
化疗缓解率降低
)。LSC
在免疫表型
、
转录表达和功能特性方面具有高度异质性，主要富集在类似造血干细胞的
CD34+CD38
‑
白血病细胞
(HSC
‑
like)
中
。
[0004]CD69(
其别名为
AIM、EA1、MLR
‑
3、CLEC2C、GP32/28、BL
‑
AC/P26)
是由
CD69
基因编码的人类跨膜
C
型凝集蛋白，也是细胞表面蛋白
。
它是在人类
T
细胞和免疫系统中许多其他类型的细胞表达的一类早期激活标志物，也是
T
细胞分化和淋巴细胞滞留在淋巴器官的关键调控因子
。
[0005]本申请的专利技术人经过大量实验和反复摸索，出人意料地发现，表达
CD69
的
HSC
‑
like
细胞
(CD69+HSC
‑
like
细胞
)
与白血病化疗耐药性及预后显著相关，基于此进一步发现了
CD69
与白血病化疗耐药机制的密切联系
。
基于这些发现，本申请专利技术人开发了用于白血病化疗耐药性诊断及预后的生物标志物
(CD34+CD38
‑
CD69+
组合
)
以及基于该生物标志物的诊断方法
。
[0006]因此，在第一方面，本申请提供了检测试剂在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于评估患有白血病的受试者是否对化疗药物耐药；其中，所述检测试剂包含：
[0007](i)
能够检测
CD69
的表达的试剂；
[0008](ii)
能够检测
CD34
的表达的试剂；和，
[0009](iii)
能够检测
CD38
的表达的试剂
。
[0010]在第二方面，本申请还提供了检测试剂在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于预测或监测患有白血病的受试者的预后；其中，所述检测试剂包含：
[0011](i)
能够检测
CD69
的表达的试剂；
[0012](ii)
能够检测
CD34
的表达的试剂；和，
[0013](iii)
能够检测
CD38
的表达的试剂
。
[0014]在某些实施方案中，上述任一方面的用途中，所述能够检测
CD69
的表达的试剂为能够检测
CD69
蛋白或
CD69 mRNA
的试剂
。
[0015]在某些实施方案中，所述能够检测
CD69
的表达的试剂为能够检测
CD69
蛋白是否存在或其水平的试剂
。
[0016]在某些实施方案中，所述能够检测
CD69
的表达的试剂通过体外检测来测定
CD69
蛋白是否存在或其水平
。
[0017]在某些实施方案中，所述体外检测方法选自免疫学检测法
、
质谱法
、
光谱法
。
[0018]在某些实施方案中，所述免疫学检测选自酶联免疫吸附测定法
(ELISA)、
电化学免疫分析法
(ECIA)、
化学发光免疫分析法
(CLIA)、
电化学发光免疫分析法
(ECLIA)、
荧光免疫分析法
(FIA)、
放射免疫测定法
(RIA)。
[0019]在某些实施方案中，所述质谱为基质辅助激光解吸离子化质谱，例如基质辅助激光解析电离飞行时间质谱
(MALDI
‑
TOF
‑
MS)。
[0020]在某些实施方案中，所述光谱法为紫外可见分光光度法
。
[0021]在某些实施方案中，所述能够检测
CD69
的表达的试剂包含能够特异性结合
CD69
的抗体
。
[0022]在某些实施方案中，所述能够检测
CD69
的表达的试剂包含能够特异性结合
CD69
的抗体以及与所述抗体连接的可检测的标记
。
[0023]在某些实施方案中，所述能够检测
CD69本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
检测试剂在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于评估患有白血病的受试者是否对化疗药物耐药；其中，所述检测试剂包含：
(i)
能够检测
CD69
的表达的试剂；
(ii)
能够检测
CD34
的表达的试剂；和，
(iii)
能够检测
CD38
的表达的试剂
。2.
检测试剂在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于预测或监测患有白血病的受试者的预后；其中，所述检测试剂包含：
(i)
能够检测
CD69
的表达的试剂；
(ii)
能够检测
CD34
的表达的试剂；和，
(iii)
能够检测
CD38
的表达的试剂
。3.
权利要求1或2的用途，其中，所述能够检测
CD69
的表达的试剂为能够检测
CD69
蛋白或
CD69 mRNA
的试剂
。4.
权利要求3的用途，其中，所述能够检测
CD69
的表达的试剂为能够检测
CD69
蛋白是否存在或其水平的试剂；优选地，所述能够检测
CD69
的表达的试剂通过体外检测来测定
CD69
蛋白是否存在或其水平；优选地，所述体外检测方法选自免疫学检测法
、
质谱法
、
光谱法；优选地，所述免疫学检测选自酶联免疫吸附测定法
(ELISA)、
电化学免疫分析法
(ECIA)、
化学发光免疫分析法
(CLIA)、
电化学发光免疫分析法
(ECLIA)、
荧光免疫分析法
(FIA)、
放射免疫测定法
(RIA)
；优选地，所述能够检测
CD69
的表达的试剂包含能够特异性结合
CD69
的抗体；优选地，所述能够检测
CD69
的表达的试剂包含能够特异性结合
CD69
的抗体以及与所述抗体连接的可检测的标记；优选地，所述能够检测
CD69
的表达的试剂包含能够特异性结合
CD69
的抗体，以及特异性识别所述抗体的第二抗体；任选地，所述第二抗体还包括可检测的标记；优选地，所述可检测的标记选自酶
(
例如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶
)、
化学发光试剂
(
例如吖啶酯类化合物
)、
电化学发光试剂
(
例如三联吡啶钌
)、
电活性物质
、
荧光染料
(
例如
FITC、TRITC、PE、
德克萨斯红或花菁染料衍生物
(
例如
Cy7、Alexa 750))、
放射性核素
(
例如放射性碘
)、
生物素
。5.
权利要求3的用途，其中，所述能够检测
CD69
的表达的试剂为能够检测
CD69 mRNA
是否存在或其水平的试剂；优选地，所述能够检测
CD69
的表达的试剂通过体外检测来测定
CD69mRNA
是否存在或其水平；优选地，所述体外检测方法选自
qPCR、
核酸测序或杂交
、
质谱
、
色谱；优选地，所述能够检测
CD69
的表达的试剂包含特异性结合
CD69 mRNA
的引物和
/
或探针
。6.
权利要求1‑5任一项的用途，其中，所述能够检测
CD34
的表达的试剂为能够检测
CD34
蛋白或
CD34 mRNA
的试剂
。7.
权利要求6的用途，其中，所述能够检测
CD34
的表达的试剂为能够检测
CD34
蛋白是否
存在或其水平的试剂；优选地，所述能够检测
CD34
的表达的试剂通过体外检测来测定
CD34
蛋白是否存在或其水平；优选地，所述体外检测方法选自免疫学检测法
、
质谱法
、
光谱法；优选地，所述免疫学检测选自酶联免疫吸附测定法
(ELISA)、
电化学免疫分析法
(ECIA)、
化学发光免疫分析法
(CLIA)、
电化学发光免疫分析法
(ECLIA)、
荧光免疫分析法
(FIA)、
放射免疫测定法
(RIA)
；优选地，所述能够检测
CD34
的表达的试剂包含能够特异性结合
CD34
的抗体；优选地，所述能够检测
CD34
的表达的试剂包含能够特异性结合
CD34
的抗体以及与所述抗体连接的可检测的标记；优选地，所述能够检测
CD34
的表达的试剂包含能够特异性结合
CD34
的抗体，以及特异性识别所述抗体的第二抗体；任选地，所述第二抗体还包括可检测的标记；优选地，所述可检测的标记选自酶
(
例如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶
)、
化学发光试剂
(
例如吖啶酯类化合物
)、
电化学发光试剂
(
例如三联吡啶钌
)、
电活性物质
、
荧光染料
(
例如
FITC、TRITC、PE、
德克萨斯红或花菁染料衍生物
(
例如
Cy7、Alexa 750))、
放射性核素
(
例如放射性碘
)、
生物素
。8.
权利要求6的用途，其中，所述能够检测
CD34
的表达的试剂为能够检测
CD34 mRNA
是否存在或其水平的试剂；优选地，所述能够检测
CD34
的表达的试剂通过体外检测来测定
CD34mRNA
是否存在或其水平；优选地，所述体外检测方法选自
qPCR、
核酸测序或杂交
、
质谱
、
色谱；优选地，所述能够检测
CD34
的表达的试剂包含特异性结合
CD34 mRNA
的引物和
/
或探针
。9.
权利要求1‑8任一项的用途，其中，所述能够检测
CD38
的表达的试剂为能够检测
CD38
蛋白或
CD34 mRNA
的试剂
。10.
权利要求9的用途，其中，所述能够检测
CD38
的表达的试剂为能够检测
CD38
蛋白是否存在或其水平的试剂；优选地，所述能够检测
CD38
的表达的试剂通过体外检测来测定
CD38
蛋白是否存在或其水平；优选地，所述体外检测方法选自免疫学检测法
、
质谱法
、
光谱法；优选地，所述免疫学检测选自酶联免疫吸附测定法
(ELISA)、
电化学免疫分析法
(ECIA)、
化学发光免疫分析法
(CLIA)、
电化学发光免疫分析法
(ECLIA)、
荧光免疫分析法
(FIA)、
放射免疫...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡绍燕，王前飞，和夫红，江姝婷，张永平，
申请(专利权)人：中国科学院北京基因组研究所国家生物信息中心，
类型：发明
国别省市：